3.胸腔、腹腔及心包积液的显微镜检验1）细胞计数及形态观察(1）细胞计数：包括红、白细胞及间皮细胞等计数，可用红、白细胞计数法计数。若样本中细胞数很少，可直接将样本液滴入计数室计数，求出每升中细胞总数；若白细胞很多，则按血常规细胞计数法稀释后再计数。(2）白细胞分类计数：分类计数为细胞计数中的主要项目，检查方法可取经离心沉淀后的沉淀物推成薄涂片，迅速干燥后用瑞氏或姬姆萨氏染色。分类计数至少要查100个细胞。在一般样本中可以查到嗜中性分叶核粒细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、间皮细胞和少量巨嗜细胞。每种细胞用百分率报告。若有特殊细胞发现，如细胞形态大，核大而染色深、分裂相多见等，可视为癌细胞需进一步鉴定。(3）间皮细胞：大小15~30um，圆形，椭圆形或不规则。浆多，淡蓝色或淡紫红色，有时可有空泡。核在中心或偏位，多为一个核，也可见两个或多个核者。幼稚型核染色体较粗糙致密，核仁不易见到。间皮细胞可因各种原因（如炎症、在体内积存较久、抽取后未及时检查）而呈异形变或退行性变，使形态很不规则，有时甚至与恶性细胞难以区分，间皮细胞增多，表示浆膜刺激或受损。（4）组织细胞：它一般较白细胞略大，胞浆多呈泡沫状。在炎症情况下，大量出现中性粒细胞并常伴随组织细胞出现。2）临床意义一般低于0.1×10°个/L，以间皮细胞和淋巴细胞为主。（1）漏出液中细胞较少，（2）渗出液中细胞较多，一般高于0.2×10°个/，以中性粒细胞为主，常见于化脓性渗出液白细胞总数常高于1.0×10°个/L，在结核性浆膜炎早期的渗出液中，也可见大量中性粒细胞增加；以淋巴细胞为主，则提示慢性疾病（如结核性、肿瘤等），如用玫瑰花环试验测定胸水及外周血中T淋巴细胞，若胸水中与外周血中的T淋巴细胞数之比大于1时，可提示为肿瘤结核、胶原性疾病等特异性胸、腹水。在慢性淋巴细胞白血病、乳糜胸水时，淋巴细胞亦增多：嗜酸粒细胞增多，常见于变态反应（如过敏症）和寄生虫所致的渗出物（如虫移行致胸膜炎等）中。（3）因穿刺时往往都有损伤，所以任何积液中均可能有少量红细胞。若大量红细胞出现，可见于出血性渗出液。若无穿刺损伤，而有大量红细胞出现，则应考虑为肿瘤或结核性病变如怀疑为渗出液，则应将标本离心后取沉淀物，涂片作革兰氏染色，怀疑有结核性胸膜炎，可作抗酸染色查找抗酸杆菌4.胸腔、腹腔及心包积液的细菌学检验浆膜积液可见有结核杆菌、链球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、放线菌、厌氧菌和炭疽杆菌等，确定诊断需经细菌培养证实，必要时可进行动物试验。【临床意义】1．辨证病性积液检验的主要目的是鉴别液体的性质，即积液是渗出液还是漏出液，初步确定病性。二者的鉴别要点见表 210
