南方农业学报 Journal of Southern agriculture2019,50(4):761-767 ISSN 2095-1191: CODE http://www.nfnyxb.com DOl:10.3969 J.Issn.2095-1191.2019.04.11 微生物菌剂和生防木霉菌对甘蓝黑腐病的 田间防效及其对甘蓝的促生作用 赵玳琳',卯婷婷',王廿,赵兴丽',娄璇1,陶刚 (貴州省农业科学院植物保护研究所,黄阳50006;2貴州师范大学生命科学学院,贵阳550001 摘要:【目的】明确供试微生物菌剂和生防木霉菌对甘蓝黑腐病的大田防治效果及其对甘蓝植株的促生作用,为 甘蓝黑腐病的生物防治提供参考。【方法】通过室内盆栽灌根法测定4株生防木霉菌(GYXM-lpl、GYSW-3ml、KLSD-8m3 和GYYC-15p2)对甘藍植株的促生作用;采用田间灌根、根部穴施和叶面喷施等方法评价4株生防木霉菌(GYXM- lpl、GYSW-3ml、KLSD-8m3和GYYC-15p2)和4种微生物菌剂(抗重茬微生态制剂+绿康威微生物肥、淡紫拟青霉微 生物肥、沃丰康一复合微生物菌剂和沃丰康一克线散粉剂)对甘蓝黑腐病的田间防治效果及其对甘蓝植株的促生作 用。【结果】盆栽促生试验结果表明,4株生防木霉菌中GYXM-lp1菌株对甘蓝的促生作用最明显,处理后甘蓝植株的 株高、根长、茎叶鲜重和干重、根鲜重和干重、植株总鲜重和总干重均显著高于清水对照(P<0.05),其中植株总鲜重和 总干重分别较清水对照增加41760%和76269%。大田促生试验结果表明,4株生防木霉菌中GYXM-lp1菌株对甘蓝 叶球的促生作用最明显,叶球鲜重为175889g/个,较清水对照增幅为23.19%;4种微生物菌剂中沃丰康一克线散粉剂 对叶球的促生作用最明显,叶球鲜重为1882.22g/个,增幅为31.83%,其次是抗重茬微生态制剂+绿康威微生物肥,叶 球鲜重为1818.89g/个,增幅为27.39%。大田防效试验结果表明,4株生防木霉菌中GYYC-15p2菌株对甘蓝黑腐病的 防治效果最佳,防效达79.16%,其次是GYXM-lpl菌株,防效为63.62%;沃丰康一复合微生物菌剂、淡紫拟青霉微生 物肥、抗重茬微生态制剂+绿康威微生物肥和沃丰康一克线散粉剂对甘蓝黑腐病的防效分别为67.77%、67.77%6、 6629%和5741%,4者防效差异不显著(P>0.05)。【结论】生防木霉菌GYXM-lp1菌株可作为生防资源应用于甘蓝黑腐 病防治,抗重茬微生态制剂+绿康威微生物肥可直接应用于大田甘蓝黑腐病的防治。 关键词:甘蓝黑腐病;微生物菌剂;木霉菌;防效;促生作用 中图分类号:S436.35 文献标志码:A 文章编号:2095-1191(2019)04-0761-07 Field control effects of microbial preparations and biocontrol strains of Trichoderma on cabbage black rot in field and its growth-promoting effects on cabbage ZHAO Dai-lin, MAO Ting-ting, WANG Nian, ZHAO Xing-li TAO Gang ('Institute of Plant Protection, Guizhou Academy of Agricultural Sciences, Guiyang 550006, China School of Life Sciences, Guizhou Normal University, Guiyang 550001, China) Abstract: Objective ]In order to provide scientific basis for screening the highly effective biocontrol agents for con- trolling cabbage black rot, control effects of microbial preparations and biocontrol strains of Trichoderma on cabbage black rot in field and its growth-promoting effect on cabbage were researched. [Method The growth-promoting effects of the four biocontrol strains of Trichoderm(GYXM-Ipl, GYSW-3ml, KLSD-8m3 and GYYC-15p2) on cabbage were tested by root irrigation in pot experiments. The growth-promoting and control effects of black rot of the four biocontrol strains of Trichoderma(GYXM-lpl, GYSW-3ml, KLSD-8m3 and GYYC-15p2) and the four microbial preparations Kangchongcha probiotics+Lukangwei microbial fertilizer, Paecilomyces lilacinus microbial fertilizer, Wofengkang-com- pound microbial preparation and Wofengkang-Kexiansan powder )on cabbage were tested by root irrigation, applying in 收稿日期:2018-11-12 基金项目:国家重点研发计划项目(2017YFD201102);贵州省科研机构服务企业行动计划项目(黔科合服企[2015)4012);贵州 省农业科学院专项(黔农科院院专项[2016)029号) 作者简介:·为通讯作者,陶刚(1972-),研究员,主要从事植物真菌病害生物防治研究工作, E-mail:tg729 asina. com。赵玳琳 (1987-),主要从事植物真菌病害生物防治研究工作,F-mail: dlsczhao sina com
