(一)制备血滤液等实验过滤时，要用干滤纸而不能用水把滤纸弄湿，因为湿滤纸会 影响血液稀释的体积。 (二)折叠滤纸与漏斗壁完全吻合，不留缝隙。一般采用平折法（即对折后再对折）。 (三)向漏斗中加溶液时最好使用玻棒引流，倒入速度不要太快，不得使液面超过滤 纸上缘。 (四)组织匀浆等较粗样品的过滤可用脱脂棉或纱布代替滤纸，有时可用离心沉淀法 代替过滤法。 六、离心机的使用方法 欲使沉淀与溶液分开，过滤和离心都可达到目的，但当沉淀粘稠、颗粒太小且能通过 滤纸或总容量太少又需定量测定时，使用离心沉淀法优于过滤法。 使用离心机前，应检查离心机转动状态是否平稳，以确定离心机的性能：检查套管与 离心管大小是否相配，套管是否铺好软垫（用棉药或橡皮），检查套管底部应无碎玻璃片或 漏缝。 检查合格后，将一对离心管放入一对套管中，然后连套管一起分置粗天平两侧，用滴 管向较轻的一侧离心管与套管之间加水，直至天平两侧彼此相等为止。将各对平衡的套管连 同内容物放置于离心机内，两个等重的离心管必须放于对称位置。放妥后，接通电源开关， 逐步扭动转速旋钮，缓慢增加离心机转速，直到所需的转速。达规定时间后，将转速旋钮逐 步调回零，待离心机停稳后，取出离心管。 §3实验样品的制备 在生物化学实验中，无论是分析组织中各种物质的含量，或是探索组织中的物质代谢 过程，都需要利用预先处理过的特定生物样品。掌握实验样品的正确处理与制备方法是做好 生物化学实验的先决条件。 在基础生物化学实验中，最常用的实验样品是人或动物的血、尿和组织等。血样品常 采用全血、血浆、血清或无蛋白血滤液。组织样品则常用动物的肝、肾、胰、胃粘膜或肌肉 等组织。现将这些样品的制备方法扼要介绍如下： 一、血液样品
（一）制备血滤液等实验过滤时，要用干滤纸而不能用水把滤纸弄湿，因为湿滤纸会 影响血液稀释的体积。 （二）折叠滤纸与漏斗壁完全吻合，不留缝隙。一般采用平折法（即对折后再对折）。 （三）向漏斗中加溶液时最好使用玻棒引流，倒入速度不要太快，不得使液面超过滤 纸上缘。 （四）组织匀浆等较粗样品的过滤可用脱脂棉或纱布代替滤纸，有时可用离心沉淀法 代替过滤法。 六、离心机的使用方法 欲使沉淀与溶液分开，过滤和离心都可达到目的，但当沉淀粘稠、颗粒太小且能通过 滤纸或总容量太少又需定量测定时，使用离心沉淀法优于过滤法。 使用离心机前，应检查离心机转动状态是否平稳，以确定离心机的性能；检查套管与 离心管大小是否相配，套管是否铺好软垫（用棉药或橡皮），检查套管底部应无碎玻璃片或 漏缝。 检查合格后，将一对离心管放入一对套管中，然后连套管一起分置粗天平两侧，用滴 管向较轻的一侧离心管与套管之间加水，直至天平两侧彼此相等为止。将各对平衡的套管连 同内容物放置于离心机内，两个等重的离心管必须放于对称位置。放妥后，接通电源开关， 逐步扭动转速旋钮，缓慢增加离心机转速，直到所需的转速。达规定时间后，将转速旋钮逐 步调回零，待离心机停稳后，取出离心管。 §3 实验样品的制备 在生物化学实验中，无论是分析组织中各种物质的含量，或是探索组织中的物质代谢 过程，都需要利用预先处理过的特定生物样品。掌握实验样品的正确处理与制备方法是做好 生物化学实验的先决条件。 在基础生物化学实验中，最常用的实验样品是人或动物的血、尿和组织等。血样品常 采用全血、血浆、血清或无蛋白血滤液。组织样品则常用动物的肝、肾、胰、胃粘膜或肌肉 等组织。现将这些样品的制备方法扼要介绍如下： 一、 血液样品