10 3. 胸腔、腹腔及心包积液的显微镜检验 1）细胞计数及形态观察 (1) 细胞计数：包括红、白细胞及间皮细胞等计数，可用红、白细胞计数法计数。若样本中 细胞数很少，可直接将样本液滴入计数室计数，求出每升中细胞总数；若白细胞很多，则按 血常规细胞计数法稀释后再计数。 (2) 白细胞分类计数：分类计数为细胞计数中的主要项目，检查方法可取经离心沉淀后的沉 淀物推成薄涂片，迅速干燥后用瑞氏或姬姆萨氏染色。分类计数至少要查 100 个细胞。在一 般样本中可以查到嗜中性分叶核粒细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、间皮细胞和少量巨嗜细 胞。每种细胞用百分率报告。若有特殊细胞发现，如细胞形态大，核大而染色深、分裂相多 见等，可视为癌细胞需进一步鉴定。 (3) 间皮细胞：大小 15～30μm，圆形，椭圆形或不规则。浆多，淡蓝色或淡紫红色，有时可 有空泡。核在中心或偏位，多为一个核，也可见两个或多个核者。幼稚型核染色体较粗糙致 密，核仁不易见到。间皮细胞可因各种原因（如炎症、在体内积存较久、抽取后未及时检查） 而呈异形变或退行性变，使形态很不规则，有时甚至与恶性细胞难以区分，间皮细胞增多， 表示浆膜刺激或受损。 (4) 组织细胞：它一般较白细胞略大，胞浆多呈泡沫状。在炎症情况下，大量出现中性粒细 胞并常伴随组织细胞出现。 2）临床意义 （1）漏出液中细胞较少，一般低于 0.1×109 个/L，以间皮细胞和淋巴细胞为主。 （2）渗出液中细胞较多，一般高于 0.2×109 个/L，以中性粒细胞为主，常见于化脓性渗出液， 白细胞总数常高于 1.0×109 个/L，在结核性浆膜炎早期的渗出液中，也可见大量中性粒细胞 增加；以淋巴细胞为主，则提示慢性疾病（如结核性、肿瘤等）,如用玫瑰花环试验测定胸水 及外周血中 T 淋巴细胞，若胸水中与外周血中的 T 淋巴细胞数之比大于 1 时，可提示为肿瘤、 结核、胶原性疾病等特异性胸、腹水。在慢性淋巴细胞白血病、乳糜胸水时，淋巴细胞亦增 多；嗜酸粒细胞增多，常见于变态反应（如过敏症）和寄生虫所致的渗出物（如蛔虫移行致 胸膜炎等）中。 （3）因穿刺时往往都有损伤，所以任何积液中均可能有少量红细胞。若大量红细胞出现，可 见于出血性渗出液。若无穿刺损伤，而有大量红细胞出现，则应考虑为肿瘤或结核性病变。 如怀疑为渗出液，则应将标本离心后取沉淀物，涂片作革兰氏染色，怀疑有结核性胸膜炎， 可作抗酸染色查找抗酸杆菌。 4. 胸腔、腹腔及心包积液的细菌学检验 浆膜积液可见有结核杆菌、链球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、放线菌、厌氧菌和炭疽杆菌 等，确定诊断需经细菌培养证实，必要时可进行动物试验。 【临床意义】 1．辨证病性 积液检验的主要目的是鉴别液体的性质，即积液是渗出液还是漏出液，初步确 定病性。二者的鉴别要点见表 2
表 2 渗出液与漏出液的初步鉴别渗出液漏出液原因局部炎症所致非炎症性密度1.018以上1.015以下凝固性不易凝固易凝固蛋白30g／以下30g/以上李凡他试验阴性工阳性细胞数0.2×10/以上0.1×10/L以下急性感染以中性粒细胞为主细胞分类淋巴细胞、间皮细胞为主感染以淋巴细胞为主水细菌常有葡萄糖低于血糖与血糖一致2．确定诊断积液的检验有时可对疾病的确诊提供可靠的证据。如腹腔穿刺液中混有碎饲料是胃或肠破裂；混有尿液或有尿臭味，是膀胱破裂；穿刺液浓厚粘稠，则提示子宫破裂。3．判断预后在马疝痛疾病过程中，腹腔穿刺液由淡黄色透明变为红色时，往往是继发肠变位；若混有碎饲料且有酸臭味，呈酸性反应，则是胃或肠破裂，预后不良；在胸膜疾病过程中，穿刺液由浆液性转变为脓性或腐败性时，也多为预后不良