4期 ·761· 微生物菌剂和生防木霉菌对甘蓝黑腐病的 田间防效及其对甘蓝的促生作用 赵玳琳1 ，卯婷婷1 ，王 廿1 ，赵兴丽1 ，娄 璇1，2 ，陶 刚1* （1 贵州省农业科学院植物保护研究所，贵阳 550006；2 贵州师范大学生命科学学院，贵阳 550001） 摘要：【目的】明确供试微生物菌剂和生防木霉菌对甘蓝黑腐病的大田防治效果及其对甘蓝植株的促生作用，为 甘蓝黑腐病的生物防治提供参考。【方法】通过室内盆栽灌根法测定4株生防木霉菌（GYXM-1p1、GYSW-3m1、KLSD-8m3 和GYYC-15p2）对甘蓝植株的促生作用；采用田间灌根、根部穴施和叶面喷施等方法评价4株生防木霉菌（GYXM- 1p1、GYSW-3m1、KLSD-8m3和GYYC-15p2）和4种微生物菌剂（抗重茬微生态制剂+绿康威微生物肥、淡紫拟青霉微 生物肥、沃丰康—复合微生物菌剂和沃丰康—克线散粉剂）对甘蓝黑腐病的田间防治效果及其对甘蓝植株的促生作 用。【结果】盆栽促生试验结果表明，4株生防木霉菌中GYXM-1p1菌株对甘蓝的促生作用最明显，处理后甘蓝植株的 株高、根长、茎叶鲜重和干重、根鲜重和干重、植株总鲜重和总干重均显著高于清水对照（P<0.05），其中植株总鲜重和 总干重分别较清水对照增加417.60%和762.69%。大田促生试验结果表明，4株生防木霉菌中GYXM-1p1菌株对甘蓝 叶球的促生作用最明显，叶球鲜重为1758.89 g/个，较清水对照增幅为23.19%；4种微生物菌剂中沃丰康—克线散粉剂 对叶球的促生作用最明显，叶球鲜重为1882.22 g/个，增幅为31.83%，其次是抗重茬微生态制剂+绿康威微生物肥，叶 球鲜重为1818.89 g/个，增幅为27.39%。大田防效试验结果表明，4株生防木霉菌中GYYC-15p2菌株对甘蓝黑腐病的 防治效果最佳，防效达79.16%，其次是GYXM-1p1菌株，防效为63.62%；沃丰康—复合微生物菌剂、淡紫拟青霉微生 物肥、抗重茬微生态制剂+绿康威微生物肥和沃丰康—克线散粉剂对甘蓝黑腐病的防效分别为67.77%、67.77%、 66.29%和57.41%，4者防效差异不显著（P>0.05）。【结论】生防木霉菌GYXM-1p1菌株可作为生防资源应用于甘蓝黑腐 病防治，抗重茬微生态制剂+绿康威微生物肥可直接应用于大田甘蓝黑腐病的防治。 关键词：甘蓝黑腐病；微生物菌剂；木霉菌；防效；促生作用 中图分类号：S436.35 文献标志码：A 文章编号：2095-1191（2019）04-0761-07 收稿日期：2018-11-12 基金项目：国家重点研发计划项目（2017YFD0201102）；贵州省科研机构服务企业行动计划项目（黔科合服企〔2015〕4012）；贵州 省农业科学院专项（黔农科院院专项〔2016〕029号） 作者简介：*为通讯作者，陶刚（1972-），研究员，主要从事植物真菌病害生物防治研究工作，E-mail：ttg729@sina.com。赵玳琳 （1987-），主要从事植物真菌病害生物防治研究工作，E-mail：dlsczhao@sina.com Field control effects of microbial preparations and biocontrol strains of Trichoderma on cabbage black rot in field and its growth-promoting effects on cabbage ZHAO Dai-lin1 ，MAO Ting-ting1 ，WANG Nian1 ，ZHAO Xing-li1 ， LOU Xuan1，2 ，TAO Gang1* （1 Institute of Plant Protection，Guizhou Academy of Agricultural Sciences，Guiyang 550006，China； 2 School of Life Sciences，Guizhou Normal University，Guiyang 550001，China） Abstract：【Objective】In order to provide scientific basis for screening the highly effective biocontrol agents for controlling cabbage black rot，control effects of microbial preparations and biocontrol strains of Trichoderma on cabbage black rot in field and its growth-promoting effect on cabbage were researched.【Method】The growth-promoting effects of the four biocontrol strains of Trichoderm（GYXM-1p1，GYSW-3m1，KLSD-8m3 and GYYC-15p2）on cabbage were tested by root irrigation in pot experiments. The growth-promoting and control effects of black rot of the four biocontrol strains of Trichoderma（GYXM-1p1，GYSW-3m1，KLSD-8m3 and GYYC-15p2）and the four microbial preparations （Kangchongcha probiotics+Lükangwei microbial fertilizer，Paecilomyces lilacinus microbial fertilizer，Wofengkang-compound microbial preparation and Wofengkang-Kexiansan powder）on cabbage were tested by root irrigation，applying in 南方农业学报 Journal of Southern Agriculture 2019，50（4）：761-767 ISSN 2095-1191；CODEN NNXAAB http://www.nfnyxb.com DOI：10.3969/j.issn.2095-1191.2019.04.11
