状弯曲拉直,握紧阴茎龟头防止其旋转,公猪即可安静下来并开始射精:小心地取下保温杯 盖和盖在滤网上的纸巾。 3.2.4精液的分段收集最初射出的少量精液含精子很少,而且含菌量大,所以不能接 取,等公猪射出部分清亮的液体后,可用纸巾将清液和胶状物擦除。开始接取精液,有些公 猪分2~3个阶段将浓份精液射出,直到公猪射精完毕,射精过程历时5~7min;如果可能 应尽可能只收集含精多的精液,清亮的精液尽可能不收集。 3.2.5采精结束公猪射精结束时,会射出一些胶状物,同时环顾左右,采精人员要注 意观察公猪的头部动作。如果公猪阴茎软缩或有下假母猪动作,就应停止采精,使其阴茎缩 回。注意:不要过早中止采精,要让公猪射精过程完整,否则会造成公猪不适。 3.2.6将精液送至实验室除去过滤网及其网上的胶状物,将食品袋口束在一起,放在 保温杯口边缘处,盖上盖子。将公猪赶回猪舍。将精液送实验室。 (三)人工授精实验室设备及操作规范 1.人工授精实验室 1.Ⅰ人工授精实验室的要求人工授精实验室是种公畜站处理精液的地方,必须保证 产品的生物安全性,防止危害精子和污染精液的情况发生 1.2人工授精实验室的基本设施因种畜站或配种站规模及所执行的功能不同,人工 授精实验室的设备条件也不相同: 1.2.1建筑要求实验室应有足够的面积,并要求有利于维持卫生条件。如工作台 面要求是陶瓷的,地面应铺设地板砖,墙面应容易冲洗、不落尘。窗户、门应有很好的防尘 功能。人工授精实验室应设有外间,以便更换工作服、拖鞋等。为了防止建设材料及油漆对 精子的影响,建筑材料应进行放射、有害物质检测。应使用对人无害的油漆或涂料 1.2.2人工授精实验室的设备 释液液配制设备纯水机、蒸馏水机、各种玻璃用品、加热搅拌器、水浴锅等。 精液品质检查用品一台相差显微镜、恒温载物台、比色仪等。 冷冻精液用品液氮罐、液氮机、细管灌装机、细管印字机、低温柜、冷冻槽或冷冻 仪、氟板等。 2.精液品质检查 目的要求:掌握精液品质检査的项目、每个项目的操作方法、各个环节检查的项目及品 质评价要点。 用品清单:保温箱、显微镜、载玻片、盖玻片、移液器、红细胞吸管、3%氯化钠、计数 板、0.5%龙胆紫、低温基础液或0.9%的氯化钠 2.1直观检查 2.1.1射精量:牛的射精量应在2~10ml左右,羊的精射精量应在0.5~2ml,猪的射 精量应在100-40oml。如果过多或过少均为可能存在问题:如假阴道漏水,精液中有尿液 生殖机能下降或副性腺有炎症。 2.1.2色泽:牛羊的精液应为乳白色或乳黄色,猪的精液为灰白色到白色。其它颜色 均为不正常颜色 3云雾状:在33~35℃的水浴中,牛羊精液应有明显的云雾状(云团样翻卷) 说明精子的密度和活力都较好。 2.2活力检查 2.2.1将显微镜的载物台温度调至37~38℃,并使载玻片和盖玻片与载物台等温 2.2.2用微量移液器取5ul精液注入试管中,再取50ul30℃的低温保存基础液或0.9% 的氯化钠溶液注入试管中,吸吐若干次。吸 取10u1滴在预温的载玻片中间,盖上盖玻 片,猪的精液不需要稀释可直接取样检查活 力 2.2.3在100和400倍下判断活力。 活力为十级制,前进运动的精子占总精子数 的比例不低于70%,即活力不低于0.7方可 作进一步处理。 SE 图白细胞吸管(上)红细胞吸管
11 状弯曲拉直，握紧阴茎龟头防止其旋转，公猪即可安静下来并开始射精；小心地取下保温杯 盖和盖在滤网上的纸巾。 3.2.4 精液的分段收集 最初射出的少量精液含精子很少，而且含菌量大，所以不能接 取，等公猪射出部分清亮的液体后，可用纸巾将清液和胶状物擦除。开始接取精液，有些公 猪分 2～3 个阶段将浓份精液射出，直到公猪射精完毕，射精过程历时 5～7min；如果可能 应尽可能只收集含精多的精液，清亮的精液尽可能不收集。 3.2.5 采精结束 公猪射精结束时，会射出一些胶状物，同时环顾左右，采精人员要注 意观察公猪的头部动作。如果公猪阴茎软缩或有下假母猪动作，就应停止采精，使其阴茎缩 回。注意：不要过早中止采精，要让公猪射精过程完整，否则会造成公猪不适。 3.2.6 将精液送至实验室 除去过滤网及其网上的胶状物，将食品袋口束在一起，放在 保温杯口边缘处，盖上盖子。将公猪赶回猪舍。将精液送实验室。 （三）人工授精实验室设备及操作规范 1．人工授精实验室 1．