11 表 2 渗出液与漏出液的初步鉴别 项 目 渗 出 液 漏 出 液 原因 局部炎症所致 非炎症性 密度 1.018 以上 1.015 以下 凝固性 易凝固 不易凝固 蛋白 30g/L 以上 30g/L 以下 李凡他试验 阳性 阴性 细胞数 0.2×109 /L 以上 0.1×109 /L 以下 细胞分类 急性感染以中性粒细胞为主, 慢性 感染以淋巴细胞为主 淋巴细胞、间皮细胞为主 细菌 常有 无 葡萄糖 低于血糖 与血糖一致 2．确定诊断 积液的检验有时可对疾病的确诊提供可靠的证据。如腹腔穿刺液中混有碎饲料， 是胃或肠破裂；混有尿液或有尿臭味，是膀胱破裂；穿刺液浓厚粘稠，则提示子宫破裂。 3．判断预后 在马疝痛疾病过程中，腹腔穿刺液由淡黄色透明变为红色时，往往是继发肠变 位；若混有碎饲料且有酸臭味，呈酸性反应，则是胃或肠破裂，预后不良；在胸膜疾病过程 中，穿刺液由浆液性转变为脓性或腐败性时，也多为预后不良
实验五、尿液潜血的检验尿液中不能用肉眼直接观察出来的红细胞或血红蛋白叫做潜血(或隐血）。潜血可用化学方法加以检查。尿液潜血的检验是尿液化学检验的一个项目。通常健康动物的尿液不含有红细胞或血红蛋白【实验目的和要求】通过本实验的学习，要求学生了解尿液的采集和保存法，掌握尿液潜血检验的临床意义。【尿液的采集与保存】兽医临床的采尿法是在病畜排尿时用洁净干燥的容器直接接取尿液；或者装采尿袋接取尿液（对公畜）：或者用导尿管导尿（对母畜），要严格遵守消毒规则，导尿管口尽量细些且不可太粗糙，以免损伤尿道黏膜。收集好的尿液最好立即检验，如果不能及时检验，需加入防腐剂密封后置冰箱冷藏。常用防腐剂有硼酸（按IL尿液加2.5g）、甲苯或二甲苯（按1L尿液加2~3mL）。【方法】联甲苯胺法【原理】尿液中的血红蛋白或红细胞被酸破坏所产生的血红蛋白，有类似与过氧化氢酶的作用，它可以分解过氧化氢而产生新生态的氧，能使联甲苯胺氧化成联苯胺蓝，呈蓝绿色或蓝色【器材与试剂】小试管，滴管，普通滤纸，酒精灯，试管夹等。1%联甲苯胺甲醇溶液（0.5g邻联甲苯胺溶于50ml甲醇中，储于棕色瓶），过氧化氢乙酸溶液（冰醋酸1份与3%过氧化氢2份混合后储于棕色瓶)，乙醚，95%乙醇。【操作与结果判定】取1支小试管，加入1%联甲苯胺甲醇液和过氧化氢乙酸溶液各1ml混合，再加入2mL被检尿，立即观察。若呈现绿色或蓝色，则为阳性，表示尿中有血红蛋白存在：若保留原试剂颜色，则为阴性。根据颜色的深浅，用1~4个“+”号报告结果(绿色+，蓝绿色++，蓝色+++，深蓝色++++)。注意几分钟后会变为乌红紫色。【注意事项】1.尿液应先加热煮沸，以破坏可能存在的过氧化氢酶，防止产生假阳性。2.所用试管、滴管等器材，必须清洁。3．本法简便且比较灵敏，但当尿中含有大量磷酸盐时，可发生乳白色沉淀，使反应无法测出阳性结果。