762 南方农业学报 50卷 holes near root and foliage spraying in the field. [Result ]Among the four biocontrol strains of Trichoderma, the results of pot pro-growth experiments showed that strain GYXM-lpl treatment was the most useful on growth promotion, the plant height, root length, fresh and dry weight of foliage and stem, fresh and dry weight of root, total fresh weight and total dry weight of plant were significantly higher than clear water control treatment( P<0.05), with the plant total fresh weight and total dry weight increased by 417.60% and 762.69% compared with control respectively. Among the four biocon trol strains of Trichoderma, the results of field pro-growth experiments showed that GYXM-lpI treatment had the growth-promoting effect on cabbage bulb, the bulb fresh weight was 1758.89 g/bulb, and the increase was 23. 19 pared with control. Among the four microbial preparations, Wofengkang-Kexiansan powder treatment had the highest growth-promoting effect on cabbage bulb, the bulb fresh weight was 1882. 22 g/bulb and increased by 31.83%o, followed by Kangchongcha probiotics+ Lukangwei microbial fertilizer treatment, the bulb fresh weight was 1818. g/bulb and in- reased by 27.39%. Among the four biocontrol strains of Trichoderma, the results of field effect tests showed that GYYC- 15p2 treatment had the best control effect, the control effect was up to 79. 16%, followed by GYXM-lpl treatment, the control effect was 63.62%. The control effects of Wofengkang-compound microbial preparation, P. lilacinus microbial fer tilizer, Kangchongcha probiotics+ Lakangwei microbial fertilizer and Wofengkang-Kexiansan powder treatments were 67.77%, 67.77%, 66.29% and 57.41%, respectively, and the differences were not significant(P>0.05). [Conclusion The present study indicates that strain GYXM-lpl can be used as an important biocontrol resource for the prevention and control of cabbage black rot. Kangchongcha probiotics+ Lukangwei microbial fertilizer can be directly used to control ca- bage black rot Key words: cabbage black rot; microbial preparations; Trichoderma; control effect; growth promoting 0引言 (LR32、LR42秈LR19)菌株,可使甘蓝黑腐病发生率 【研究意义】甘蓝( Brassica oleracea L.)是一种分别减少72%、75%和79%。Wu等(2002a,2002b) 重要的十字花科蔬菜,在全世界普遍种植,我国是目 研究发现9株(29C、69、8、17A、101、103、15、17C和 前甘蓝种植面积最大的国家,占世界总种植面积的 ⑦1)解淀粉芽孢杆菌能使苗期甘蓝黑腐病发生率减 47%,2014年全国甘蓝种植面积达43万ha,总产量 少60%以上,同时发现枯草芽孢杆菌BB菌株能抑制 3株甘蓝黑腐病病原菌黄单胞杆菌生长。Msha和 03万t(戴忠良等,2018; Beeresh and Shripad,20l8) Arora(2012)发现荧光假单胞菌菌株Io7能产生抗生 甘蓝黑腐病是由黄单胞杆菌属( Xanthomonas cam pestris pv. campesirIs,Xco)浸染引起的一种甘蓝毁 素2,4- diacetylphloroglucinol抑制甘蓝黑腐病病原菌 黄单胞杆菌生长。 Ghazalibiglar等(2016)从24株类 灭性病害( Liu et al,2016),主要危害甘蓝外围叶芽孢杆菌中筛选得到3株(P6、P10和P16)菌株,在室 片,幼苗和成株均可受害,幼苗染病,子叶呈水浸状,内盆栽试验中能减少甘蓝子叶和真叶的黑腐症状。 逐渐枯死,成株发病多从叶缘开始,形成ⅴ字形黄褐 Lu等(2016)通过混合施用5种植物根际促生芽孢杆 色病斑,边缘有黄色晕环,病斑扩大后常出现叶斑和菌(AP213、AP218、AP219、AP25和AP305),发现在 叶脉变黑,直接影响植株光合作用,也能侵害叶球, 温室和大田试验中均能明显降低甘蓝黑腐病的发生 叶球发病时病斑淡黑色,局部的叶脉变紫黑色并逐率。【本研究切入点】尽管前人在甘蓝黑腐病生物防 渐扩大,但不会软化腐败,该病在田间发病严重时可治方面开展了一些研究工作,但主要是以细菌(芽孢 造成植株大量死亡,直接影响生产效益(陈茂春,杆菌)抑制细菌(黄单胞杆菌),目前仍缺少可替代化 2015;梁元凯等,2016。因此,筛选防控甘蓝黑腐病学农药的高效微生物菌剂【拟解决的关键问题】以4 的高效措施对促进甘蓝产业绿色健康发展和提高农种含有不同有效微生物活性成分的微生物菌剂(有 民收入均具有重要意义前人研究进展】国内外主效活性成分包括淡紫拟青霉、粉红粘帚霉、木霉菌 要是通过栽培管理、物理防治、化学防治和生物防治枯草芽孢杆菌和内生芽孢杆菌)和4株生防木霉菌 等手段防治甘蓝黑腐病,目前生物防治已成为最具(自筛)为研究靶标,通过室内盆栽和大田试验测定 吸引力和最绿色环保的防治措施。已报道用于防治分析4种微生物菌剂和4株生防木霉菌对甘蓝黑腐病 甘蓝黑腐病的生防微生物主要有荧光假单胞菌的防治效果及其对甘蓝植株的促生作用,以期筛选 ( Pseudomonas fluorescens)、解淀粉芽孢杆菌(Baci出拮抗活性强、防治效果好的微生物菌剂直接应用 lus amyloliquefaciens)、枯草芽孢杆菌(B. subtilis)、于大田甘蓝黑腐病防治,同时对4株生防木霉菌对甘 类芽孢杆菌( Paenibacillus spp)和酵母菌( Yeast)蓝黑腐病的防治促生效果进行评价,为甘蓝黑腐病 等。As等(199)从20株酵母菌株中筛选出3株的生物防治提供优良菌种资源
