凯氏定氨法：常量法、微量法及经改进后的改良 凯氏定氨法。 微量凯氏定氨法样品质量及试剂用量较少，且有一套 微量凯氏定氨器。 目前通用以硫酸铜作催化剂的常量、半微量、微量 凯氏定氨法。 在凯氏法改良中主要的问题是，氨化合物中氨的完 全氨化问题及缩短时间、简化操作的问题，即分解试 样所用的催化剂。 常量改良凯氏定氮法在催化剂中增加了二氧化钛。 LOGO
LOGO 凯氏定氮法：常量法、微量法及经改进后的改良 凯氏定氮法。 微量凯氏定氮法样品质量及试剂用量较少，且有一套 微量凯氏定氮器。 目前通用以硫酸铜作催化剂的常量、半微量、微量 凯氏定氮法。 在凯氏法改良中主要的问题是，氮化合物中氮的完 全氨化问题及缩短时间、简化操作的问题，即分解试 样所用的催化剂。 常量改良凯氏定氮法在催化剂中增加了二氧化钛
2.1常量凯氏定氮法 (1) 原理 样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋 白质分解，其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水 逸出，而样品中的有机氮转化为氨与硫酸结合 成硫酸铵。然后加碱蒸馏，使氨蒸出，用硼酸 吸收后再以标准盐酸或硫酸溶液滴定。根据标 准酸消耗量可计算出蛋白质的含量。 LOGO
LOGO (1) 原理 样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋 白质分解，其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水 逸出，而样品中的有机氮转化为氨与硫酸结合 成硫酸铵。然后加碱蒸馏，使氨蒸出，用硼酸 吸收后再以标准盐酸或硫酸溶液滴定。根据标 准酸消耗量可计算出蛋白质的含量。 2.1 常量凯氏定氮法
①样品消化 2NH2(CH)COOH+13H2SO=(NH)SO+6CO2+12S02+16H2O 浓硫酸具有脱水性，有机物脱水后被炭化为 碳、氢、氨。浓硫酸又具有氧化性，将有机物 炭化后的碳化为二氧化碳，硫酸则被还原成二 氧化硫 2H2S04+C=2S02+2HO+CO) 二氧化硫使氨还原为氨，本身则被氧化为 三氧化硫，氨随之与硫酸作用生成硫酸铵留在 酸性溶液中。 H,SO+2NH=NHSO LOGO
LOGO ① 样品消化 2NH2 (CH)2COOH ＋ 13H2SO4 ＝ (NH4 ) 2SO4 ＋ 6CO2 ＋ 12SO2 ＋ 16H2O 浓硫酸具有脱水性，有机物脱水后被炭化为 碳、氢、氮。浓硫酸又具有氧化性，将有机物 炭化后的碳化为二氧化碳，硫酸则被还原成二 氧化硫 2H2SO4 ＋C ＝2SO2＋ 2H2O ＋CO2 二氧化硫使氮还原为氨，本身则被氧化为 三氧化硫，氨随之与硫酸作用生成硫酸铵留在 酸性溶液中。 H2 SO4＋2NH3 ＝ (NH4 ) 2 SO4
②蒸馏：在消化完全的样品溶液中加入浓氢氧化钠使呈碱 性，加热蒸馏，即可释放出氨气，反应方程式如下： 2NaOH+(NH)2SO=2NH31+Na SO+2H2O ③吸收与滴定：加热蒸馏所放出的氨，可用硼酸溶液进行 吸收，待吸收完全后，再用盐酸标准溶液滴定，因硼酸呈微 弱酸性（k=5.8×1010),用酸滴定不影响指示剂的变色反 应，但它有吸收氨的作用，吸收及滴定的反应方程式如下： 2NH3+4H3B03=(NH4)2B4O7+5H20 (NH)2BO+2HCH+5H2O=2NH CH+4H3BO: LOGO
LOGO ② 蒸馏：在消化完全的样品溶液中加入浓氢氧化钠使呈碱 性，加热蒸馏，即可释放出氨气，反应方程式如下： ③ 吸收与滴定：加热蒸馏所放出的氨，可用硼酸溶液进行 吸收，待吸收完全后，再用盐酸标准溶液滴定，因硼酸呈微 弱酸性（k＝5.8×10-10），用酸滴定不影响指示剂的变色反 应，但它有吸收氨的作用，吸收及滴定的反应方程式如下： 2NaOH＋ (NH4 ) 2 SO4 ＝ 2NH3 ↓＋ Na2 SO4 ＋ 2H2O 2NH3 + 4H3BO3=(NH4 ) 2B4O7+5H2O (NH4 ) 2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3
(2)适用范围 此法可应用于各类食品中蛋白质含量测定 (3)仪器 ①500ml凯氏烧瓶；②定氮蒸馏装置 (4)试剂 ①硫酸铜；②硫酸钾；③硫酸；④40gL硼酸 溶液；⑤混合指示剂；⑥400gL氢氧化钠；⑦ 0.1moL盐酸标准溶液 LOGO
LOGO (2) 适用范围 此法可应用于各类食品中蛋白质含量测定 (3)仪器 ①500ml凯氏烧瓶；②定氮蒸馏装置 (4)试剂 ①硫酸铜 ； ② 硫酸钾；③ 硫酸； ④ 40g∕L硼酸 溶液； ⑤ 混合指示剂； ⑥ 400g∕L氢氧化钠；⑦ 0.1mol∕L盐酸 标准溶液