遇此情况，可改用尿的乙醚提取液（取尿液10mL置于试管中，加热煮沸以被坏可能存在的过氧化氢酶，待冷却后，加入冰醋酸10～15滴，使尿呈酸性，再加乙醚约3㎡L，加塞充分振摇，然后静置片刻，使乙醚层分离（如乙醚层呈胶状不易分离时，可加入95%乙醇数滴以促其分离），进行检验。【临床意义】血尿常见于泌尿系统的炎性疾病、泌尿器官的损伤以及一些传染性疾病（炭疽、钩端螺旋体病及出败病等）；血红蛋白尿常见于产后血红蛋白尿症、细菌性血红蛋白尿症、新生幼驹溶血性病、血型不符的输血之后、严重烧伤、光过敏症、铜和汞的中毒等。12
12 实验五、尿液潜血的检验 尿液中不能用肉眼直接观察出来的红细胞或血红蛋白叫做潜血(或隐血) 。潜血可用化学 方法加以检查。尿液潜血的检验是尿液化学检验的一个项目。通常健康动物的尿液不含有红 细胞或血红蛋白。 【实验目的和要求】 通过本实验的学习，要求学生了解尿液的采集和保存法，掌握尿液潜血 检验的临床意义。 【尿液的采集与保存】 兽医临床的采尿法是在病畜排尿时用洁净干燥的容器直接接取尿液；或者装采尿袋接取 尿液（对公畜）；或者用导尿管导尿（对母畜），要严格遵守消毒规则，导尿管口尽量细些且 不可太粗糙，以免损伤尿道黏膜。 收集好的尿液最好立即检验，如果不能及时检验，需加入防腐剂密封后置冰箱冷藏。常 用防腐剂有硼酸（按 1L 尿液加 2.5g）、甲苯或二甲苯（按 1L 尿液加 2～３mL）。 【方法】 联甲苯胺法 【原理】 尿液中的血红蛋白或红细胞被酸破坏所产生的血红蛋白，有类似与过氧化氢酶的作 用，它可以分解过氧化氢而产生新生态的氧，能使联甲苯胺氧化成联苯胺蓝，呈蓝绿色或蓝 色。 【器材与试剂】 小试管，滴管，普通滤纸，洒精灯，试管夹等。1%联甲苯胺甲醇溶液（0.5g 邻联甲苯胺溶于 50ml 甲醇中，储于棕色瓶）,过氧化氢乙酸溶液(冰醋酸 1 份与 3%过氧化氢 2 份混合后储于棕色瓶),乙醚,95%乙醇。 【操作与结果判定】取 1 支小试管，加入 1%联甲苯胺甲醇液和过氧化氢乙酸溶液各 1mL 混合， 再加入 2mL 被检尿，立即观察。若呈现绿色或蓝色,则为阳性，表示尿中有血红蛋白存在；若 保留原试剂颜色，则为阴性。根据颜色的深浅，用 1～4 个“＋”号报告结果(绿色＋，蓝绿 色＋＋，蓝色＋＋＋，深蓝色＋＋＋＋)。注意几分钟后会变为乌红紫色。 【注意事项】 1.尿液应先加热煮沸，以破坏可能存在的过氧化氢酶，防止产生假阳性。 2.所用试管、滴管等器材，必须清洁。 3．本法简便且比较灵敏，但当尿中含有大量磷酸盐时，可发生乳白色沉淀，使反应无法测出 阳性结果。遇此情况，可改用尿的乙醚提取液（取尿液 1 0mL 置于试管中，加热煮沸以破坏 可能存在的过氧化氢酶，待冷却后，加入冰醋酸 10～15 滴，使尿呈酸性，再加乙醚约 3 mL， 加塞充分振摇，然后静置片刻，使乙醚层分离（如乙醚层呈胶状不易分离时，可加入 95%乙醇 数滴以促其分离），进行检验。 【临床意义】 血尿常见于泌尿系统的炎性疾病、泌尿器官的损伤以及一些传染性疾病（炭疽、 钩端螺旋体病及出败病等）；血红蛋白尿常见于产后血红蛋白尿症、细菌性血红蛋白尿症、新 生幼驹溶血性病、血型不符的输血之后、严重烧伤、光过敏症、铜和汞的中毒等
