、材料 精液、玻棒、玻片、小试管、试管架、烧杯、三角烧瓶、温度计、量筒、注射器、标 记笔、电炉、铝锅、小天平、纱布、药棉、胶圈、软木塞、蒸馏水、柠檬酸钠、葡萄糖 新鲜牛奶、新鲜鸡蛋、医用中性石腊油或白腊、75%酒精棉球、精密试纸、显微镜、冰箱 或冰壶、青霉素、链霉素等。 、方法和步骤 (一)稀释液的配制 、牛奶稀释液(猪、牛均可用) 1)将新鲜牛奶用2~3层纱布滤入消毒过的烧杯,然后加盖隔水煮沸消毒10min,取出 冷却 (2)待牛奶冷却后,用消毒过的玻棒将奶皮去掉, (3)按每mL牛乳加青霉素和链霉素各1000IU,混合均匀即成 2、蛋黄、葡萄糖稀释液(供猪用) (1)用小天平秤取2.5g葡萄糖置于消毒过的烧杯中,然后加入蒸馏水50mL。待葡萄糖 完全溶解后,加盖隔水煮沸后消毒10min,然后取出冷却备用。 (2)将鸡蛋洗净抹干并用75%酒精消毒。待酒精完全挥发后。用消毒过的镊子从蛋的中 间将蛋壳打成两段(注意不要将蛋壳打碎)然后互相倾倒直到蛋白流尽为止,流出的蛋白 装在小烧杯内,而蛋黄留在蛋壳里或者倒出装在消毒过的培养皿里,然后用消毒过的注射 器穿过蛋黄膜吸取蛋黄。注意不要吸取蛋黄膜 (3)按比例吸取蛋黄加入于上述消毒好的葡萄糖液中(蛋黄与葡萄糖液的比例为1:4)。 并将注射器反复抽打(即吸入和压出),直至蛋黄完全溶解于葡萄糖液中为止。抽打时, 要注意注射器连接针头的一端不要离开液面,以免形成许多气泡 (4)按每mL蛋黄葡萄糖液加入青霉素和链霉素各1000U,充分混合均匀便成 3、蛋黄柠檬酸钠液(供牛用) (1)用小天平秤取29g柠檬酸钠(二水)置于消毒过的烧杯申,并加入蒸馏水100mL溶 解后,加盖隔水煮沸消毒10min,取出冷却,备用 (2)用消毒过的注射器吸取蛋黄(方法与配制蛋黄葡萄糖液同)
11 二、材料 精液、玻棒、玻片、小试管、试管架、烧杯、三角烧瓶、温度计、量筒、注射器、标 记笔、电炉、铝锅、小天平、纱布、药棉、胶圈、软木塞、蒸馏水、柠檬酸钠、葡萄糖、 新鲜牛奶、新鲜鸡蛋、医用中性石腊油或白腊、75%酒精棉球、精密试纸、显微镜、冰箱 或冰壶、青霉素、链霉素等。 三、方法和步骤 （一）稀释液的配制 1、牛奶稀释液（猪、牛均可用） （1）将新鲜牛奶用 2～3 层纱布滤入消毒过的烧杯，然后加盖隔水煮沸消毒 10min，取出 冷却。 （2）待牛奶冷却后，用消毒过的玻棒将奶皮去掉。 （3）按每 mL 牛乳加青霉素和链霉素各 1000 IU，混合均匀即成。 2、蛋黄、葡萄糖稀释液（供猪用） （1）用小天平秤取 2.5g 葡萄糖置于消毒过的烧杯中，然后加入蒸馏水 50mL。待葡萄糖 完全溶解后，加盖隔水煮沸后消毒 10min，然后取出冷却备用。 （2）将鸡蛋洗净抹干并用 75%酒精消毒。待酒精完全挥发后。用消毒过的镊子从蛋的中 间将蛋壳打成两段（注意不要将蛋壳打碎）然后互相倾倒直到蛋白流尽为止，流出的蛋白 装在小烧杯内，而蛋黄留在蛋壳里或者倒出装在消毒过的培养皿里，然后用消毒过的注射 器穿过蛋黄膜吸取蛋黄。注意不要吸取蛋黄膜。 （3）按比例吸取蛋黄加入于上述消毒好的葡萄糖液中（蛋黄与葡萄糖液的比例为 1：4）。 并将注射器反复抽打（即吸入和压出），直至蛋黄完全溶解于葡萄糖液中为止。抽打时， 要注意注射器连接针头的一端不要离开液面，以免形成许多气泡。 （4）按每 mL 蛋黄葡萄糖液加入青霉素和链霉素各 1000 IU，充分混合均匀便成。 3、蛋黄柠檬酸钠液（供牛用） （1）用小天平秤取 2.9g 柠檬酸钠（二水）置于消毒过的烧杯申，并加入蒸馏水 100mL 溶 解后，加盖隔水煮沸消毒 10min，取出冷却，备用。 （2）用消毒过的注射器吸取蛋黄（方法与配制蛋黄葡萄糖液同）
