功能学科实验教程 和药物作用机制重要手段之一,此方法是动物实验最基本的方法。最好选择与人类疾 病相同的动物自发疾病模型,如日本的自发性高血压大鼠,是最理想的人类疾病动物 模型。采用人工的方法使动物在一定致病因素(机械、化学、生物和物理等)作用下, 造成动物的组织、器官或全身的一定损伤,产生特定的功能和代谢改变,复制成与人 类疾病相似的动物疾病模型。 2.在体或离体器官实验在体器官实验是在麻醉情况下对分离暴露的器官或组 织进行观察和研究,如观察其正常状态下的功能变化并分析其机制,或观察动物在疾 病状态下、药物作用状态下,所观察的动物整体或局部器官组织的功能和代谢改变, 从而分析疾病的发生机制和药物的作用机制。离体实验则是利用动物的离体组织、器 官,给予一些在体情况下无法实施的手段,观察该组织、器官的各种生理、病理指标 的变化或药物对其的影响,如离体蛙心灌流,神经干电生理等。 无论是在体实验还是离体实验,都需要设定观察指标,而要这些观察指标需要特 定的方法来实现,这些方法主要有以下几方面: 仪器检测和体液生化测定法用电生理记录仪对动物各种生物电进行观察和 记录,如心电、肌电、脑电等,或对动物体液(血液、尿液等)中各种生物活性物质 进行测定,如各种酶、激素、电解质和血液凝固性等 2.免疫学观察法注入抗原使动物致敏,制备多种抗血清,或采用免疫荧光技 术、酶标记免疫技术、放射免疫测定技术、免疫电镜技术等对动物免疫后各种免疫变 化进行检查。 3.其他方法如条件反射法、生物遗传法、放射生物法、药物化学法等等。 除了上述方法,下面介绍一些实验中常用的具体方法 第一节选择动物的一般方法 健康动物的识别 用于实验研究的动物除特殊要求外,必须都是健康、营养状态良好的。动物的健 康状况对实验结果正确与否有直接的影响。一般情况下,健康动物对药物的耐受能力 较有病动物强,有病动物易于中毒死亡,不健康的动物由于内环境已有某种程度的改 变,故对各种处理反应能力降低,应激耐受力很差,使实验结果失真。 健康动物外观发育正常、无畸形、无外伤及皮肤无感染,体形丰满,胸廓和背部 发育良好及宽阔、臂部混园而匀称,四肢及背部正常,营养良好,饮食和排尿、排便
功 能 学 科 实 验 教 程 ——————————————————— ——————————————————— 12 和药物作用机制重要手段之一，此方法是动物实验最基本的方法。最好选择与人类疾 病相同的动物自发疾病模型，如日本的自发性高血压大鼠，是最理想的人类疾病动物 模型。采用人工的方法使动物在一定致病因素（机械、化学、生物和物理等）作用下， 造成动物的组织、器官或全身的一定损伤，产生特定的功能和代谢改变，复制成与人 类疾病相似的动物疾病模型。 2．在体或离体器官实验 在体器官实验是在麻醉情况下对分离暴露的器官或组 织进行观察和研究，如观察其正常状态下的功能变化并分析其机制，或观察动物在疾 病状态下、药物作用状态下，所观察的动物整体或局部器官组织的功能和代谢改变， 从而分析疾病的发生机制和药物的作用机制。离体实验则是利用动物的离体组织、器 官，给予一些在体情况下无法实施的手段，观察该组织、器官的各种生理、病理指标 的变化或药物对其的影响，如离体蛙心灌流，神经干电生理等。 无论是在体实验还是离体实验，都需要设定观察指标，而要这些观察指标需要特 定的方法来实现，这些方法主要有以下几方面： 1．