·762· 南 方 农 业 学 报 50卷 0 引言 【研究意义】甘蓝（Brassica oleracea L.）是一种 重要的十字花科蔬菜，在全世界普遍种植，我国是目 前甘蓝种植面积最大的国家，占世界总种植面积的 47%，2014年全国甘蓝种植面积达43万ha，总产量 903万（t 戴忠良等，2018；Beeresh and Shripad，2018）。 甘蓝黑腐病是由黄单胞杆菌属（Xanthomonas campestris pv. campestris，Xcc）浸染引起的一种甘蓝毁 灭性病害（Liu et al.，2016），主要危害甘蓝外围叶 片，幼苗和成株均可受害，幼苗染病，子叶呈水浸状， 逐渐枯死，成株发病多从叶缘开始，形成V字形黄褐 色病斑，边缘有黄色晕环，病斑扩大后常出现叶斑和 叶脉变黑，直接影响植株光合作用，也能侵害叶球， 叶球发病时病斑淡黑色，局部的叶脉变紫黑色并逐 渐扩大，但不会软化腐败，该病在田间发病严重时可 造成植株大量死亡，直接影响生产效益（陈茂春， 2015；梁元凯等，2016）。因此，筛选防控甘蓝黑腐病 的高效措施对促进甘蓝产业绿色健康发展和提高农 民收入均具有重要意义。【前人研究进展】国内外主 要是通过栽培管理、物理防治、化学防治和生物防治 等手段防治甘蓝黑腐病，目前生物防治已成为最具 吸引力和最绿色环保的防治措施。已报道用于防治 甘蓝黑腐病的生防微生物主要有荧光假单胞菌 （Pseudomonas fluorescens）、解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）、枯草芽孢杆菌（B. subtilis）、 类芽孢杆菌（Paenibacillus spp.）和酵母菌（Yeast） 等。Assis等（1999）从20株酵母菌株中筛选出3株 （LR32、LR42和LR19）菌株，可使甘蓝黑腐病发生率 分别减少72%、75%和79%。Wulff等（2002a，2002b） 研究发现9株（29C、69、8、17A、101、103、15、17C和 71）解淀粉芽孢杆菌能使苗期甘蓝黑腐病发生率减 少60%以上，同时发现枯草芽孢杆菌BB菌株能抑制 3株甘蓝黑腐病病原菌黄单胞杆菌生长。Mishra和 Arora（2012）发现荧光假单胞菌菌株To7能产生抗生 素2,4-diacetylphloroglucinol抑制甘蓝黑腐病病原菌 黄单胞杆菌生长。Ghazalibiglar等（2016）从24株类 芽孢杆菌中筛选得到3株（P6、P10和P16）菌株，在室 内盆栽试验中能减少甘蓝子叶和真叶的黑腐症状。 Liu等（2016）通过混合施用5种植物根际促生芽孢杆 菌（AP213、AP218、AP219、AP295和AP305），发现在 温室和大田试验中均能明显降低甘蓝黑腐病的发生 率。【本研究切入点】尽管前人在甘蓝黑腐病生物防 治方面开展了一些研究工作，但主要是以细菌（芽孢 杆菌）抑制细菌（黄单胞杆菌），目前仍缺少可替代化 学农药的高效微生物菌剂。【拟解决的关键问题】以4 种含有不同有效微生物活性成分的微生物菌剂（有 效活性成分包括淡紫拟青霉、粉红粘帚霉、木霉菌、 枯草芽孢杆菌和内生芽孢杆菌）和4株生防木霉菌 （自筛）为研究靶标，通过室内盆栽和大田试验测定 分析4种微生物菌剂和4株生防木霉菌对甘蓝黑腐病 的防治效果及其对甘蓝植株的促生作用，以期筛选 出拮抗活性强、防治效果好的微生物菌剂直接应用 于大田甘蓝黑腐病防治，同时对4株生防木霉菌对甘 蓝黑腐病的防治促生效果进行评价，为甘蓝黑腐病 的生物防治提供优良菌种资源。 holes near root and foliage spraying in the field.【Result】Among the four biocontrol strains of Trichoderma，the results of pot pro-growth experiments showed that strain GYXM-1p1 treatment was the most useful on growth promotion，the plant height，root length，fresh and dry weight of foliage and stem，fresh and dry weight of root，total fresh weight and total dry weight of plant were significantly higher than clear water control treatment（P<0.05），with the plant total fresh weight and total dry weight increased by 417.60% and 762.69% compared with control respectively. Among the four biocontrol strains of Trichoderma，the results of field pro-growth experiments showed that GYXM-1p1 treatment had the highest growth-promoting effect on cabbage bulb，the bulb fresh weight was 1758.89 g/bulb，and the increase was 23.19% compared with control. Among the four microbial preparations，Wofengkang-Kexiansan powder treatment had the highest growth-promoting effect on cabbage bulb，the bulb fresh weight was 1882.22 g/bulb and increased by 31.83%，followed by Kangchongcha probiotics+Lükangwei microbial fertilizer treatment，the bulb fresh weight