、玻璃器材(各种规格的玻璃瓶、培养瓶、培养皿、吸管、离心管等) ≯浸泡(自来水)、刷洗(洗衣粉)、清洁液处理(24小时)、流水冲洗 蒸溜水浸泡和冲洗、50℃烘干包装杀菌。一般用121℃磅高压蒸气灭菌 20分钟。 塑料器材(多孔培养板、培养皿、培养瓶及吸嘴等) 塑料器皿若反复使用:使用后,先用自来水浸泡冲洗、晾干,再用 3‰%HCl或2%NaO溶液浸泡过夜,用自来水充分冲洗,双蒸水冲洗,晾干。 采用紫外线直接照射或辐照灭菌办法。清洗时要防止产生划痕 、橡皮器材 选择质软、耐高温、毒性小的橡皮制品(最好是硅制品)。新购置的自 来水冲洗去,5%氢氧化钠煮沸15分钟,自来水冲洗,4%盐酸煮沸15分钟 自来水冲洗,单蒸水冲洗,双蒸水(或去离子水)冲洗,晾干后包装或置 于铝盒内,用121℃高压蒸气灭菌20分钟
一、玻璃器材（各种规格的玻璃瓶、培养瓶、培养皿、吸管、离心管 等） Ø 浸泡（自来水）、刷洗（洗衣粉）、清洁液处理（24小时）、流水冲洗、 蒸溜水浸泡和冲洗、50℃烘干包装杀菌。一般用121℃磅高压蒸气灭菌 20分钟。 二、塑料器材（多孔培养板、培养皿、培养瓶及吸嘴 等） Ø 塑料器皿若反复使用：使用后，先用自来水浸泡冲洗、晾干，再用 3%HCl或2%NaOH溶液浸泡过夜，用自来水充分冲洗，双蒸水冲洗，晾干。 采用紫外线直接照射或辐照灭菌办法。清洗时要防止产生划痕。 三、橡皮器材 Ø 选择质软、耐高温、毒性小的橡皮制品(最好是硅制品) 。新购置的自 来水冲洗去，5%氢氧化钠煮沸15分钟，自来水冲洗，4%盐酸煮沸15分钟， 自来水冲洗，单蒸水冲洗，双蒸水(或去离子水)冲洗，晾干后包装或置 于铝盒内，用121℃高压蒸气灭菌20分钟
四、金属器材(解剖器械,剪刀、镊子、手术刀、解剖刀、血管钳、组织 镊、眼科镊及各种型号针头等) ≯新的金属器材,先用纸擦去表面的油脂,再用洗衣粉煮沸,水洗,擦干 后再用95%酒精纱布擦干,包装或置铝盒内于121℃高压蒸气灭菌20分钟。 已用过的金属器材,及时用酒精棉球擦干净,灭菌。 五、其他物品 纱布、注射器的针头等; ≯各种人工合成培养液、缓冲液和酶等、过滤除菌 ≯消毒灭菌前所用的包装材料可用牛皮纸、硫酸纸、棉布、铝饭盒和特制 玻璃(或金属)消毒筒等,可根据器材大小、形态选用,采取局部包装或 部分包装,并用线绳扎紧
四、金属器材（解剖器械，剪刀、镊子、手术刀、解剖刀、血管钳、组织 镊、眼科镊及各种型号针头等） Ø新的金属器材，先用纸擦去表面的油脂，再用洗衣粉煮沸，水洗，擦干 后再用95%酒精纱布擦干，包装或置铝盒内于121℃高压蒸气灭菌20分钟。 已用过的金属器材，及时用酒精棉球擦干净，灭菌。 五、其他物品 Ø纱布、注射器的针头等； Ø各种人工合成培养液、缓冲液和酶 等、过滤除菌。 Ø消毒灭菌前所用的包装材料可用牛皮纸、硫酸纸、棉布、铝饭盒和特制 玻璃（或金属）消毒筒等，可根据器材大小、形态选用，采取局部包装或 部分包装，并用线绳扎紧
细胞培养用液的配制 水:新鲜配置的三蒸水或去离子水 平衡盐溶液( balanced salt solution,BSS)又称生理盐水或 盐溶液,是细胞培养中常用的基本液体。它主要由无机盐和葡萄糖 配制而成,起着维持渗透压、缓冲和调节酸碱度等重要作用。 配液时注意:(1)用水;配制先后顺序;称量,要看清药品的规 格、纯度、结晶水的数量等。(2)物质的纯度,常用的纯度有优 级纯(特级纯),分析纯(AR)和化学纯(CD)三种。(3)物质的 可溶性,避免沉淀析出。(4)物质的稳定性,如葡萄糖只能在10 磅下维持15~20分钟。(5)贮存液通常先配制成10倍或100倍的 系列母液,用前临时混合和稀释,过滤除菌备用。 常用的缓冲液:生理盐水、PB、PBS(注意有无钙镁离子) Hanks液(含有钙镁离子、葡萄糖、酚红)
