亮型培慕冠程 令基因工程酋培养 4、哺乳动物细胞 哺乳动物细胞在表达时有正确的氨基酸排列, 而且所有转录后处理与在整个动物中相同, 在某种情况下可能转录后修饰有些不同但它 可提供最接近于天然副本的产物,此外多数 产物可以分泌到胞外 但动物细胞生长缓慢,培养基价格昂贵,蛋 白表达水平较低。用于重组DNA生产蛋白的 最常用的宿主是cHo(中国仓鼠卵巢细胞)。 http://biotech.ecust.educn/jpkc/figc
http://biotech.ecust.edu.cn/jpkc/fjgc 4、哺乳动物细胞 哺乳动物细胞在表达时有正确的氨基酸排列， 而且所有转录后处理与在整个动物中相同， 在某种情况下可能转录后修饰有些不同但它 可提供最接近于天然副本的产物，此外多数 产物可以分泌到胞外。 但动物细胞生长缓慢，培养基价格昂贵，蛋 白表达水平较低。用于重组DNA 生产蛋白的 最常用的宿主是CHO（中国仓鼠卵巢细胞）。 典型培养过程 ❖基因工程菌培养
亮型培慕冠程 令基因工程酋培养 三、利用基因工程菌生产的特点 ●基因工程菌带有外源基因,外源基因可能在质 粒上也可能整合到染色体上,这些基因可能不稳 定。丢失外源基因的菌往往比未丢失的菌生长快 得多,这样就会大大降低产物的表达。为了抑制 基因丢失的菌的生长,一般在培养中加入选择压 力,如抗生素 ●基因工程菌的培养一般分两段。前期是菌体生 长,生长到某一阶段,加入诱导因子,诱发产物 表达。 http://biotech.ecust.educn/jpkc/figc
http://biotech.ecust.edu.cn/jpkc/fjgc 三、利用基因工程菌生产的特点 ⚫基因工程菌带有外源基因，外源基因可能在质 粒上也可能整合到染色体上，这些基因可能不稳 定。丢失外源基因的菌往往比未丢失的菌生长快 得多，这样就会大大降低产物的表达。为了抑制 基因丢失的菌的生长，一般在培养中加入选择压 力，如抗生素。 ⚫基因工程菌的培养一般分两段。前期是菌体生 长，生长到某一阶段，加入诱导因子，诱发产物 表达。 典型培养过程 ❖基因工程菌培养
亮型培慕冠程 令基因工程酋培养 四、基因不稳定性 生产的目标是得到最大量的外源蛋白,但是大量 外源蛋白的形成对宿主细胞是有损害的,通常是 致死的,失去制造外源蛋白的能力的细胞一般生 长得快得多,从而能替代有生产能力的菌株,这 就导致基因的不稳定性。 基因的不稳定性原因: ●分离丢失、 ●结构不稳定性 ●宿主细胞调节突变 http://biotech.ecust.educn/jpkc/figc
http://biotech.ecust.edu.cn/jpkc/fjgc 四、基因不稳定性 生产的目标是得到最大量的外源蛋白，但是大量 外源蛋白的形成对宿主细胞是有损害的，通常是 致死的，失去制造外源蛋白的能力的细胞一般生 长得快得多，从而能替代有生产能力的菌株，这 就导致基因的不稳定性。 基因的不稳定性原因： ⚫分离丢失、 ⚫结构不稳定性 ⚫宿主细胞调节突变 典型培养过程 ❖基因工程菌培养
亮型培慕冠程 令基因工程酋培养 1、分离丢失 当细胞分裂时一个子细胞没有接受质粒就出现分离 丢失。质粒可分为高拷贝质粒(>20拷贝/细胞)和 低拷贝质粒(有时低到每个细胞一至二个拷贝)。 低拷贝质粒有专门的机制保证在子代细胞中有相等 的分配,高拷贝质粒通常很少遵循二分法分配到子 代细胞。对于高拷贝质粒,几乎所有子细胞接受 些质粒,也有可能有的细胞没有接受质粒,当然形 成无质粒细胞的可能性是低的(每百万细胞分裂中 个) http://biotech.ecust.educn/jpkc/figc
http://biotech.ecust.edu.cn/jpkc/fjgc 1、分离丢失 当细胞分裂时一个子细胞没有接受质粒就出现分离 丢失。质粒可分为高拷贝质粒（>20拷贝/细胞）和 低拷贝质粒（有时低到每个细胞一至二个拷贝）。 低拷贝质粒有专门的机制保证在子代细胞中有相等 的分配，高拷贝质粒通常很少遵循二分法分配到子 代细胞。对于高拷贝质粒，几乎所有子细胞接受一 些质粒，也有可能有的细胞没有接受质粒，当然形 成无质粒细胞的可能性是低的（每百万细胞分裂中 一个）。 典型培养过程 ❖基因工程菌培养
亮型培慕冠程 令基因工程酋培养 但在大的反应器中含有非常多的细胞,总会存在 无质粒细胞,例如1000L发酵液,每毫升有109 个细胞,总共就有1015个细胞,那么在这个反应 器中就含有109个无质粒细胞。 质粒的分离丢失可能受许多环境因素影响,如溶 氧、温度、培养基组成和恒化器中的稀释速率。 许多质粒也会形成多聚体,它是相同质粒附着在 起形成一个单位 http://biotech.ecust.educn/jpkc/figc
http://biotech.ecust.edu.cn/jpkc/fjgc 但在大的反应器中含有非常多的细胞，总会存在 无质粒细胞，例如1000L发酵液，每毫升有109 个细胞，总共就有1015个细胞，那么在这个反应 器中就含有109个无质粒细胞。 质粒的分离丢失可能受许多环境因素影响，如溶 氧、温度、培养基组成和恒化器中的稀释速率。 许多质粒也会形成多聚体，它是相同质粒附着在 一起形成一个单位。 典型培养过程 ❖基因工程菌培养