was 1818.89 g/bulb and increased by 27.39%. Among the four biocontrol strains of Trichoderma，the results of field effect tests showed that GYYC- 15p2 treatment had the best control effect，the control effect was up to 79.16%，followed by GYXM-1p1 treatment，the control effect was 63.62%. The control effects of Wofengkang-compound microbial preparation，P. lilacinus microbial fertilizer，Kangchongcha probiotics + Lükangwei microbial fertilizer and Wofengkang-Kexiansan powder treatments were 67.77%，67.77%，66.29% and 57.41%，respectively，and the differences were not significant（P>0.05）.【Conclusion】 The present study indicates that strain GYXM-1p1 can be used as an important biocontrol resource for the prevention and control of cabbage black rot. Kangchongcha probiotics+Lükangwei microbial fertilizer can be directly used to control cabbage black rot. Key words：cabbage black rot；microbial preparations；Trichoderma；control effect；growth promoting
赵玳琳等:微生物菌剂和生防木霉菌对甘蓝黑腐病的田间防效及其对甘蓝的促生作用 763 1材料与方法 11个处理:处理(1)~处理(4),分别以KLSD-8m3 1.1试验材料 GYYC-15p2、GYSW-3m1和GYXM-1分生孢子液灌 供试甘蓝品种:中甘21号,由中国农业科学院(20mL/株,分生孢子液浓度10个/mL);处理(5) 蔬菜花卉研究所选育。供试生防木霉菌:GYXM 沃丰康一复合微生物菌剂穴施(2.5g/株);处理(6) lp1、KLSD8m3GYSW3m1和oYC15p2菌株,由沃丰康一克线散粉剂穴施(1.0g/株);处理(7)淡紫 贵州省农业科学院植物保护研究所生防实验室前期拟青霉灌根(稀释50倍液25mL/株);处理(8)抗重 分离获得。供试微生物菌剂:沃丰康一克线散粉剂茬微生态制剂穴施(10g株);处理(9)75%百菌清 (2亿活菌量/2),微生物活性成分为淡紫拟青霉,北可湿性粉剂稀释喷雾(稀释10管液,632g3小区) 京启高生物科技有限公司产品;沃丰康一复合微生作为农药对照:处理(10)30%甲箱嗯霉灵稀释喷雾 物菌剂(0亿活菌量g),微生物活性成分为枯草芽(稀释80倍液,100g/3小区)作为农药对照;处理 孢杆菌和粉红粘帚霉,北京启高生物科技有限公司 (11)喷施清水作为空白对照。每处理3个重复(小 产品;淡紫拟青霉微生物肥(20亿活菌量/mL),微生 区),每重复(小区)6.5m2,每重复(小区)40株甘蓝。 物活性成分为淡紫拟青霉,北京启高生物科技有限 于甘蓝收获期小心将甘蓝植株整株完整挖出 公司产品;抗重茬微生态制剂(5亿活菌量g),微生开进行调查,方法同1.21,测量其株高和根长,称量 物活性成分为枯草芽孢杆菌和木霉菌,中农绿康(北 其叶球鲜重和根鲜重,每处理3重复(小区),每重复 京)生物技术有限公司产品;绿康威(20g/袋)微生物 (小区)15株。 肥,微生物活性成分为内生芽孢杆菌,中农绿康(北 于甘蓝收获期,对甘蓝叶片黑腐病发病情况进 京)生物技术有限公司产品。供试对照化学药剂 行分级,根据发病分级指数计算病情指数及防治效 75%百菌清可湿性粉剂东菀市瑞德丰生物科技有果,每重复(小区)10株(每株叶片全部调查),3个重 限公司产品;30%甲霜嗯霉灵水剂河南远见农业科复(小区)。参照《农药田间药效试验准则(三)》(姜 技有限公司产品。 辉等,2004)制定分级标准。分级标准:0级,叶片无 1.2试验方法 病斑;1级,叶片病斑占整张叶片面积的5%以下;3 1.2.1生防木霉菌对甘蓝的盆栽促生作用试验将 级,叶片病斑占整张叶片面积的6%10%;5级,叶片 甘蓝种子催芽后播种于人工气候箱,待小苗长出3~4 病斑面积占整张叶片面积的11%25%;7级,叶片病 片子叶时移栽至直径为10cm的塑料钵内,塑料钵内斑面积占整张叶片面积的26%-50%;9级,叶片病斑 营养土经灭菌处理,用灭菌水浇透,移栽后遮光24h 面积占整张叶片面积的50%以上。 病情指数=Σ(各级病叶数x病害级别数)(调查 之后将塑料钵放入25℃、12h光照/12h黑暗的温室 培养一周后待用。试验共设5个处理,分别以KLSD 总叶数x9)×100 防治效果(%)=(对照区病情指数-处理区病情 8m3、GYYC-15p2、GYSW-3m1和GYXM-p1分生孢 指数)对照区病情指数×100 子悬浮液灌根接种(3mL/株,浓度为10°个/mL),以 清水为对照。每处理4个重复,共施菌2次(第1次施 1.3统计分析 运用DPS705通过最小显著差异法(LSD)比较 菌20d后施第2次菌)。 不同处理间的差异显著性。 于第1次施菌后45d,小心将甘蓝植株整株完整 挖出,测量其株高和根长,并称量鲜重(茎叶鲜重、根2结果与分析 鲜重和总鲜重),再将植株置于45℃烘箱中烘干72h,2.1生防木霉菌对甘蓝的盆栽促生作用 称量其干重(茎叶干重、根干重和总干重)(李德全 于第1次施菌后45d调查生防木霉菌对盆栽甘 等,2016),统计和评估生防菌对甘蓝植株的促生效蓝的促生效果,结果(表1和图1-A)显示,4株生防木 果,并计算增幅。 霉菌对甘蓝植株均有一定的促生作用,其中 增幅(%)=(处理生物量-对照生物量)对照生 GYXM-1pl菌株对甘蓝苗的促生作用最明显,处理 物量×100 后甘蓝植株的株高、根长、茎叶鲜重和干重、根鲜重 2.2微生物菌剂和生防木霉菌对甘蓝黑腐病的和干重、植株总鲜重和总干重均显著高于对照(P< 田间防效及其促生作用试验试验在贵州省贵阳市005,下同),植株总鲜重和总干重分别较对照增加 息烽县石洞乡高峰村甘蓝种植基地大田进行,于甘41760%和762.69%,且对根生长的促进作用更明 蓝苗移栽2周后施第次药,30d后施第次药,共设显,植株根鲜重和根干重分别较清水对照增加