仪器检测和体液生化测定法 用电生理记录仪对动物各种生物电进行观察和 记录，如心电、肌电、脑电等，或对动物体液（血液、尿液等）中各种生物活性物质 进行测定，如各种酶、激素、电解质和血液凝固性等。 2．免疫学观察法 注入抗原使动物致敏，制备多种抗血清，或采用免疫荧光技 术、酶标记免疫技术、放射免疫测定技术、免疫电镜技术等对动物免疫后各种免疫变 化进行检查。 3．其他方法 如条件反射法、生物遗传法、放射生物法、药物化学法等等。 除了上述方法，下面介绍一些实验中常用的具体方法。 第一节 选择动物的一般方法 一、健康动物的识别 用于实验研究的动物除特殊要求外，必须都是健康、营养状态良好的。动物的健 康状况对实验结果正确与否有直接的影响。一般情况下，健康动物对药物的耐受能力 较有病动物强，有病动物易于中毒死亡，不健康的动物由于内环境已有某种程度的改 变，故对各种处理反应能力降低，应激耐受力很差，使实验结果失真。 健康动物外观发育正常、无畸形、无外伤及皮肤无感染，体形丰满，胸廓和背部 发育良好及宽阔、臂部混园而匀称，四肢及背部正常，营养良好，饮食和排尿、排便
功能学科实验教程 正常,体重不低于该年龄应达到的平均指标,毛发清洁浓密有光泽,行动迅速,反应 灵敏,不迟钝也不亢进,步态无异常等 二、实验动物性别的识别 的性别 显起的阴和阴茎,雌性有明显的乳头和阴道雌住 雄性 口,因此较易区分。而新生仔的性别判定有以下识 别要点:①外生殖器(阴蒂或阴茎)距离肛门间隔 短的是雌性,间隔长的为雄性:②雄性肛门与外生 殖器之间长有毛发;③雄性的外生殖器(阴茎)突 起较雌性的(阴蒂)大;④雌性乳头较雄性明显 但是对此判别要有一定经验。(图3-1-1) 图3-1-1小鼠的性别判定 2.豚鼠的性别识别豚鼠的妊娠时间比较长, 产下仔鼠有被毛,眼睛能睁开,有恒齿。新生仔的性别也容易通过外生殖器的形态来 判定。雌性外生殖器阴蒂突起比较小,用拇指按住这个突起,其余指拨开大阴唇的被 褶,可看到阴道口,但是一定要注意,豚鼠的阴道口除发情期以外有闭锁膜关闭着, 雄性外生殖器处有包皮覆盖的阴茎的小隆起,用拇指轻轻按住包皮小突起的基部,龟 头突出容易判别 3.兔子的性别识别新生仔兔的性别判定比 大鼠等困难。雌雄是根据肛门和尿道开口处之间的 距离以及尿道开口部的形态来判别,雄性肛门和尿 道开口部之间的距离是雌性的1.5~2倍。手指按 压靠近尿道开口处的下腹部,雌性肛门和尿道开口 部之间的距离不明显伸长,尿道开口依然指向肛门 方向,雄性则距离明显伸长,尿道开口指向肛门相图3-1-2家兔的性别判定 反的方向。雌性的尿道开口部形状是裂缝,细长形 雄的则是圆筒形。成年兔根据雌性阴道口的存在及雄性阴囊部膨胀和阴茎的存在相区 别(图3-1-2)
功 能 学 科 实 验 教 程 ——————————————————— ——————————————————— 13 正常，体重不低于该年龄应达到的平均指标，毛发清洁浓密有光泽，行动迅速，反应 灵敏，不迟钝也不亢进，步态无异常等。 二、实验动物性别的识别 1．小鼠、大鼠的性别识别 成年鼠雄性有明 显膨起的阴囊和阴茎，雌性有明显的乳头和阴道 口，因此较易区分。而新生仔的性别判定有以下识 别要点：①外生殖器（阴蒂或阴茎）距离肛门间隔 短的是雌性，间隔长的为雄性；②雄性肛门与外生 殖器之间长有毛发；③雄性的外生殖器（阴茎）突 起较雌性的（阴蒂）大；④雌性乳头较雄性明显。 但是对此判别要有一定经验。（图 3-1-1） 2．