水：新鲜配置的三蒸水或去离子水 平衡盐溶液(balanced salt solution，BSS)又称生理盐水或 盐溶液，是细胞培养中常用的基本液体。它主要由无机盐和葡萄糖 配制而成，起着维持渗透压、缓冲和调节酸碱度等重要作用。 Ø 配液时注意：（1）用水；配制先后顺序；称量，要看清药品的规 格、纯度、结晶水的数量等。（2）物质的纯度，常用的纯度有优 级纯(特级纯)，分析纯（AR）和化学纯（CD）三种。（3）物质的 可溶性，避免沉淀析出。（4）物质的稳定性，如葡萄糖只能在10 磅下维持15～20分钟。（5）贮存液 通常先配制成10倍或100倍的 一系列母液，用前临时混合和稀释，过滤除菌备用。 Ø 常用的缓冲液：生理盐水、PB、PBS(注意有无钙镁离子)、 Hanks液（含有钙镁离子、葡萄糖、酚红） 细胞培养用液的配制
pH调节液 (1)碳酸氢钠液可根据需要与使用方便配制10%以下的各种浓度。先用 双蒸水溶解后,需经过滤除菌,分装小瓶中。亦可使用高压蒸气灭菌, 密封,4℃冰箱保存。市售有5%~10%浓度的安瓿封装品,使用也很方便。 在调节p过程中或超过要求值时,可用高压灭菌的10%醋酸溶液或以C02 调节之。 2) Hepes缓冲液是一种可以保持细胞培养过程中pH值较长时间稳定的 氢离子缓冲剂。通常使用浓度为10~15mmol/L。配制时,称取所需的 Hepes量,用培养液溶解,用 1 mmol/ NAoh调节pH至7.0,过滤除菌分装小 瓶中,4℃冰箱保存
pH调节液 (1)碳酸氢钠液 可根据需要与使用方便配制10%以下的各种浓度。先用 双蒸水溶解后，需经过滤除菌，分装小瓶中。亦可使用高压蒸气灭菌， 密封，4℃冰箱保存。市售有5%～10%浓度的安瓿封装品，使用也很方便。 在调节pH过程中或超过要求值时，可用高压灭菌的10%醋酸溶液或以CO2 调节之。 (2)Hepes缓冲液 是一种可以保持细胞培养过程中pH值较长时间稳定的 氢离子缓冲剂。通常使用浓度为10～15mmol/L。配制时，称取所需的 Hepes量，用培养液溶解，用1mmol/LNaOH调节pH至7.0，过滤除菌分装小 瓶中，4℃冰箱保存
消化液 (1)胰蛋白酶溶液,一种黄白色粉末,易受潮,应密封放置阴暗干 燥处。它的主要作用是使细胞间的蛋白质水解,从而使贴壁细胞从 瓶壁上脱落并使细胞游离分散开来。常用浓度为0.25%或5%胰蛋白 酶 (②)EDIA(乙烯二胺与乙酸或 Versene)溶液EDTA是一种化学螯合剂, 毒性小,对贴壁细胞有离散作用。一般使用浓度为002%。称 o. 1g versene溶解于500ml无钙镁离子磷酸缓冲液中,15磅30分钟高 压灭菌,4°C或室温保存。 (3)胰蛋白酶一EDTA的配制0.5%胰蛋白酶液96mL,1%EDTA液 4ml,无钙镁离子缓冲液100ml
消化液 (1) 胰蛋白酶溶液， 一种黄白色粉末，易受潮，应密封放置阴暗干 燥处。它的主要作用是使细胞间的蛋白质水解，从而使贴壁细胞从 瓶壁上脱落并使细胞游离分散开来。常用浓度为0.25%或5%胰蛋白 酶。 (2) EDTA(乙烯二胺与乙酸或Versene)溶液 EDTA是一种化学螯合剂， 毒性小，对贴壁细胞有离散作用。一般使用浓度为0.02%。称 0.1gVersene溶解于500ml无钙镁离子磷酸缓冲液中，15磅30分钟高 压灭菌，4℃或室温保存。 (3) 胰蛋白酶－EDTA的配制 0.5%胰蛋白酶液96mL，1%EDTA液 4ml，无钙镁离子缓冲液100ml