叶绿体的分离、纯化和鉴定
叶绿体的分离、纯化和鉴定
背景与原理 细胞器分离、纯化在细胞生物学研究中的意义 基智肥强的囊缇粑先窠入势些 与功能的 细胞器分离、纯化的主要方法和原理 根据细胞器的古少形述密管物理特性差 技菜心卷辖组公箱度 >细胞器分离、纯化过程中的主要注意事项 尽可能保持所分离细胞器的生物活性,包括匀 浆缓冲液(渗透压、pH、离子强度等)的选择 温度、时间等
背景与原理 细胞器分离、纯化在细胞生物学研究中的意义 细胞器的形成是真核细胞生命活动功能区域化 的基础，细胞器的分离、纯化是深入研究亚细胞 结构与功能的基础。 细胞器分离、纯化的主要方法和原理 根据细胞器的大小、形状、密度等物理特性差 异，离心成为亚细胞组分分离过程中最广泛应用 的技术，主要包括差速离心、和密度梯度离心等 方法。 细胞器分离、纯化过程中的主要注意事项 尽可能保持所分离细胞器的生物活性，包括匀 浆缓冲液（渗透压、pH、离子强度等）的选择、 温度、时间等
梯度介质的选择 1、蔗糖具备足够大的溶解度,以形成所需的密度梯度范围; 低温下黏度高,扩散慢 2、蔗糖不会与样品中的组分发生反应。 3、蔗糖不会引起样品中组分的凝集、变性或失活,没有毒 性。 4、蔗糖浓度大时渗透压不大。 4、蔗糖PH值中性。 5、蔗糖成本低,易获得 R C F 端器小颗粒 大颗粒 混合液 离心开始后 离心结束 时间
梯度介质的选择 1、蔗糖具备足够大的溶解度，以形成所需的密度梯度范围； 低温下黏度高，扩散慢。 2、蔗糖不会与样品中的组分发生反应。 3、蔗糖不会引起样品中组分的凝集、变性或失活，没有毒 性。 4、蔗糖浓度大时渗透压不大。 4、蔗糖PH值中性。 5、蔗糖成本低，易获得
内膜 基质类囊体基粒 基粒类囊体 叶绿体 母系遗传( maternal inheritance) 基质 W 类囊体腔 叶绿体的结构(引自wol,1993) chup1 CX) ThePlantCelVol.15,2805-2815,December2003,www.plantcelorg2003AmericanSocietyofPantBiologists CHLOROPLAST UNUSUAL POSITIONING1 Is Essential for Proper chloroplast Positioning umio Takahashi, b Takeshi Kanegae, Yasuo Niwa, Akeo Kadota, and Masamitsu Wada bA Department of Biology, Faculty of Science, Graduate School of Tokyo Metropolitan University, Hachioji, Tokyo 192-0397, Japan Solution Oriented Research for Science and Technology, Japan Science and Technology Corporation, Kawaguchi, Saitama 3320012, Japan
叶绿体 叶绿体的结构(引自Wolf，1993） 母系遗传（maternal inheritance）
实验目的 掌握叶绿体分离技术 >观察叶绿体的自发荧光和次生荧光,熟悉荧光显微镜的 使用
实验目的 掌握叶绿体分离技术 观察叶绿体的自发荧光和次生荧光，熟悉荧光显微镜的 使用