豚鼠的性别识别 豚鼠的妊娠时间比较长， 产下仔鼠有被毛，眼睛能睁开，有恒齿。新生仔的性别也容易通过外生殖器的形态来 判定。雌性外生殖器阴蒂突起比较小，用拇指按住这个突起，其余指拨开大阴唇的被 褶，可看到阴道口，但是一定要注意，豚鼠的阴道口除发情期以外有闭锁膜关闭着。 雄性外生殖器处有包皮覆盖的阴茎的小隆起，用拇指轻轻按住包皮小突起的基部，龟 头突出容易判别。 3．兔子的性别识别 新生仔兔的性别判定比 大鼠等困难。雌雄是根据肛门和尿道开口处之间的 距离以及尿道开口部的形态来判别，雄性肛门和尿 道开口部之间的距离是雌性的 1.5～2 倍。手指按 压靠近尿道开口处的下腹部，雌性肛门和尿道开口 部之间的距离不明显伸长，尿道开口依然指向肛门 方向，雄性则距离明显伸长，尿道开口指向肛门相 反的方向。雌性的尿道开口部形状是裂缝，细长形， 雄的则是圆筒形。成年兔根据雌性阴道口的存在及雄性阴囊部膨胀和阴茎的存在相区 别（图 3-1-2）。 图 3-1-1 小鼠的性别判定 图 3-1-2 家兔的性别判定
功能学科实验教程 第二节实验动物编号的标记方法 进行动物实验时,有时所需动物数量较多。为便于观察每个动物的变化情况,详 细记录各种所需的实验数据,实验前需对动物进行随机分组和编号标记。常用动物编 号的标记方法有多种,各自有其优缺点,实验者需按不同的实验加以选择应用。 涂色法 此法操作简便,取材容易,是动物实验中常用的编号标记方法。 1.常用染料 (1)红色染料:0.5%中性红或品红溶液。 (2)黄色染料:3%~5%苦味酸镕液。 (3)咖啡色染料:2%硝酸银溶液。 (4)黑色染料:煤焦油的酒精溶液。 2.标记规则 根据实验动物被毛颜色的不同,选择不同化学药品涂染动物背部被毛即可。 (1)兔、猫、狗等动物的标记的方法:可用毛笔蘸取不同颜色的染料溶液直接 在动物背部涂写号码。若用硝酸银溶液涂写,则需在日光下暴露10分钟左右,才可 在涂写处见到清晰的咖啡色号码字样。其颜色的深浅,决定于在日光下暴露时间的长 短和日光的强弱。涂写时,实验者最好戴上手套,以免硝酸银溶液溅到手上使皮肤着 色很难洗去 (2)大、小鼠标号:通常在动物的不同部位涂上有色 斑点来表示不同的号码。常用规则是:左前腿代表1、左 后腿代表2、右前腿代表3、右后腿代表4,头部代表5, 尾基部代表10,1+5=6、……10+1=11,余类推。此法只 1⑤⑧ 能编到19号,用于少量动物。 如动物数多可采用另一种编号方法:如左前腿上为1, ③⑥g 左腰部为2,左后腿为3,头部为4,背部为5.尾基部为 6,右前腿为7,右腰部为8,右后腿为9。若动物编号超 过10或更大数字时,可使用两种不同颜色的溶液,如把黄 色定为个位数,红色定为十位数。例如在左前腿上标记红图3-2-1鼠标记方法 色和黄色斑点,表示为11;而头顶红色斑点,右后腿黄色
功 能 学 科 实 验 教 程 ——————————————————— ——————————————————— 14 第二节 实验动物编号的标记方法 进行动物实验时，有时所需动物数量较多。为便于观察每个动物的变化情况，详 细记录各种所需的实验数据，实验前需对动物进行随机分组和编号标记。常用动物编 号的标记方法有多种，各自有其优缺点，实验者需按不同的实验加以选择应用。 一、涂色法 此法操作简便，取材容易，是动物实验中常用的编号标记方法。 1．常用染料 （1）红色染料：0.5％中性红或品红溶液。 （2）黄色染料：3％～5％苦味酸镕液。 （3）咖啡色染料：2％硝酸银溶液。 （4）黑色染料：煤焦油的酒精溶液。 2．标记规则 根据实验动物被毛颜色的不同，选择不同化学药品涂染动物背部被毛即可。 （1）兔、猫、狗等动物的标记的方法：可用毛笔蘸取不同颜色的染料溶液直接 在动物背部涂写号码。若用硝酸银溶液涂写，则需在日光下暴露 10 分钟左右，才可 在涂写处见到清晰的咖啡色号码字样。其颜色的深浅，决定于在日光下暴露时间的长 短和日光的强弱。涂写时，实验者最好戴上手套，以免硝酸银溶液溅到手上使皮肤着 色很难洗去。 （2）大、小鼠标号：通常在动物的不同部位涂上有色 斑点来表示不同的号码。常用规则是：左前腿代表 1、左 后腿代表 2、右前腿代表 3、右后腿代表 4，头部代表 5， 尾基部代表 10，1+5＝6、……10+1＝11，余类推。此法只 能编到 19 号，用于少量动物。 如动物数多可采用另一种编号方法：如左前腿上为 1， 左腰部为 2，左后腿为 3，头部为 4，背部为 5．尾基部为 6，右前腿为 7，右腰部为 8，右后腿为 9。若动物编号超 过 10 或更大数字时，可使用两种不同颜色的溶液，如把黄 色定为个位数，红色定为十位数。例如在左前腿上标记红 色和黄色斑点，表示为 11；而头顶红色斑点，右后腿黄色 图 3-2-1 鼠标记方法
功能学科实验教程 斑点,则表示49号,依此类推(如图3-2-1) 此法缺点是深色被毛的动物不宜采用。 穿耳打孔法 用专门的打孔器,在耳朵的不同部位打孔或打缺口来表示一定号码,是小鼠标记 的常用方法之一。习惯上耳缘内侧打一小孔,按前、中,后分别标为1号、2号、3 号:若在耳缘部打成一缺口,则分别表示4号、5号、6号;若打成双缺口状,则示 7号、8号、9号。右耳表示个位,左耳表示十位数。再加上右耳中部打一孔表示100 左耳中部打一孔表示200,按此法可编至400号 三、挂牌法 此法简便实用,常用于狗、猴、猫等大动物的编号。将号码烙压在圆形或方形金 属牌上,金属牌常用铝板或不锈钢制作,可长期使用不生锈。实验前,用铁丝穿过金 属牌上的小孔,固定在狗链条上。亦可将号码直接烙在拴动物的皮带困上,将此颈围 固定在动物的颈部。 四、其它方法 被毛剪号法:用剪刀在动物背部的被毛上剪出号码。此法编号清楚,可靠 便于实验者观察,用大动物做实验时常采用。 2.人工针刺号码法:用手拔去兔耳的被毛,采用人工针刺号码,刺后涂以酒精 黑墨汁即可。 3.烙印法:采用号码烙印钳将号码烙在免、豚鼠的耳朵上。 第三节实验动物的捕捉和固定 正确的抓取固定动物是为了不损害动物健康,不影响观察指标,并防止被动物咬 伤.保证实验顺利进行
功 能 学 科 实 验 教 程 ——————————————————— ——————————————————— 15 斑点，则表示 49 号，依此类推（如图 3-2-1）。 此法缺点是深色被毛的动物不宜采用。 二、穿耳打孔法 用专门的打孔器，在耳朵的不同部位打孔或打缺口来表示一定号码，是小鼠标记 的常用方法之一。习惯上耳缘内侧打一小孔，按前、中，后分别标为 1 号、2 号、3 号；若在耳缘部打成一缺口，则分别表示 4 号、5 号、6 号；若打成双缺口状，则示 7 号、8 号、9 号。右耳表示个位，左耳表示十位数。再加上右耳中部打一孔表示 100， 左耳中部打一孔表示 200，按此法可编至 400 号。 三、挂牌法 此法简便实用，常用于狗、猴、猫等大动物的编号。