4、相差显微镜技术和微分干涉显微镜技术 光线在通过密度不同的介质时,其滞留程度不同 即产生了光程差和相位差。相差显微镜的基本原理把 光程差变成振幅差(即明暗)。从而提高样品反差,故 样品不需染色,适合观察活细胞。甚至研究细胞核、 线粒体等细胞器的动态。它在结构上与普通显微镜最 大的不同是在物镜后装有相差板。 微分干涉显微镜用的是偏振光,增加了样品反差, 并具有立体感,可作于研究活体细胞中较大的细胞器。 录像增差显微镜技术在一定程度上可以填补光镜 与电镜之间分辨率上的间隙
◼ 4、相差显微镜技术和微分干涉显微镜技术 ◼ 光线在通过密度不同的介质时，其滞留程度不同， 即产生了光程差和相位差。相差显微镜 的基本原理把 光程差变成振幅差(即明暗)。从而提高样品反差，故 样品不需染色，适合观察活细胞。甚至研究细胞核、 线粒体等细胞器的动态。它在结构上与普通显微镜最 大的不同是在物镜后装有相差板。 ◼ 微分干涉显微镜用的是偏振光，增加了样品反差， 并具有立体感，可作于研究活体细胞中较大的细胞器。 ◼ 录像增差显微镜技术在一定程度上可以填补光镜 与电镜之间分辨率上的间隙
、电了显微镜技术 (一)电了显微镜基本知识 分辨率最终决定于光的波长,由于使用电子束作 光源,电镜的分辨率大大提高。电镜的分辨率常常是 超薄切片厚度的1/10,它的分辨率可达0.2mm,其放大 倍数为106倍 电镜的基本构造包括:①电子東照明系统;②电 磁透镜成像系统;③真空系统;④记录系统;⑤电源 系统。(P3表3-1) (二)主要电镜制样技术介绍人 样品制备技术的特殊要求:①样品要薄;②更好 地保持样品的精细结构;③样品具有一定的反差
◼ 二、电了显微镜技术 ◼ （一）电了显微镜基本知识 ◼ 分辨率最终决定于光的波长，由于使用电子束作 光源，电镜的分辨率大大提高。电镜的分辨率常常是 超薄切片厚度的1/10，它的分辨率可达0.2nm，其放大 倍数为106倍。 ◼ 电镜的基本构造包括：①电子束照明系统 ；②电 磁透镜成像系统；③真空系统；④记录系统；⑤电源 系统。（P52表3-1） ◼ （二）主要电镜制样技术介绍人 ◼ 样品制备技术的特殊要求：①样品要薄；②更好 地保持样品的精细结构；③样品具有一定的反差
主要的用于观察生物样品的电镜技术有:①超薄 切片技术;是观察细胞超微结构的基础。②负染色技 术;③冷冻断裂和冷冻蚀刻电镜技术技术;④电镜三 维重构技术;⑤扫描电镜技术(SEM)是观察细胞表 面形的有力工具 三、扫描隧道显微镜(STM 是一种探测微观世界物质表面形貌的仪器,在纳 米生物学的研究领域具有独特的优越性 STM的特点:①具有原子尺度的高分辨本领;② 可在真空、大气、液体等条件下工作;③非破坏性测 量
◼ 主要的用于观察生物样品的电镜技术有：①超薄 切片技术；是观察细胞超微结构的基础。②负染色技 术；③冷冻断裂和冷冻蚀刻电镜技术技术；④ 电镜三 维重构技术；⑤扫描电镜技术（SEM）是观察细胞表 面形的有力工具。 ◼ 三、扫描隧道显微镜(STM) ◼ 是一种探测微观世界物质表面形貌的仪器，在纳 米生物学的研究领域具有独特的优越性。 ◼ STM的特点：①具有原子尺度的高分辨本领；② 可在真空、大气、液体等条件下工作；③非破坏性测 量
第二节细胞组分的分析方法 细胞成分分析和形态学观察相结合,可揭示生物大分 子在细胞内的构建及功能。 用超速离心技术分离细胞器与生物大分 子及其复合物 利用多种方法使细胞崩解,形成细胞器和细胞组 分的混合匀浆,再通过差速离心,即利用不同的离心 速度所产生的不同离心力,将各种亚细胞组分和各种 颗粒分开 差速离心与密度离心相结合可以达到精确的分离
第二节 细胞组分的分析方法 ◼ 细胞成分分析和形态学观察相结合，可揭示生物大分 子在细胞内的构建及功能。 ◼ 一、用超速离心技术分离细胞器与生物大分 子及其复合物 ◼ 利用多种方法使细胞崩解，形成细胞器和细胞组 分的混合匀浆，再通过差速离心，即利用不同的离心 速度所产生的不同离心力，将各种亚细胞组分和各种 颗粒分开。 ◼ 差速离心与密度离心相结合可以达到精确的分离
细胞不同组分沉降率不同,主要依赖于它们的形 状和大小,通常以沉降系数S来表示(沉降系数是指悬 浮在密度较低的溶剂中的一种溶质大分子,在每单位 离心场作用下的沉降速率)。 细胞内核酸、蛋白质、酶、糖类、脂质等到的显 色方法 原位成分分析常利用一些显色剂与所检物质的特 殊基团特异性结合的特征,通过染色反应的部位和颜 色的深浅来断某种物质在细胞内的分布与含量 福尔根( Feulgen)反应可特异显示DNA的存在部位 PAS反应可确定多糖的存在
◼ 细胞不同组分沉降率不同，主要依赖于它们的形 状和大小，通常以沉降系数S来表示(沉降系数是指悬 浮在密度较低的溶剂中的一种溶质大分子，在每单位 离 心场作用下的沉降速率)。 ◼ 二、细胞内核酸、蛋白质、酶、糖类、脂质等到的显 色方法 ◼ 原位成分分析常利用一些显色剂与所检物质的特 殊基团特异性结合的特征，通过染色反应的部位和颜 色的深浅来断某种物质在细胞内的分布与含量。 ◼ 福尔根(Feulgen)反应可特异显示DNA的存在部位。 ◼ PAS反应可确定多糖的存在