实验六、尿中酮体的检验健康动物的尿一般只含微量的酮体，用一般的化学试剂无法检出。当机体代谢异常或患有某些疾病时，尿中会出现大量的酮体，这种尿液称为酮尿。临床实验室对尿液酮体的检验常用如下三种方法。Lange法【原理】酮体中的丙酮和乙酰乙酸在碱性溶液中与亚硝基铁氰化钠作用可产生紫红色的亚铁五氰化铁，这种产物在醋酸溶液内不但褪色，反而颜色会加深。【器材与试剂】试管，滴管，移液管等；5%亚硝基铁氰化钠溶液（此液应新配制，贮于棕色瓶中可保存1周），10%氢氧化钠溶液，20%醋酸液。【操作方法】取中试管1支，先加尿液5mL，随即加入5%亚硝基铁氰化钠溶液和10%氢氧化钠溶液各0.5mL(约10滴)，颠倒混合，再加20%醋酸约1mL（20滴），再颠倒混合，观察结【结果判断】尿液呈现红色者为阳性，加入20%醋酸后红色又消失者为阴性。根据颜色深浅的不同，可估计酮体的大约含量(mg%）。浅红色（+），约3~5；红色（++），约10~15；深红色（+++），约20~30；黑红色（++++），约40~60。、Rothera改良法【器材与试剂】白色瓷凹板，药匙，研玻钵等；将亚硝基铁氰化钠粉未10mg、硫酸铵20g以及无水碳酸钠20g研磨混合，密封保存【操作方法】取上述研磨好的粉末试剂约0.2~0.5g放在白色瓷凹板上，加2~3滴尿液混合。在数分钟内出现紫红色且不褪色的为阳性。三、试纸法可购商品尿液酮体检查试纸(单联或多联），浸入尿中取出，除去试纸上多余尿液，按规定时间与标准色板比较判定结果。四、临床意义1．酮尿主要见于：奶牛的酮病，奶山羊的妊娠毒血症，仔猪的低糖血症等；另外，动物长期饥饿、糖尿病、消瘦、长期处于麻醉态及恶性肿瘤等，尿中也会出现少量的丙酮。2.对尿中丙酮的定期检查，可作为动物疾病预后判断的依据。当尿中检出丙酮达3或4个“+”时，说明病很重，经过一段时间治疗，若升高的丙酮量仍不下降，多预后不良。反之，则预后良好。13
13 实验六、尿中酮体的检验 健康动物的尿一般只含微量的酮体，用一般的化学试剂无法检出。当机体代谢异常或患 有某些疾病时，尿中会出现大量的酮体，这种尿液称为酮尿。临床实验室对尿液酮体的检验 常用如下三种方法。 一、 Lange 法 【原理】酮体中的丙酮和乙酰乙酸在碱性溶液中与亚硝基铁氰化钠作用可产生紫红色的亚铁 五氰化铁，这种产物在醋酸溶液内不但褪色，反而颜色会加深。 【器材与试剂】 试管，滴管，移液管等；5%亚硝基铁氰化钠溶液（此液应新配制，贮于棕色 瓶中可保存 1 周），10%氢氧化钠溶液，20%醋酸液。 【操作方法】 取中试管 1 支，先加尿液 5 mL，随即加入 5%亚硝基铁氰化钠溶液和 10%氢氧化 钠溶液各 0.5 mL(约 10 滴)，颠倒混合，再加 20%醋酸约 1 mL (20 滴)，再颠倒混合，观察结 果。 【结果判断】 尿液呈现红色者为阳性，加入 20%醋酸后红色又消失者为阴性。根据颜色深浅 的不同，可估计酮体的大约含量(mg%)。浅红色（＋），约 3～5；红色（＋＋），约 10～15； 深红色（＋＋＋），约 20～30；黑红色（＋＋＋＋），约 40～60。 