将号码烙压在圆形或方形金 属牌上，金属牌常用铝板或不锈钢制作，可长期使用不生锈。实验前，用铁丝穿过金 属牌上的小孔，固定在狗链条上。亦可将号码直接烙在拴动物的皮带困上，将此颈围 固定在动物的颈部。 四、其它方法 1．被毛剪号法：用剪刀在动物背部的被毛上剪出号码。此法编号清楚，可靠， 便于实验者观察，用大动物做实验时常采用。 2．人工针刺号码法：用手拔去兔耳的被毛，采用人工针刺号码，刺后涂以酒精 黑墨汁即可。 3．烙印法：采用号码烙印钳将号码烙在免、豚鼠的耳朵上。 第三节 实验动物的捕捉和固定 正确的抓取固定动物是为了不损害动物健康，不影响观察指标，并防止被动物咬 伤．保证实验顺利进行
功能学科实验教程 、小鼠的抓取固定方法 小鼠性情温顺、一般不会主动咬人,但取用时动作也要轻缓。抓取时先用右手抓 取鼠尾提起,放在其前爪能抓牢的物体表面稍向后提,或放在实验台上,在其向前爬 行时,用左手拇指和食指迅速 捏住其后颈部皮肤,把鼠体置 于左手心中,将鼠尾用无名指 和小指压在手掌上(见图 N 3-3-1)。右手即可进行各种操 作如灌胃,皮下、肌肉和腹腔 注射及其他实验操作。 图3-3-1小鼠捉拿方法 如进行解剖、手术、心脏 及尾部采血和尾静脉注射时,则需将小鼠作一定形式的固定。解剖手术和心脏采血等 均可使动物先取仰卧位(必要时先进行麻醉),再用大头针或线绳将鼠前后肢依次固 定在木板上(见图3-3-2)。尾静脉取血或尾静脉注射时,可用小鼠尾静脉注射架固定 或让小鼠钻入适当大小和重量的容器内,只露出尾巴,这种容器应能够压住尾部不让 其活动;或把小鼠放在一小黑布口袋内,小鼠趋黑,向前爬动,在尾部将小布口袋缩 口,固定小布口袋后,可进行尾部静脉注射或尾静脉采血等操作。 图3-3-2小鼠的固定方法 如只想挪动小鼠,可用两手把它捧起或用右手拇指和食指的指腹抓住尾部中央将 小鼠倒提起来 、大鼠的抓取固定方法 4~5周龄以内的大鼠抓取方法与小鼠相仿,即抓住尾部提起,周龄较大的大鼠
功 能 学 科 实 验 教 程 ——————————————————— ——————————————————— 16 一、小鼠的抓取固定方法 小鼠性情温顺、一般不会主动咬人，但取用时动作也要轻缓。抓取时先用右手抓 取鼠尾提起，放在其前爪能抓牢的物体表面稍向后提，或放在实验台上，在其向前爬 行时，用左手拇指和食指迅速 捏住其后颈部皮肤，把鼠体置 于左手心中，将鼠尾用无名指 和小指压在手掌上（见图 3-3-1）。右手即可进行各种操 作如灌胃，皮下、肌肉和腹腔 注射及其他实验操作。 如进行解剖、手术、心脏 及尾部采血和尾静脉注射时，则需将小鼠作一定形式的固定。解剖手术和心脏采血等 均可使动物先取仰卧位（必要时先进行麻醉），再用大头针或线绳将鼠前后肢依次固 定在木板上（见图 3-3-2）。尾静脉取血或尾静脉注射时，可用小鼠尾静脉注射架固定； 或让小鼠钻入适当大小和重量的容器内，只露出尾巴，这种容器应能够压住尾部不让 其活动；或把小鼠放在一小黑布口袋内，小鼠趋黑，向前爬动，在尾部将小布口袋缩 口，固定小布口袋后，可进行尾部静脉注射或尾静脉采血等操作。 图 3-3-2 小鼠的固定方法 如只想挪动小鼠，可用两手把它捧起或用右手拇指和食指的指腹抓住尾部中央将 小鼠倒提起来。 二、大鼠的抓取固定方法 4～5 周龄以内的大鼠抓取方法与小鼠相仿，即抓住尾部提起，周龄较大的大鼠 图 3-3-1 小鼠捉拿方法