核酸操作技术核酸凝胶电泳(二) -应用：核酸的检测分型DNA，RNA定性检测、DNA核苷酸序列分析限制性内切酶片段分析*PCR产物
一 核酸操作技术 （二）核酸凝胶电泳 应用：核酸的检测 v DNA，RNA定性检测、分型 v DNA核苷酸序列分析 v 限制性内切酶片段分析 v PCR产物
核酸操作技术1.基本概念DNAmigratestowardanode，电泳迁移率：电泳分子在电场作用下的迁移速度。：与电场强度和电泳分子本身携带的净电荷数成正比。，电泳的迁移率与分子的摩擦系数成反比。基本原理：根据分子大小、构型或形状的差异以及所带电荷的多少，便可将各种成分彼此分离开来
一 核酸操作技术 1.基本概念 v 电泳迁移率：电泳分子在电场作用下的迁移 速度。 v 与电场强度和电泳分子本身携带的净电荷数 成正比。 v 电泳的迁移率与分子的摩擦系数成反比。 v 基本原理： 根据分子大小、构型或形状的差异以及所带电 荷的多少，便可将各种成分彼此分离开来
核酸操作技术2.琼脂糖凝胶电泳天然琼脂（agar）是多聚糖，主要由琼脂糖（agarose）及琼脂胶（agaropectin）组成。琼脂糖不带电荷。其优点如下。（1）操作简单，速度快，样品不需事先处理就可以进行电泳。（2）结构均匀，含水量大（约占98%~99%），近似自由电泳，样品扩散较自由对样品吸附极微，电泳图谱清晰，分辨率高，重复性好（3）琼脂糖透明无紫外吸收，电泳过程和结果可直接用紫外光灯检测及定量测定（4）电泳后区带易染色，样品易洗脱，便于定量测定。制成干膜可长期保存
一 核酸操作技术 2.琼脂糖凝胶电泳 v 天然琼脂（agar）是多聚糖，主要由琼脂糖（agarose）及琼脂胶（agaropectin） 组成。琼脂糖不带电荷。 v 其优点如下。 （1）操作简单，速度快，样品不需事先处理就可以进行电泳。 （2）结构均匀，含水量大（约占98%~99%），近似自由电泳，样品扩散较自由， 对样品吸附极微，电泳图谱清晰，分辨率高，重复性好。 （3）琼脂糖透明无紫外吸收，电泳过程和结果可直接用紫外光灯检测及定量测定。 （4）电泳后区带易染色，样品易洗脱，便于定量测定。制成干膜可长期保存
核酸操作技术2.琼脂糖凝胶电泳琼脂糖和低熔点琼脂糖低熔点琼脂糖熔点为62~65℃，溶解后在37℃下维持液体状态约数小时，主要用于DNA片段的回收，质粒与外源性DNA的快速连接等。?分辨率：琼脂糖0.2~50kb；聚丙烯酰胺1bp~1kb
一 核酸操作技术 2.琼脂糖凝胶电泳 v 琼脂糖和低熔点琼脂糖 v 低熔点琼脂糖熔点为62～65℃，溶解后在37℃下维持液体状态约数小时，主要用 于DNA片段的回收，质粒与外源性DNA的快速连接等。 v 分辨率： v 琼脂糖0.2～50kb；聚丙烯酰胺1bp～1kb
核酸操作技术2.琼脂糖凝胶电泳?琼脂糖凝胶的浓度与DNA分离范围琼脂糖浓度(%）线型DNA分子的分离范围（Kb)0.35~600.61 ~ 200.70.8~100.90.5~71.20.9~61.50.2~3
一 核酸操作技术 2.琼脂糖凝胶电泳 v 琼脂糖凝胶的浓度与DNA分离范围 琼脂糖浓度(%) 线型DNA分子的分离范围(Kb) 0.3 5～60 0.6 1～20 0.7 0.8～10 0.9 0.5～7 1.2 0.9～6 1.5 0.2～3