核酸操作技术内容核酸提取核酸凝胶电泳PCR扩增酶切和重组
一 核酸操作技术 内容 u核酸提取 u核酸凝胶电泳 uPCR扩增 u酶切和重组
核酸操作技术（一）核酸提取基因组DNA的提取总RNA的提取基因组外核酸DNA的提取
一 核酸操作技术 （一）核酸提取 u基因组DNA的提取 u总RNA的提取 u基因组外核酸DNA的提取
核酸操作技术1.基因组DNA的提取制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤DNA提取两个原则：（1）防止和抑制DNaSe对DNA的降解；（2）尽量减少对DNA的机械剪切破坏。从新鲜组织、培养细胞或低温保存的组织细胞中提取，常采用在EDTA以及SDS或CTAB等试剂存在下用蛋白酶K消化细胞，再用酚抽提。获得的DNA经酶切后可用于Southern分析，还可用于PCR扩增、文库构建等实验HomogenizationIncubationSample loadingGeniomicDNAExtraction
一 核酸操作技术 1.基因组DNA的提取 u 制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤。 u DNA提取两个原则：（1）防止和抑制DNase对DNA的降解；（2）尽量减少对DNA的机械剪切 破坏。 u 从新鲜组织、培养细胞或低温保存的组织细胞中提取，常采用在EDTA以及SDS或CTAB等试剂存 在下用蛋白酶K消化细胞，再用酚抽提。获得的DNA经酶切后可用于Southern分析，还可用于 PCR扩增、文库构建等实验
核酸操作技术2.质粒DNA的提取质粒(plasmid)：细菌染色体外的小型环状双链DNA分子。环状质粒、线性质粒；DNA质粒、：RNA质粒BacterialDNAPlasmid:特点%①染色体外的遗传因子Q②共价闭合环状的双链DNA；③大小为1-200kb;含对宿主有利的酶基因，并使宿主具有以下表型：a.产生抗性；b.产生抗素；c.降解有机物；d.生成大肠杆菌素；e.生成肠毒素；f.生成限制酶和修饰酶
一 核酸操作技术 2.质粒DNA的提取 u 质粒(plasmid)：细菌染色体外的小型环状双链DNA分子。环状质粒、线性质粒；DNA质粒、 RNA质粒 u 特点 ①染色体外的遗传因子; ②共价闭合环状的双链DNA; ③大小为1-200kb; ④含对宿主有利的酶基因，并使宿主具有以下表型：a.产生抗性；b.产生抗素; c.降解有机物；d. 生成大肠杆菌素；e.生成肠毒素；f.生成限制酶和修饰酶
核酸操作技术2.质粒DNA的提取GGATCCCCTAGG启动子理想的质粒抗生素ACCGG抗性基因GGCC质粒pcDNA3拷贝数多Pyul5.4 kb抗生素B抗性基因GATC复制原点DVNCTAGColE1TenexiATCBsml两三个遗传标志，如抗药性基因：抗氨芒青霉素基因(ampr）、抗四环素基因(tetr);β-半乳糖苷酶基因(lacZ)。多个限制酶的单一切点，即多克隆位点(multiplecloningsites,McS)
一 核酸操作技术 2.质粒DNA的提取 u理想的质粒 u拷贝数多 u复制原点 u两三个遗传标志，如抗药性基因：抗氨苄青霉素基因(ampr) 、抗四环素 基因(tet r)；β-半乳糖苷酶基因(lac Z) 。 u多个限制酶的单一切点，即多克隆位点(multiple cloning sites,MCS)