亮型培慕冠程 令基因工程酋培养 二、宿主-载体系统 构建基因工程菌,必须选择宿主和表达系统, 一般希望翻译后的处理要简单,如果用于食 品要考虑宿主菌是否列入FDA表中,列入的 认为是安全的菌。常用的宿主系统有: 大肠杆菌 Gt细菌 低等真核细胞 哺乳动物细胞 http://biotech.ecust.educn/jpkc/figc
http://biotech.ecust.edu.cn/jpkc/fjgc 二、宿主-载体系统 构建基因工程菌，必须选择宿主和表达系统， 一般希望翻译后的处理要简单，如果用于食 品要考虑宿主菌是否列入FDA表中，列入的 认为是安全的菌。常用的宿主系统有： 大肠杆菌 G+细菌 低等真核细胞 哺乳动物细胞 典型培养过程 ❖基因工程菌培养
亮型培慕冠程 令基因工程酋培养 1、大肠杆菌 如果产品翻译后不需要修饰,大肠杆菌是最 普遍选用的宿主。 优点: ●人们对大肠杆菌的生理学和遗传学背景了解 得比其他任何生物深。有利于进行复杂的基 因操作; ●大肠杆菌有相当高的生长速率,并能长到高 细胞浓度(50g); ●大肠杆菌能生长在简单的便宜的培养基上。 http://biotech.ecust.educn/jpkc/figc
http://biotech.ecust.edu.cn/jpkc/fjgc 1、大肠杆菌 如果产品翻译后不需要修饰，大肠杆菌是最 普遍选用的宿主。 优点： ⚫人们对大肠杆菌的生理学和遗传学背景了解 得比其他任何生物深。有利于进行复杂的基 因操作； ⚫大肠杆菌有相当高的生长速率，并能长到高 细胞浓度（50g/l）； ⚫大肠杆菌能生长在简单的便宜的培养基上。 典型培养过程 ❖基因工程菌培养
亮型培慕冠程 令基因工程酋培养 这些因素给大肠杆菌许多经济上的优势。但大 肠杆菌不是完美的宿主。主要问题是大肠杆菌 分泌( secretion)的蛋白通常在细胞内,当这些 蛋白达到高浓度时,会被水解或形成不溶的包 含体。其中主要是外源蛋白,但也含有其它细 胞物质。包含体中的蛋白是不折叠的,不折叠 的蛋白没有生物活性,必须重新溶解并使它复 性 大量的外源蛋白的产生会触发热冲击响应。热 冲击调节子的一种响应是增加蛋白水解酶的活 性。在一些情况下,细胞内蛋白水解酶是使蛋 白的降解速率几乎等于产生的速率 http://biotech.ecust.educn/jpkc/figc
http://biotech.ecust.edu.cn/jpkc/fjgc 这些因素给大肠杆菌许多经济上的优势。但大 肠杆菌不是完美的宿主。主要问题是大肠杆菌 分泌(secretion)的蛋白通常在细胞内，当这些 蛋白达到高浓度时，会被水解或形成不溶的包 含体。其中主要是外源蛋白，但也含有其它细 胞物质。包含体中的蛋白是不折叠的，不折叠 的蛋白没有生物活性，必须重新溶解并使它复 性。 大量的外源蛋白的产生会触发热冲击响应。热 冲击调节子的一种响应是增加蛋白水解酶的活 性。在一些情况下，细胞内蛋白水解酶是使蛋 白的降解速率几乎等于产生的速率。 典型培养过程 ❖基因工程菌培养
亮型培慕冠程 令基因工程酋培养 2、G细菌 枯草杆菌是可替代大肠杆菌的菌种,它是 G菌,它没有外膜,并且能把蛋白分泌 ( excretion)到胞外。它的这一性质对生 产非常有吸引力。然而枯草杆菌有许多问题 妨碍它在商业上的采用。主要是枯草杆菌产 生大量的蛋白酶,会很快降解产物。而且枯 草杆菌基因构建比大肠杆菌困难,质粒稳定 性也比较差,所以在使用上有较大的限制, http://biotech.ecust.educn/jpkc/figc
http://biotech.ecust.edu.cn/jpkc/fjgc 2、G +细菌 枯草杆菌是可替代大肠杆菌的菌种，它是 G+菌，它没有外膜，并且能把蛋白分泌 （excretion）到胞外。它的这一性质对生 产非常有吸引力。然而枯草杆菌有许多问题 妨碍它在商业上的采用。主要是枯草杆菌产 生大量的蛋白酶，会很快降解产物。而且枯 草杆菌基因构建比大肠杆菌困难，质粒稳定 性也比较差，所以在使用上有较大的限制， 典型培养过程 ❖基因工程菌培养
亮型培慕冠程 令基因工程酋培养 3、低等真核细胞 酵母菌酿酒酵母是第一个被人利用的生物, 它的最大生长速率是大肠杆菌的25%,酵母比 最大的细菌大,容易从发酵液中回收。酵母有 简单糖基化能力和分泌蛋白的能力。这些是它 的优点。但酵母达到高表达水平比大肠杆菌困 难,外源蛋白分泌到胞外也有限,现在发展了 其他的酵母如甲醇营养型酵母等。 当产生是外源蛋白需要复杂的糖基化和翻译后 修饰时,低等真核细胞就不能适应,要用动物 细胞组织培养来达到。 http://biotech.ecust.educn/jpkc/figc
http://biotech.ecust.edu.cn/jpkc/fjgc 3、低等真核细胞 酵母菌 酿酒酵母是第一个被人利用的生物， 它的最大生长速率是大肠杆菌的25%，酵母比 最大的细菌大，容易从发酵液中回收。酵母有 简单糖基化能力和分泌蛋白的能力。这些是它 的优点。但酵母达到高表达水平比大肠杆菌困 难，外源蛋白分泌到胞外也有限，现在发展了 其他的酵母如甲醇营养型酵母等。 当产生是外源蛋白需要复杂的糖基化和翻译后 修饰时，低等真核细胞就不能适应，要用动物 细胞组织培养来达到。 典型培养过程 ❖基因工程菌培养