五、基因表达调控 (二)基因作用的调控:原核生物的基因调控 4乳糖操纵元存在的遗传证据: (1).遗传分析的三个基本假定: ①阻遏基因的产物是可以在细胞中扩散的反式调控元件: ②操纵子O是调控位点,不编码蛋白; ③0位点需紧邻无本在有无我的表理型 阝半乳精苷酸活性 受其控制的结构基因, 基因型 是顺式调控元件; 通过性导产生局部 10c 二倍体,可以进行遗传 验证。 E
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五、基因表达调控 (二)基因作用的调控:原核生物的基因调控 (2).阻遏蛋白的分离与鉴定 吉尔伯特( Gilbert w,1966)等利用阻遏蛋白超量表达突变 型( regulator Quantity,)呻分离出阻遏蛋白; ①.卫TG诱导细胞,分离提取阻遏蛋白,用含有同位素标 记的卫TG溶液透析,透析袋内外浓度不一样提取物中含有与 TPTG结合的物质,纯化分析证明具有蛋白特性 IPTG -.thopatctm MM 乳糖类似物 SrucLrp o to woo ef T w cce, PTG The sDtigeldtrede erdao is rotorod by Boaaoeweabwio 2/95
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五、基因表达调控 (二)基因作用的调控:原核生物的基因调控 ②沉降分析: IPTG粗遏蛋白复合物+1acO序列:DNA沉降系数为40s IPIG阻遏蛋白复合物:沉降系数为7S IPTG阻遏蛋白复合物(同位素标记+DNA序列:超速梯度 沉降分析有同位标记的沉降系数为40S。 ③序列特异结合: 阻遏蛋白只与正常的乳糖操纵子(lacO)序列结合,而 不与1acO的序列结合。 3/95
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五、基因表达调控 (二)基因作用的调控:原核生物的基因调控 3).蛋白的结晶分析: 刘毅斯( LewIs m, 199等成功地测定了 阻遏蛋白的晶体结构, 与诱导物以及与DNA序m 列的结合的结构 阻遏蛋白: sA回i 360个氨基酸; 他编礼墙通最白结品分们产生的采镇 功能蛋白: 耻通白络及其与输子会横式理 附围量白体头导使情合位值,盘上面是[ 合位点D配差格西体与而个操级子区符情念 同聚四聚体 附围物和问时与乳糖将合,限意物与0和再个撞子 病结含,使病动子的一段序限挥割芽 4/95
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五、基因表达调控 (二)基因作用的调控:原核生物的基因调控 操纵元调控位点的精细分析: porose lec 7 2 412 我操继元的不同调控俊点 a.C4P结合位点D.和N聚合酶结合位点R形成排初环的区域 下面的数字表示转录起始点上下游的碱基数 5195
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