二、Rothera 改良法 【器材与试剂】 白色瓷凹板，药匙，研玻钵等；将亚硝基铁氰化钠粉未 10 mg、硫酸铵 20 g 以及无水碳酸钠 20 g 研磨混合，密封保存。 【操作方法】 取上述研磨好的粉末试剂约 0.2～0.5 g 放在白色瓷凹板上，加 2～3 滴尿液， 混合。在数分钟内出现紫红色且不褪色的为阳性。 三、试纸法 可购商品尿液酮体检查试纸(单联或多联)，浸入尿中取出，除去试纸上多余尿液，按规定 时间与标准色板比较判定结果。 四、临床意义 1．酮尿主要见于：奶牛的酮病，奶山羊的妊娠毒血症，仔猪的低糖血症等；另外，动物长期 饥饿、糖尿病、消瘦、长期处于麻醉态及恶性肿瘤等，尿中也会出现少量的丙酮。 2．对尿中丙酮的定期检查，可作为动物疾病预后判断的依据。当尿中检出丙酮达 3 或 4 个“+” 时，说明病很重，经过一段时间治疗，若升高的丙酮量仍不下降，多预后不良。反之，则预 后良好
实验七、矿物质代谢障碍时血清钙、磷及镁含量的测定一、血清钙含量的测定钙是机体内含量最多的阳离子，血液中的钙绝大部分存在于血浆中，血浆钙有非扩散性钙及扩散性钙两部分。非扩散性钙与蛋白质结合（大约1g蛋白质结合0.87mg的钙），约占血浆总钙的40%～50%；扩散性钙主要为离子钙（Ca"），还有小部分的钙盐（如柠檬酸钙，碳酸氢钙及其他有机酸钙盐等)。非扩散性钙与扩散性钙之间受H浓度和HCO浓度的影响，在生理状态下保持平衡，可用下式表示。Ca'+蛋白质Looal>蛋白质-Ca。【方法】乙二胺四乙酸二钠滴定法【原理】血清中钙离子在碱性溶液中与钙红指示剂结合成可溶性的复合物，使溶液呈淡黄色乙二胺四乙酸二钠盐（EDTANa）对钙离子的亲和力很大，能与该复合物中的钙离子络合，使指示剂重新游离，溶液呈现蓝色，以此作为滴定终点，计算出血清中钙的含量。【器材与试剂】1.器材碱式滴定管，三角烧瓶，移液管，容量瓶等：2.试剂1）钙标准液（0.1mgCa/mL）精确称取干燥碳酸钙（CaCO分析纯）250mg，加水40ml及1M盐酸6㎡L，慢慢加温至60使其溶解，冷却后移入1L容量瓶中，加蒸馏水至刻度。2）钙红指示剂，称取钙红0.1g，溶于甲醇20mL中3）乙二胺四乙酸二钠溶液：称取乙二胺四乙酸二钠（EDTANaz2）0.1g，加蒸馏水50mL，加1M氢氧化钠2mL，待完全溶解，加蒸馏水至100mL，将此溶液按下法进行标定：准确吸取钙标准液（0.1mgCa/mL）1.0mL，加入试管中，再加入0.2M氢氧化钠1.5mL及钙红指示剂2滴，混合，以上述配制的乙二胺四乙酸二钠溶液滴定，至呈浅蓝色为止，记录消耗的乙二胺四乙酸二钠溶液量，如用量恰为1mL，表示此溶液1mL相当于钙0.1mg，则可直接应用，如滴定时用量小于1mL，需进行适当稀释，以符合上述标准浓度，将滴定时用量代入下式，即可求出稀释时所需加入的蒸馏水量。要稀释的EDTAN,溶液量(ml)-要稀释的EDTANa,液量=需加入蒸馏水量（mL）滴定时EDTANa,溶液消耗量(ml)例：要将配制的EDTANaz2溶液100mL校正为标准浓度的EDTANa溶液，滴定时用量为0.8mL002-100=125-10025mL，即在配制的EDTANa2溶液100mL中加入则加入的蒸馏水量为：08蒸馏水25mL即可，稀释后再用钙标准液滴定一次。【操作】取待检血清0.25mL和0.2M氢氧化钠溶液2.5mL放入三角瓶，随后加入钙红指示剂2滴，混和，以EDTANa2溶液滴定至淡蓝色为止，记录EDTANa2溶液的消耗量14