4期 赵玳琳等：微生物菌剂和生防木霉菌对甘蓝黑腐病的田间防效及其对甘蓝的促生作用 ·763· 1 材料与方法 1. 1 试验材料 供试甘蓝品种：中甘21号，由中国农业科学院 蔬菜花卉研究所选育。供试生防木霉菌：GYXM- 1p1、KLSD-8m3、GYSW-3m1和GYYC-15p2菌株，由 贵州省农业科学院植物保护研究所生防实验室前期 分离获得。供试微生物菌剂：沃丰康—克线散粉剂 （2亿活菌量/g），微生物活性成分为淡紫拟青霉，北 京启高生物科技有限公司产品；沃丰康—复合微生 物菌剂（10亿活菌量/g），微生物活性成分为枯草芽 孢杆菌和粉红粘帚霉，北京启高生物科技有限公司 产品；淡紫拟青霉微生物肥（20亿活菌量/mL），微生 物活性成分为淡紫拟青霉，北京启高生物科技有限 公司产品；抗重茬微生态制剂（5亿活菌量/g），微生 物活性成分为枯草芽孢杆菌和木霉菌，中农绿康（北 京）生物技术有限公司产品；绿康威（20 g/袋）微生物 肥，微生物活性成分为内生芽孢杆菌，中农绿康（北 京）生物技术有限公司产品。供试对照化学药剂： 75%百菌清可湿性粉剂，东菀市瑞德丰生物科技有 限公司产品；30%甲霜噁霉灵水剂，河南远见农业科 技有限公司产品。 1. 2 试验方法 1. 2. 1 生防木霉菌对甘蓝的盆栽促生作用试验 将 甘蓝种子催芽后播种于人工气候箱，待小苗长出3~4 片子叶时移栽至直径为10 cm的塑料钵内，塑料钵内 营养土经灭菌处理，用灭菌水浇透，移栽后遮光24 h， 之后将塑料钵放入25 ℃、12 h光照/12 h黑暗的温室 培养一周后待用。试验共设5个处理，分别以KLSD- 8m3、GYYC-15p2、GYSW-3m1和GYXM-1p1分生孢 子悬浮液灌根接种（3 mL/株，浓度为106 个/mL），以 清水为对照。每处理4个重复，共施菌2次（第1次施 菌20 d后施第2次菌）。 于第1次施菌后45 d，小心将甘蓝植株整株完整 挖出，测量其株高和根长，并称量鲜重（茎叶鲜重、根 鲜重和总鲜重），再将植株置于45 ℃烘箱中烘干72 h， 称量其干重（茎叶干重、根干重和总干重）（李德全 等，2016），统计和评估生防菌对甘蓝植株的促生效 果，并计算增幅。 增幅（%）=（处理生物量-对照生物量）/对照生 物量×100 1. 2. 2 微生物菌剂和生防木霉菌对甘蓝黑腐病的 田间防效及其促生作用试验 试验在贵州省贵阳市 息烽县石洞乡高峰村甘蓝种植基地大田进行，于甘 蓝苗移栽2周后施第1次药，30 d后施第2次药，共设 11个处理：处理（1）~处理（4），分别以KLSD-8m3、 GYYC-15p2、GYSW-3m1和GYXM-1分生孢子液灌 根（20 mL/株，分生孢子液浓度106 个/mL）；处理（5） 沃丰康—复合微生物菌剂穴施（2.5 g/株）；处理（6） 沃丰康—克线散粉剂穴施（1.0 g/株）；处理（7）淡紫 拟青霉灌根（稀释50倍液，25 mL/株）；处理（8）抗重 茬微生态制剂穴施（1.0 g/株）；处理（9）75%百菌清 可湿性粉剂稀释喷雾（稀释1000倍液，6.3 g/3小区） 作为农药对照；处理（10）30%甲霜噁霉灵稀释喷雾 （稀释800倍液，10.0 g/3小区）作为农药对照；处理 （11）喷施清水作为空白对照。每处理3个重复（小 区），每重复（小区）6.5 m2 ，每重复（小区）40株甘蓝。 于甘蓝收获期小心将甘蓝植株整株完整挖出 并进行调查，方法同1.2.1，测量其株高和根长，称量 其叶球鲜重和根鲜重，每处理3重复（小区），每重复 （小区）15株。 于甘蓝收获期，对甘蓝叶片黑腐病发病情况进 行分级，根据发病分级指数计算病情指数及防治效 果，每重复（小区）10株（每株叶片全部调查），3个重 复（小区）。参照《农药田间药效试验准则（三）》（姜 辉等，2004）制定分级标准。分级标准：0级，叶片无 病斑；1级，叶片病斑占整张叶片面积的5%以下；3 级，叶片病斑占整张叶片面积的6%~10%；5级，叶片 病斑面积占整张叶片面积的11%~25%；7级，叶片病 斑面积占整张叶片面积的26%~50%；9级，叶片病斑 面积占整张叶片面积的50%以上。 病情指数=Σ（各级病叶数×病害级别数）（/ 调查 总叶数×9）×100 防治效果（%）=（对照区病情指数-处理区病情 指数）/对照区病情指数×100 1. 3 统计分析 运用DPS 7.05通过最小显著差异法（LSD）比较 不同处理间的差异显著性。 2 结果与分析 2. 1 生防木霉菌对甘蓝的盆栽促生作用 于第1次施菌后45 d调查生防木霉菌对盆栽甘 蓝的促生效果，结果（表1和图1-A）显示，4株生防木 霉菌对甘蓝植株均有一定的促生作用，其中， GYXM-1p1菌株对甘蓝苗的促生作用最明显，处理 后甘蓝植株的株高、根长、茎叶鲜重和干重、根鲜重 和干重、植株总鲜重和总干重均显著高于对照（P< 0.05，下同），植株总鲜重和总干重分别较对照增加 417.60%和762.69%，且对根生长的促进作用更明 显，植株根鲜重和根干重分别较清水对照增加
764 南方农业学报 50卷 86529%和74479%;其次是KLSD-8m3和GYSW-cm,根长增幅分别为1899%和1866%。4株生防木 3ml菌株,处理后植株的株高、根长、茎叶鲜重和干霉菌中GYSW-3ml菌株对甘蓝根鲜重的促生作用最 重、根鲜重和干重、植株总鲜重和总干重均显著高于明显,根鲜重为3452g/株,根鲜重增幅为23.11,其 清水对照;GYYC-15p2菌株的促生作用偏小,与清次是GYXM-lpl菌株,根鲜重为31.36g/株,根鲜重 水对照差异不显著(P>005,下同)。 增幅为1184%;4种微生物菌剂中抗重茬微生态制 2.2微生物菌剂和生防木霉菌对大田甘蓝的促生剂+绿康威微生物肥处理对甘蓝根鲜重的促生作用 作用 最明显,根鲜重为36.54g/株,根鲜重增幅为30.31% 调查结果(表2、图1B和图1C)显示,4株生防显著高于清水对照和75%百菌清可湿性粉剂农药对 木霉菌和4种微生物菌剂对大田甘蓝均有一定的促 照,其次是淡紫拟青霉微生物肥和沃丰康一克线散 生作用。经4株生防木霉菌处理的甘蓝株高均高于 粉剂处理,甘蓝根鲜重分别为3536和3440g/株,根 清水对照,但差异不显著;4种微生物菌剂中以淡紫 拟青霉微生物肥处理的甘蓝株高最高,达39.52cm, 鲜重增幅分别为26.11%和22.68% 且显著高于清水对照和30%甲霜嗯霉灵水剂农药对 2.3微生物菌剂和生防木霉菌对甘蓝黑腐病的 照,与清水对照相比株高增幅为6.80%,其他处理与 田间防效 清水对照和农药对照均无显著差异,其次是沃丰 调查结果(表3)显示,所有处理对甘蓝黑腐病 康一复合微生物菌剂和抗重茬微生态制剂+绿康威均有一定防治效果。