催化因子 此酶以DNA为模板合成 段RNA这段RNA作为合成DNA的引物( Primer)。 实质是以DNA为模板的RNA聚合酶。 2.DNA聚合以DNA为模板的DNA合成酶,其催化 反应的特点(1)以四种脱氧核苷酸三磷酸为底物; (2)反应需要有模板的指导;(3)反应需要有3 OH存在 (4)DNA链的合成方向为5>35生物大分子合成: 底物、酶、 OH PPP-O-CH2O 5 能量、模板 OH P329需要模板的例证
催化因子 1.引物合成酶(引发酶):此酶以DNA为模板合成一 段RNA,这段RNA作为合成DNA的引物(Primer)。 实质是以DNA为模板的RNA聚合酶。 2.DNA聚合酶:以DNA为模板的DNA合成酶,其催化 反应的特点 (1)以四种脱氧核苷酸三磷酸为底物; (2)反应需要有模板的指导;(3)反应需要有3- OH存在; (4)DNA链的合成方向为5 → 3 N 3 5 5 OH PPP-O-CH2 O OH 生物大分子合成: 底物、酶、 能量、模板 P329需要模板的例证
(5)DNA聚合酶的反应可以利用DNA双 链作为模板和引物,亦可以单链DNA作为 模板和引物 (6)DNA的体外聚合必须加入少量的 DNA才能进行。DNA在提取过程中易形 成切口〔nick)或缺囗(gap)则加入 的DNA一条链作为模板而另一条链可作 为引物。 合心
(5) DNA聚合酶的反应可以利用DNA双 链作为模板和引物,亦可以单链DNA作为 模板和引物 (6)DNA的体外聚合必须加入少量的 DNA才能进行。DNA在提取过程中易形 成切口(nick)或缺口(gap).则加入 的DNA一条链作为模板而另一条链可作 为引物
原核生物中的DNA聚合酶 在大肠杆菌中发现有三种DNA聚合酶( 单体酶多肽链内含一个锌原子(其鳌合剂是 o-二氮杂菲),多功能酶。它具有5′→3'聚合酶功能(对脱氧 核苷酸的选择);3′→5′外切酶活性(对双链无作用,校 对功能。但在正常聚合条件下,此活性不能作用于生长链)及5 3′外切酶活性(双链有效,主要是对DNA损伤的修复,以 及在DNA复制时RNA引物切除及其空隙的填补);在DNA链 的3′形成焦磷酸解〔生理意义不大);无机焦磷酸盐与dNTP 之间的焦磷酸基交换。 (2)DNA聚合酶工:多亚基酶,聚合作用,但聚合活力很低 具有3′→>5′外切酶活性。其它生理功能尚不清楚,可能在 修复紫外光引起的DNA损伤中起作用。 合心
原核生物中的DNA聚合酶 在大肠杆菌中发现有三种DNA聚合酶(用突变株研究其功能): ⑴ DNA聚合酶Ⅰ:单体酶,多肽链内含一个锌原子(其鳌合剂是 O-二氮杂菲),多功能酶。它具有5→ 3 聚合酶功能(对脱氧 核苷酸的选择); 3’ → 5’外切酶活性(对双链无作用,校 对功能。但在正常聚合条件下,此活性不能作用于生长链)及5’ → 3’外切酶活性(双链有效,主要是对DNA损伤的修复,以 及在DNA复制时RNA引物切除及其空隙的填补);在DNA链 的3 形成焦磷酸解(生理意义不大);无机焦磷酸盐与dNTP 之间的焦磷酸基交换。 ⑵ DNA聚合酶Ⅱ:多亚基酶,聚合作用,但聚合活力很低; 具有3’ → 5’外切酶活性。其它生理功能尚不清楚,可能在 修复紫外光引起的DNA损伤中起作用
)DNA合m是原核生物DNA复制的主要 聚合酶,该酶由种亚基组成,其中、E、θ形成 全酶的核心酶。具有5′→3′DNA聚合酶活性 (α亚基,速率高);具有3′→>5′外切酶(ε 亚基)的校对功能,提高DNA复制的保真性;还 具有5′→3′外切酶活性(单链有效,其意义未 知)。 (4)DNA聚合酶Ⅳ和∨:1999年发现,当DNA 严重损伤时,诱导产生。 合心
⑶ DNA聚合酶Ⅲ:是原核生物DNA复制的主要 聚合酶,该酶由10种亚基组成,其中、、形成 全酶的核心酶。具有5’ →3’DNA聚合酶活性 ( 亚基,速率高); 具有3’ → 5’外切酶( 亚基)的校对功能,提高DNA复制的保真性;还 具有5’ → 3’外切酶活性(单链有效,其意义未 知)。 (4) DNA聚合酶IV和V:1999年发现,当DNA 严重损伤时,诱导产生
DNA聚合酶IDNA聚合酶工DNA聚合酶Ⅲ 亚基数目1(单体酶)>1(多亚基酶)>1(多亚基酶) 5→3′聚合活性+中+很低 +很 3→5′外切活性+ (保护DNA复制的 忠实性 fidelity) 53外切活性+
DNA聚合酶Ⅰ DNA聚合酶Ⅱ DNA聚合酶Ⅲ 亚基数目 1(单体酶) >1(多亚基酶 ) >1(多亚基酶) 5’ 3’聚合活性 + 中 + 很低 + 很高 3‘ 5’外切活性 + + + (保护DNA复制的 忠实性fidelity) 5‘ 3’外切活性 + - - 主要是对DNA损伤的 修复;以及在DNA复 制时切除RNA引物并 填补其留下的空隙。 修复紫外光引起 的DNA损伤 DNA 复制的主要 聚合酶,还具有 3’-5‘ 外切酶的 校对功能,提高 DNA复制的保真 性