14 实验七、矿物质代谢障碍时血清钙、磷及镁含量的测定 一、血清钙含量的测定 钙是机体内含量最多的阳离子，血液中的钙绝大部分存在于血浆中，血浆钙有非扩散性 钙及扩散性钙两部分。非扩散性钙与蛋白质结合（大约 1g 蛋白质结合 0.87mg 的钙），约占血 浆总钙的 40%～50%；扩散性钙主要为离子钙（Ca2+），还有小部分的钙盐（如柠檬酸钙，碳酸 氢钙及其他有机酸钙盐等）。非扩散性钙与扩散性钙之间受 H +浓度和 HCO3 —浓度的影响，在生 理状态下保持平衡，可用下式表示。 Ca Ca HCO + ⎯⎯⎯→ − − 2 蛋白质 3 蛋白质 。 【方法】 乙二胺四乙酸二钠滴定法 【原理】 血清中钙离子在碱性溶液中与钙红指示剂结合成可溶性的复合物，使溶液呈淡黄色。 乙二胺四乙酸二钠盐（EDTANa2）对钙离子的亲和力很大，能与该复合物中的钙离子络合，使 指示剂重新游离，溶液呈现蓝色，以此作为滴定终点，计算出血清中钙的含量。 【器材与试剂】 1．器材 碱式滴定管，三角烧瓶，移液管，容量瓶等； 2．试剂 1）钙标准液（0.1mg Ca/mL）精确称取干燥碳酸钙（CaCO3 分析纯）250mg，加水 40ml 及 1M 盐酸 6 mL，慢慢加温至 60 使其溶解，冷却后移入 1L 容量瓶中，加蒸馏水至刻度。 2）钙红指示剂，称取钙红 0.1g，溶于甲醇 20 mL 中。 3）乙二胺四乙酸二钠溶液：称取乙二胺四乙酸二钠（EDTANa2）0.1 g，加蒸馏水 50 mL，加 1M 氢氧化钠 2mL，待完全溶解，加蒸馏水至 100 mL，将此溶液按下法进行标定：准确吸取钙 标准液（0.1mg Ca/mL）1.0 mL，加入试管中，再加入 0.2M 氢氧化钠 1.5 mL 及钙红指示剂 2 滴，混合，以上述配制的乙二胺四乙酸二钠溶液滴定，至呈浅蓝色为止，记录消耗的乙二胺 四乙酸二钠溶液量，如用量恰为 1 mL，表示此溶液 1 mL 相当于钙 0.1 mg，则可直接应用， 如滴定时用量小于 1 mL，需进行适当稀释，以符合上述标准浓度，将滴定时用量代入下式， 即可求出稀释时所需加入的蒸馏水量。 2 2 2 ( ) ( ) EDTANa EDTANa ml EDTAN ml 要稀释的 滴定时 溶液消耗量 要稀释的 溶液量 − 液量=需加入蒸馏水量（mL） 例：要将配制的EDTANa2溶液100 mL校正为标准浓度的EDTANa2溶液，滴定时用量为0.8 mL， 则加入的蒸馏水量为： 0.8 100 -100=125-100=25 mL，即在配制的 EDTANa2 溶液 100 mL 中加入 蒸馏水 25 mL 即可，稀释后再用钙标准液滴定一次。 【操作】 取待检血清 0.25 mL 和 0.2 M 氢氧化钠溶液 2.5 mL 放入三角瓶，随后加入钙红指示 剂 2 滴，混和，以 EDTANa2 溶液滴定至淡蓝色为止，记录 EDTANa2 溶液的消耗量