4株生防木霉菌中GYYC-15p2 微生物肥处理,株高增幅分别为592%和5.89%生 菌株对甘蓝黑腐病的防治效果最佳,防效达79.16% 防木霉菌、微生物菌剂和农药对照处理的甘蓝叶球与75%百菌清可湿性粉剂农药对照的防效差异不 鲜重均显著高于清水对照,生防木霉菌和微生物菌显著;其次是 GYXM-Ip1菌株,防效为6362%。沃丰 剂处理的甘蓝叶球鲜重也明显高于农药对照,4株生康一复合微生物菌剂、淡紫拟青霉微生物肥、抗重茬 防木霉菌中GYXM-lpl菌株对甘蓝叶球鲜重的促生微生态制剂+绿康威微生物肥和沃丰康一克线散 作用最明显,叶球鲜重为1758.89g/个,叶球鲜重增粉剂对甘蓝黑腐病的防效分别为6777%0、6777 幅为23.19%;4种微生物菌剂中沃丰康一克线散粉剂6629%和5741%,四者间的防效差异不显著。30% 对甘蓝叶球的促生作用最显著,叶球鲜重达188222甲霜嗯霉灵水剂农药对照对甘蓝黑腐病的防治效果 g个,叶球鲜重增幅为3183%,其次是抗重茬微生态最差,防效仅为3698%,显著低于GYC15p2菌株 制剂+绿康威微生物肥,叶球鲜重为18889g个,增和5%百菌清可湿性粉剂处理,与其他处理差异不 甘根长的促生作用最显著,根长为2960cm,根长显若。 增幅为2272%,显著高于其他处理;4种微生物菌剂3讨论 中淡紫拟青霉微生物肥和抗重茬微生态制剂+绿康 本研究应用含有不同微生物活性成分的微生 威微生物肥处理的甘蓝根长分别为2870和2862物菌剂和生防木霉菌对甘蓝黑腐病的防治效果及其 表14株生防木霉菌对盆栽甘蓝植株的促生作用 Table 1 Growth promoting effects of four biocontrol strains of Trichoderma on pot cabbage plants 处玛 株高(cm)根长(cm) 茎叶鲜重(g株) 茎叶干重(g/株) Plant height Root length Foliage and stem fresh weight(g/plant) Foliage and stem dry weight(g/plant) YXM-lpI 14.90±1.04a19.60±3.32a 5.24±0.37a 1.12±0.10a KLSD-8m3 12.47±1.19a16.03±3.30a 4.230.55a 0.77±0.12b GYSW-3m1 13.90±1.15a16.77±3.18a 3.85±0.85a 0.69±0.17b GYYC-15p2 11.70±2.17ab723±1.09b 1.82±0.53b 0.20±0.05c 清水对照(CK)Clea 9.53±0.56b4.47±0.56b 1.06±0.08b 0.13±0.00c Root fresh weight(e/plant) Root dry weight(g/plant) Total fresh weight(g/plant) Total dry weight(e/plant) 0.58±0.10a KLSD-8m3 0.33+0.09b 0.08±002b 4.56±0.64a 0.85±0.14b GYSW-3m1 0.33±0.10b 0.06±0.02b 18±0.95a 0.75±0.20b GYYC-15p2 0.07±002c 0.02±0.00c 1.89±0.54b 0.21±0.05c 清水对照(CK) Clear water control0.06±0.00c 1.13±0.08b 0.15±00c6 同列数据后不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。表2和表3同 Different lowercase letters in the same column represented significant difference(P<0.05). The same was applied in Table 2 and Table 3
·764· 南 方 农 业 学 报 50卷 865.29%和744.79%；其次是KLSD - 8m3和GYSW - 3m1菌株，处理后植株的株高、根长、茎叶鲜重和干 重、根鲜重和干重、植株总鲜重和总干重均显著高于 清水对照；GYYC-15p2菌株的促生作用偏小，与清 水对照差异不显著（P>0.05，下同）。 2. 2 微生物菌剂和生防木霉菌对大田甘蓝的促生 作用 调查结果（表2、图1-B和图1-C）显示，4株生防 木霉菌和4种微生物菌剂对大田甘蓝均有一定的促 生作用。经4株生防木霉菌处理的甘蓝株高均高于 清水对照，但差异不显著；4种微生物菌剂中以淡紫 拟青霉微生物肥处理的甘蓝株高最高，达39.52 cm， 且显著高于清水对照和30%甲霜噁霉灵水剂农药对 照，与清水对照相比株高增幅为6.80%，其他处理与 清水对照和农药对照均无显著差异，其次是沃丰 康—复合微生物菌剂和抗重茬微生态制剂+绿康威 微生物肥处理，株高增幅分别为5.92%和5.89%。生 防木霉菌、微生物菌剂和农药对照处理的甘蓝叶球 鲜重均显著高于清水对照，生防木霉菌和微生物菌 剂处理的甘蓝叶球鲜重也明显高于农药对照，4株生 防木霉菌中GYXM-1p1菌株对甘蓝叶球鲜重的促生 作用最明显，叶球鲜重为1758.89 g/个，叶球鲜重增 幅为23.19%；4种微生物菌剂中沃丰康—克线散粉剂 对甘蓝叶球的促生作用最显著，叶球鲜重达1882.22 g/个，叶球鲜重增幅为31.83%，其次是抗重茬微生态 制剂+绿康威微生物肥，叶球鲜重为1818.89 g/个，增 幅为27.39%。4株生防木霉菌中GYSW-3m1菌株对 甘蓝根长的促生作用最显著，根长为29.60 cm，根长 增幅为22.72%，显著高于其他处理；4种微生物菌剂 中淡紫拟青霉微生物肥和抗重茬微生态制剂+绿康 威微生物肥处理的甘蓝根长分别为28.70和28.62 cm，根长增幅分别为18.99%和18.66%。4株生防木 霉菌中GYSW-3m1菌株对甘蓝根鲜重的促生作用最 明显，根鲜重为34.52 g/株，根鲜重增幅为23.11%，其 次是GYXM-1p1菌株，根鲜重为31.36 g/株，根鲜重 增幅为11.84%；4种微生物菌剂中抗重茬微生态制 剂+绿康威微生物肥处理对甘蓝根鲜重的促生作用 最明显，根鲜重为36.54 g/株，根鲜重增幅为30.31%， 显著高于清水对照和75%百菌清可湿性粉剂农药对 照，其次是淡紫拟青霉微生物肥和沃丰康—克线散 粉剂处理，甘蓝根鲜重分别为35.36和34.40 g/株，根 鲜重增幅分别为26.11%和22.68%。 2. 3 微生物菌剂和生防木霉菌对甘蓝黑腐病的 田间防效 调查结果（表3）显示，所有处理对甘蓝黑腐病 均有一定防治效果。4株生防木霉菌中GYYC-15p2 菌株对甘蓝黑腐病的防治效果最佳，防效达79.16%， 与75%百菌清可湿性粉剂农药对照的防效差异不 显著；其次是GYXM-1p1菌株，防效为63.62%。