收集动物或人的血液时应使用清洁干燥的试管或器皿，以防止溶血 (一)全血取出血液后，迅速置于含有抗凝剂的试管内，同时轻轻混匀， 使血液和抗凝剂充分混合，以免血液凝固。取得的全血如不能立即进行实验，应储存于冰箱 中。 常用的抗凝剂有草酸盐、柠檬酸盐、氟化钠等，根据实验的要求而定，一般情况下使用 肝素钠或肝素。抗凝剂的用量不宜过多，以免影响实验结果。通常每毫升血液加草酸盐 1-2mg,柠檬酸钠5mg或氟化钠5~10mg,肝素仅需要0.01-0.2mg。可将抗凝剂配成适当浓 度的水溶液，按需要量加到准备盛血的试管中，并涂布于试管壁，横放烘干（肝素不宜超过 30℃)备用。 (二)血浆将上述抗凝全血在离心机中离心，血细胞下沉，上清液即为血浆。分离血 浆时，必须严格防止溶血，除采血时一切用具（注射器、针头、试管等）都需要清洁干燥外， 取出之血液也不能剧烈振摇。 (三)血清收集的血液若不加抗凝剂，在室温下约510分钟即自行凝固。血液凝固 3060分钟后，即可采用离心方式分离出血清。若血块粘附于容器壁过于牢固、血清不易分 离出来时，可用细玻璃棒轻轻剥离血块。 (四)无蛋白血滤液分析血液中某些成分时（如血液中的非蛋白氨、葡萄糖、肌酸 等)为了避免蛋白质的干扰，需预先除去血中的蛋白质成分。常用三氯醋酸，钨酸等沉淀剂 与蛋白质作用，然后用过滤或离心方法制备无蛋白血滤液 二、尿液样品 一般定性实验可以用随时收集的新鲜尿液。定量测定尿液中各种成分时，应把收集的 24小时的尿液混合后再取样。因为一天之中各次排出尿液的成分，随食物、饮水及一昼夜 体内生理变化等的影响而有很大的差异。 收集尿液的方法一般在早晨一定的时间先排弃残余尿，再将每次尿均收集于清洁大玻璃 瓶中，到第二天早晨同一时间收集最后一次尿液即可。把收集24小时尿液充分混合后用量 筒量准其总体积，然后取样分析。 收集的尿液如不能立即进行实验，应置于冷处保存。必要时可在收集尿液的瓶中预先放 入防腐剂，通常每升尿中约加入甲苯10ml或浓盐酸10ml。收集实验动物的尿液时，可将动 物置于代谢笼中，按以上方法通过笼下的漏斗收集动物24小时的尿液。 三、组织样品 在生物化学实验中，常常利用离体组织研究各种物质代谢的途径与酶系的作用，也可
收集动物或人的血液时应使用清洁干燥的试管或器皿，以防止溶血。 （一）全血 取出血液后，迅速置于含有抗凝剂的试管内，同时轻轻混匀， 使血液和抗凝剂充分混合，以免血液凝固。取得的全血如不能立即进行实验，应储存于冰箱 中。 常用的抗凝剂有草酸盐、柠檬酸盐、氟化钠等，根据实验的要求而定，一般情况下使用 肝素钠或肝素。抗凝剂的用量不宜过多，以免影响实验结果。通常每毫升血液加草酸盐 1~2mg，柠檬酸钠 5mg 或氟化钠 5~10mg，肝素仅需要 0.01~0.2mg。可将抗凝剂配成适当浓 度的水溶液，按需要量加到准备盛血的试管中，并涂布于试管壁，横放烘干（肝素不宜超过 30℃）备用。 （二）血浆 将上述抗凝全血在离心机中离心，血细胞下沉，上清液即为血浆。分离血 浆时，必须严格防止溶血，除采血时一切用具（注射器、针头、试管等）都需要清洁干燥外， 取出之血液也不能剧烈振摇。 （三）血清 收集的血液若不加抗凝剂，在室温下约 5~10 分钟即自行凝固。血液凝固 30~60 分钟后，即可采用离心方式分离出血清。若血块粘附于容器壁过于牢固、血清不易分 离出来时，可用细玻璃棒轻轻剥离血块。 （四）无蛋白血滤液 分析血液中某些成分时（如血液中的非蛋白氮、葡萄糖、肌酸 等）为了避免蛋白质的干扰，需预先除去血中的蛋白质成分。常用三氯醋酸，钨酸等沉淀剂 与蛋白质作用，然后用过滤或离心方法制备无蛋白血滤液。 二、尿液样品 一般定性实验可以用随时收集的新鲜尿液。定量测定尿液中各种成分时，应把收集的 24 小时的尿液混合后再取样。因为一天之中各次排出尿液的成分，随食物、饮水及一昼夜 体内生理变化等的影响而有很大的差异。 收集尿液的方法一般在早晨一定的时间先排弃残余尿，再将每次尿均收集于清洁大玻璃 瓶中，到第二天早晨同一时间收集最后一次尿液即可。把收集 24 小时尿液充分混合后用量 筒量准其总体积，然后取样分析。 收集的尿液如不能立即进行实验，应置于冷处保存。必要时可在收集尿液的瓶中预先放 入防腐剂，通常每升尿中约加入甲苯 10ml 或浓盐酸 10ml。收集实验动物的尿液时，可将动 物置于代谢笼中，按以上方法通过笼下的漏斗收集动物 24 小时的尿液。 三、组织样品 在生物化学实验中，常常利用离体组织研究各种物质代谢的途径与酶系的作用，也可