(3)量取冷却后的柠檬酸钠液375mL装入另一消毒过的烧杯中,然后加入蛋黄12.5mL 混合均匀(混合方法与蛋黄葡萄糖液同)。 (4)按每mL蛋黄柠檬酸钠液加入青霉素和链霉素各1000U混合均匀即成 (二)精液的稀释与分装 、将精液和稀释液同置于室温中存放10min左右,使其温度一致。 2、检查精子的活率,要求活率在0.7以上者,方可作稀释保存用。 3、用清毒过的注射器吸取少量的稀释液冲洗贮精瓶 4、用消毒过的注射器将精液量入贮精瓶。 、按稀释比例将上述三种稀释液分别沿瓶壁缓慢加λ精液中,并轻轻摇动使其混合均 6、取稀释后的精液一滴于载玻片上镜检精子活率 7、稀释后的活率如合格,即可按一定的剂量进行分装,每组稀释液分装7管。 8、每管加入消毒过的医用中性石腊油于精液面上,约1~2mm厚度 9、贴上标签,注明畜别、公畜号、精液号数、稀释液种类和日期等 (三)降温与保存 将分装好的精液每组一支扎成一捆(用胶圈扎紧),放在冷水盆中然后放入冰箱中保 (四)精液保存效果的测定 每天取出一捆,逐管进行活率检查,直至精子全部死完为止,检查结果记录于表中。 四、注意事顶 1、接触精液的用具,事先必须经过充分洗涤和消毒 2、配制稀释液时,药物的称量要准确 3、整个实验过程,操作应迅速,尽量做到无菌畜操作,以防精液受污染 4、严防水份、酒精以及其他一切有害物品混入。 5、避免阳光或紫外线直接照射精液
12 （3）量取冷却后的柠檬酸钠液 37.5mL 装入另一消毒过的烧杯中，然后加入蛋黄 12.5mL 混合均匀（混合方法与蛋黄葡萄糖液同）。 （4）按每 mL 蛋黄柠檬酸钠液加入青霉素和链霉素各 1000 IU 混合均匀即成。 （二）精液的稀释与分装 l、将精液和稀释液同置于室温中存放 10min 左右，使其温度一致。 2、检查精子的活率，要求活率在 0.7 以上者，方可作稀释保存用。 3、用清毒过的注射器吸取少量的稀释液冲洗贮精瓶。 4、用消毒过的注射器将精液量入贮精瓶。 5、按稀释比例将上述三种稀释液分别沿瓶壁缓慢加入精液中，并轻轻摇动使其混合均 匀。 6、取稀释后的精液一滴于载玻片上镜检精子活率。 7、稀释后的活率如合格，即可按一定的剂量进行分装，每组稀释液分装 7 管。 8、每管加入消毒过的医用中性石腊油于精液面上，约 l～2mm 厚度。 9、贴上标签，注明畜别、公畜号、精液号数、稀释液种类和日期等。 （三）降温与保存 将分装好的精液每组一支扎成一捆（用胶圈扎紧），放在冷水盆中然后放入冰箱中保 存。 （四）精液保存效果的测定 每天取出一捆，逐管进行活率检查，直至精子全部死完为止，检查结果记录于表中。 四、注意事顶 1、接触精液的用具，事先必须经过充分洗涤和消毒。 2、配制稀释液时，药物的称量要准确。 3、整个实验过程，操作应迅速，尽量做到无菌畜操作，以防精液受污染。 4、严防水份、酒精以及其他一切有害物品混入。 5、避免阳光或紫外线直接照射精液