沃丰 康—复合微生物菌剂、淡紫拟青霉微生物肥、抗重茬 微生态制剂+绿康威微生物肥和沃丰康—克线散 粉剂对甘蓝黑腐病的防效分别为67.77%、67.77%、 66.29%和57.41%，四者间的防效差异不显著。30% 甲霜噁霉灵水剂农药对照对甘蓝黑腐病的防治效果 最差，防效仅为36.98%，显著低于GYYC-15p2菌株 和75%百菌清可湿性粉剂处理，与其他处理差异不 显著。 3 讨论 本研究应用含有不同微生物活性成分的微生 物菌剂和生防木霉菌对甘蓝黑腐病的防治效果及其 处理 Treatment GYXM-1p1 KLSD-8m3 GYSW-3m1 GYYC-15p2 清水对照（CK）Clear water control 根鲜重（g/株） Root fresh weightg（g/plant） 0.58±0.10a 0.33±0.09b 0.33±0.10b 0.07±0.02c 0.06±0.00c 根干重（g/株） Root dry weight（g/plant） 0.14±0.02a 0.08±0.02b 0.06±0.02b 0.02±0.00c 0.02±0.00c 总鲜重（g/株） Total fresh weight（g/plant） 5.82±0.47a 4.56±0.64a 4.18±0.95a 1.89±0.54b 1.13±0.08b 总干重（g/株） Total dry weight（g/plant） 1.26±0.12a 0.85±0.14b 0.75±0.20b 0.21±0.05c 0.15±0.00c 处理 Treatment GYXM-1p1 KLSD-8m3 GYSW-3m1 GYYC-15p2 清水对照（CK）Clear water control 株高（cm） Plant height 14.90±1.04a 12.47±1.19a 13.90±1.15a 11.70±2.17ab 9.53±0.56b 根长（cm） Root length 19.60±3.32a 16.03±3.30a 16.77±3.18a 7.23±1.09b 4.47±0.56b 茎叶鲜重（g/株） Foliage and stem fresh weight（g/plant） 5.24±0.37a 4.23±0.55a 3.85±0.85a 1.82±0.53b 1.06±0.08b 茎叶干重（g/株） Foliage and stem dry weight（g/plant） 1.12±0.10a 0.77±0.12b 0.69±0.17b 0.20±0.05c 0.13±0.00c 表 1 4株生防木霉菌对盆栽甘蓝植株的促生作用 Table 1 Growth promoting effects of four biocontrol strains of Trichoderma on pot cabbage plants 同列数据后不同小写字母表示差异显著（P<0.05）。表2和表3同 Different lowercase letters in the same column represented significant difference（P<0.05）. The same was applied in Table 2 and Table 3
赵玳琳等:微生物菌剂和生防木霉菌对甘蓝黑腐病的田间防效及其对甘蓝的促生作用 765 LA GYXMIpIL CK L- CK GYSW-3 W-3m1 cN,啊洲 以都碉 淡紫拟青霉微生物肥 抗重茬微生态制剂+绿康威微生物肥 75%百菌清可湿性粉剂 30%甲霜呕霉灵水剂 值展 该都直合改物的改线敢 心业 N- Sml KLSD-&m3GYYC-15p2武百 图1微生物菌剂和生防木霉菌对甘蓝的促生作用 Fig 1 Growth promoting effects of microbial preparations and biocontrol strains of Trichoderma on cabbage plants A:生防木霉菌对盆栽甘蓝幼苗的促生作用;B:微生物菌剂和生防木霉菌对大田甘蓝根的促生作用;C:微生物菌剂和生防木霉菌对大田甘蓝叶 的促生作用 Growth promoting effects of biocontrol strains of Trichoderma on pot cabbage seedlings; B: Growth promoting effects of microbial preparations and biocontrol strains of Trichoderma on field cabbage roots; C: Growth promoting effects of microbial preparations an biocontrol strains of Trichoderma on field cabbage bulbs
4期 ·765· 图 1 微生物菌剂和生防木霉菌对甘蓝的促生作用 Fig.1 Growth promoting effects of microbial preparations and biocontrol strains of Trichoderma on cabbage plants A：生防木霉菌对盆栽甘蓝幼苗的促生作用；B：微生物菌剂和生防木霉菌对大田甘蓝根的促生作用；C：微生物菌剂和生防木霉菌对大田甘蓝叶 球的促生作用 A：Growth promoting effects of biocontrol strains of Trichoderma on pot cabbage seedlings；B：Growth promoting effects of microbial preparations and biocontrol strains of Trichoderma on field cabbage roots；C：Growth promoting effects of microbial preparations and biocontrol strains of Trichoderma on field cabbage bulbs A B B B B C GYXM-1p1 CK KLSD-8m3 CK GYSW-3m1 CK GYYC-15p2 CK CK B GYSW-3m1 CK GYYC-15p2 GYXM-1p1 CK KLSD-8m3 CK 淡紫拟青霉微生物肥 CK 抗重茬微生态制剂+绿康威微生物肥 CK 沃丰康—克线散粉剂 CK 沃丰康—复合微生物菌剂 CK 75%百菌清可湿性粉剂 CK 30%甲霜噁霉灵水剂 淡紫拟青霉 复合微生物菌 克线散粉剂 抗重茬+绿康威 CK GYXM-1p1 GYSW-3m1 KLSD-8m3 GYYC-15p2 甲霜噁霉灵 百菌清 CK 赵玳琳等：微生物菌剂和生防木霉菌对甘蓝黑腐病的田间防效及其对甘蓝的促生作用