以从组织中提取各种代谢物质或酶进行研究。 但是生物组织离体过久，其所含物质的含量和生物活性都将发生变化。因此，利用离 体组织作为提取材料或代谢研究材料时，应在冰冷条件下迅速取出所需组织，并尽快进行提 取或测定。 一般采用断头法（或注射空气于动物心脏）处死动物，放出血液，立即取出实验所需之 脏器或组织，去除外层的脂肪及结缔组织后，用冰冷的生理盐水洗去血液，必要时也可用冰 冷的生理盐水灌注脏器以洗去血液，再用滤纸吸干。迅速称重后，根据实验的不同要求，用 以下不同的方法制成不同的组织样品。 (一)组织糜将组织用剪刀迅速剪碎，或用绞肉机纹成糜状即可。 (二)组织匀浆向剪碎的新鲜组织中加入适量冰冷的匀浆制备液，用高速电动匀浆器 或玻璃匀浆器制成匀浆。常用的玻璃匀浆器有5ml和10ml两种，由一个磨砂玻璃套管和 个带有磨砂玻璃杵头的杵组成。玻璃杵的外壁必须紧靠玻璃套管的内壁。用时将套管放入冰 浴中，玻璃杵与调速马达连接，将剪碎的组织悬浮于匀浆制备液中并倾入套管中，然后再把 玻璃杵插入套管中。开动马达并调节杵的转速，小心地用手扶住套管口部，不断上下移动， 直至组织碎块磨成匀浆为止。 常用的匀浆制备液有生理盐水、缓冲液或0.25molL燕糖溶液等，可根据实验的不同要 求，加以选择。 (三)组织浸出液将上法制成的组织匀浆进行离心，其上清液即为组织浸出液， §4离心分离技术原理 离心机是利用离心力把溶液中的粒子进行分离的一种仪器。所谓离心力是指物体作圆周 运动时形成的一种迫使物体脱离圆周运动中心的力。 离心力的单位为g即重力加速度(980.6cm/s),离心力的大小可根据离心时的旋转速度 V(r/min,每分钟转数，revolution per minute)和物体离旋转轴中心的距离r(cm)按下式 计算 g=r×V2×1.118×105 或按下式计算所需的转速 V=V(g×89445)斤 在离心场中物体所受离心力的大小，与物体离旋转轴中心的距离有关，离轴心越远
以从组织中提取各种代谢物质或酶进行研究。 但是生物组织离体过久，其所含物质的含量和生物活性都将发生变化。因此，利用离 体组织作为提取材料或代谢研究材料时，应在冰冷条件下迅速取出所需组织，并尽快进行提 取或测定。 一般采用断头法（或注射空气于动物心脏）处死动物，放出血液，立即取出实验所需之 脏器或组织，去除外层的脂肪及结缔组织后，用冰冷的生理盐水洗去血液，必要时也可用冰 冷的生理盐水灌注脏器以洗去血液，再用滤纸吸干。迅速称重后，根据实验的不同要求，用 以下不同的方法制成不同的组织样品。 （一）组织糜 将组织用剪刀迅速剪碎，或用绞肉机绞成糜状即可。 （二）组织匀浆 向剪碎的新鲜组织中加入适量冰冷的匀浆制备液，用高速电动匀浆器 或玻璃匀浆器制成匀浆。常用的玻璃匀浆器有 5ml 和 10ml 两种，由一个磨砂玻璃套管和一 个带有磨砂玻璃杵头的杵组成。玻璃杵的外壁必须紧靠玻璃套管的内壁。用时将套管放入冰 浴中，玻璃杵与调速马达连接，将剪碎的组织悬浮于匀浆制备液中并倾入套管中，然后再把 玻璃杵插入套管中。开动马达并调节杵的转速，小心地用手扶住套管口部，不断上下移动， 直至组织碎块磨成匀浆为止。 常用的匀浆制备液有生理盐水、缓冲液或 0.25mol/L 蔗糖溶液等，可根据实验的不同要 求，加以选择。 （三）组织浸出液 将上法制成的组织匀浆进行离心，其上清液即为组织浸出液。 §4 离心分离技术原理 离心机是利用离心力把溶液中的粒子进行分离的一种仪器。所谓离心力是指物体作圆周 运动时形成的一种迫使物体脱离圆周运动中心的力。 离心力的单位为 g 即重力加速度（980.6cm/s2），离心力的大小可根据离心时的旋转速度 V（r/min，每分钟转数，revolution per minute）和物体离旋转轴中心的距离 r（cm ）按下式 计算： g = r× V2× 1.118 ×10-5 或按下式计算所需的转速 在离心场中物体所受离心力的大小，与物体离旋转轴中心的距离有关，离轴心越远， V=√（g×89445）/r