四氧化锇可证明脂肪滴的存在。苏丹Ⅲ和苏丹 黑也常用于脂肪的鉴定。 米伦反应及重氮反应等用来测定蛋白质 检测和定位酶的技术是基于细胞或组织切片与适 宜底物共同孵育,通过一定方法使产物显示出来。例 如检测碱性磷酸酶的格莫瑞方法。 三、特异蛋白质抗原的定位与定性 免疫荧光和免疫电镜是最常用的细胞内蛋白质定位 技术。 、免疫荧光技术 免疫荧光技术就是将免疫学方法与荧光标记技术 相结合研究特异蛋白质抗原在细胞内分布的方法
◼ 四氧化锇 可证明脂肪滴的存在。苏 丹 Ⅲ和苏丹 黑也常用于脂肪的鉴定。 ◼ 米伦反应及重氮反应等用来测定蛋白质。 ◼ 检测和定位酶的技术是基于细胞或组织切片与适 宜底物共同孵育，通过一定方法使产物显示出来 。例 如检测碱性磷酸酶的格莫瑞方法。 ◼ 三、特异蛋白质抗原的定位与定性 ◼ 免疫荧光和免疫电镜是最常用的细胞内蛋白质定位 技术。 ◼ 1、免疫荧光技术 ◼ 免疫荧光技术就是将免疫学方法与荧光标记技术 相结合研究特异蛋白质抗原在细胞内分布的方法
2、免疫电镜技术 免疫电镜技术使特异蛋白的定位与超微结构结合 起来,使抗原定位更准确。如蛋白分泌的研究胞内酶 的研究;一些结构蛋白的研究 四、细胞内特异核酸的定位与定性 原位杂交技术 用标记的核酸探针通过分子杂交确定特殊核苷酸 序列在染色体上或细胞中的位置的方法 2、 Southern技术(了解) 蛋白样品经电泳后,与DNA探针进行吸附,与 DNA有亲合作用的蛋白带被显示出来
◼ 2、免疫电镜技术 ◼ 免疫电镜技术使特异蛋白的定位与超 微结构结合 起来，使抗原定位更准确。如蛋白分泌的研究胞内酶 的研究；一些结构蛋白的研究。 ◼ ◼ 四、细胞内特异核酸的定位与定性 ◼ 1、原位杂交技术 ◼ 用标记的核酸探针通过分子杂交确定特殊核苷酸 序列在染色体上或细胞中的位置的方法。 ◼ 2、Southern技术（了解） ◼ 蛋白样品经电泳后，与DNA探针进行吸附，与 DNA有亲合作用的蛋白带被显示出来
五、利用放射性标记技术研究生物大分子在细胞内的 合成动态 放射自显影技术是利用放射性同位素的电离辐射 对乳胶的感光作用,对样品中放射性标记物进行定性 与定位测定 放射自显影技术包括两个主要步骤:即同位素标 记的大分子前体的掺入和细胞内同位素所在位置的显 基本步骤为:掺入、制片、敷胶、曝光、显影、 镜检 六、定量细胞化学分析技术 显微分光光度测定技术 根据细胞内某些物质对光谱吸收的原理,来测定 这些物质(如核酸与蛋白质等)在细胞内的含量
◼ 五、利用放射性标记技术研究生物大分子在细胞内的 合成动态 ◼ 放射自显影技术是利用放射性同位素的电离辐射 对乳胶的感光作用，对样品中放射性标记物进行定性 与定位测定。 ◼ 放射自显影技术包括两个主要步骤：即同位素标 记的大分子前体的掺入和细胞内同位素所在位置的显 示。 ◼ 基本步骤为：掺入、制片、敷胶、曝光、显影、 镜检。 ◼ 六、定量细胞化学分析技术 ◼ 1、显微分光光度测定技术 ◼ 根据细胞内某些物质对光谱吸收的原理，来测定 这些物质（如核酸与蛋白质等）在细胞内的含量
2、流式细胞仪 可定量地测定某一细胞中的DNA、RNA或某一特 异蛋白的含量,以及细胞群体中上述成分含量不同的 细胞的数量
◼ 2、流式细胞仪 ◼ 可定量地测定某一细胞中的DNA、RNA或某一特 异蛋白的含量，以及细胞群体中上述成分含量不同的 细胞的数量
第三节细胞培养、细胞工程与 显微操作技术 、细胞培养 细胞培养就是将动植物组织或细胞从机体取出 分散成单个细胞或直接以单细胞生物,给予必要的 生长条件,让其在培养瓶中或培养基上继续生长与增 殖。 (一)动物细胞培养 从机体取出立即培养的细胞叫原代细胞。适应在 培养条件下持续传代培养的细胞为传代细胞。 通过纯系化或选择法从原代培养细胞中分离出来 的细胞群体叫细胞株,细胞分裂周期约限于5060次
第三节 细胞培养、细胞工程与 显微操作技术 ◼ 一、细胞培养 ◼ 细胞培养就是将动植物组织或细胞从机体取出， 分散成单个细胞 或直接以单细胞 生物，给予必要的 生长条件，让其在培养瓶中或培养基上继续生长与增 殖。 ◼ （一）动物细胞培养 ◼ 从机体取出立即培养的细胞叫原代细胞。适应在 培养条件下持续传代培养的细胞为传代细胞。 ◼ 通过纯系化或选 择法从原代培养细胞中分离出来 的细胞群体叫细胞株，细胞分裂周期约限于50—60次