1 人工授精实验室的要求 人工授精实验室是种公畜站处理精液的地方，必须保证 产品的生物安全性，防止危害精子和污染精液的情况发生。 1．2 人工授精实验室的基本设施 因种畜站或配种站规模及所执行的功能不同，人工 授精实验室的设备条件也不相同： 1．2．1 建筑要求 实验室应有足够的面积，并要求有利于维持卫生条件。如工作台 面要求是陶瓷的，地面应铺设地板砖，墙面应容易冲洗、不落尘。窗户、门应有很好的防尘 功能。人工授精实验室应设有外间，以便更换工作服、拖鞋等。为了防止建设材料及油漆对 精子的影响，建筑材料应进行放射、有害物质检测。应使用对人无害的油漆或涂料。 1．2．2 人工授精实验室的设备 释液液配制设备 纯水机、蒸馏水机、各种玻璃用品、加热搅拌器、水浴锅等。 精液品质检查用品 一台相差显微镜、恒温载物台、比色仪等。 冷冻精液用品 液氮罐、液氮机、细管灌装机、细管印字机、低温柜、冷冻槽或冷冻 仪、氟板等。 2．精液品质检查 目的要求：掌握精液品质检查的项目、每个项目的操作方法、各个环节检查的项目及品 质评价要点。 用品清单：保温箱、显微镜、载玻片、盖玻片、移液器、红细胞吸管、3%氯化钠、计数 板、0.5%龙胆紫、低温基础液或 0.9%的氯化钠 2．1 直观检查 2．1．1 射精量：牛的射精量应在 2～10ml 左右，羊的精射精量应在 0.5～2ml，猪的射 精量应在 100-400ml。如果过多或过少均为可能存在问题：如假阴道漏水，精液中有尿液、 生殖机能下降或副性腺有炎症。 2．1．2 色泽：牛羊的精液应为乳白色或乳黄色，猪的精液为灰白色到白色。其它颜色 均为不正常颜色 2．1．3 云雾状：在 33～35℃的水浴中，牛羊精液应有明显的云雾状（云团样翻卷）， 说明精子的密度和活力都较好。 2．2 活力检查： 2．2．1 将显微镜的载物台温度调至 37～38℃，并使载玻片和盖玻片与载物台等温。 2．2．2 用微量移液器取 5ul 精液注入试管中，再取 50ul30℃的低温保存基础液或 0.9% 的氯化钠溶液注入试管中，吸吐若干次。吸 取 10ul 滴在预温的载玻片中间，盖上盖玻 片，猪的精液不需要稀释可直接取样检查活 力。 2．2．3 在 100 和 400 倍下判断活力。 活力为十级制，前进运动的精子占总精子数 的比例不低于 70%，即活力不低于 0.7 方可 作进一步处理。 图 白细胞吸管（上）红细胞吸管
如果时间允许可采用计数板计数法进行活力测定,准确度更高:先将精液用生理盐水稀 释(牛100倍、羊200倍、猪20倍),再放入计数室中,在100倍下计数5个中方格的不活 动精子数,再将计数板放入200度干燥箱中加温2min,杀死全部精子,再计数同样5个中 方格内的总精子数。 图血球计数室(25个中方 图精子密度测定制片方法 格,400个小方格) 精子活力。5个中方格总精子数-5个中方格不活动精子数 5个中方格总精子数 2.3密度测定: 2.3.1稀释和杀死精子:取5u1原精液加入试 管中,用移液管吸取3%氯化钠溶液1000u,混合均 匀。也可将取l0ul原精液于载玻片上,用红细胞吸管 吸至刻度0.5,再吸取3%氯化钠溶液至刻度101,用 食指和拇指压住吸管两端,摇动若干次,弃去数滴。 这两种稀释的方法稀释倍数均为200倍。 2.3.2放置计数板:将干净的计数板放在载物 台上,将干净的盖玻片放在上面。 3.3制作精液计数样片:将稀释好的精液取 少量从盖玻片与计数板的接缝处注入,使精液依靠毛 细作用将精液吸入计数室中。 2.3.4找到计数室和第一个中方格:将计数板 图精子计数方法 固定在显微镜的推进器内,用100倍放大找到计数室,再用400倍找到计数室的第一个中方 格 2.3.5计数精子:计数左上角至右下角五个中方格的总精子数,以精子的头部为准, 依数上不数下,数左右不数右的原则进行计数位于格线上的精子,计数顺序从中方格第一排 小格向右,至第二排向左,第三排向右,第四排向左。 2.3.6计算精子密度:精子密度=5个中方格总精子数×5×10000×稀释倍数 如5个中方格的总精子数是95,则精子密度=95×5×10000×200=9.5亿/ml 2.3.7牛羊精子密度范围:牛的精液精子密度为8~12亿/ml,羊的精子密度为15 30亿/ml 2.4畸形率测定
12 如果时间允许可采用计数板计数法进行活力测定，准确度更高：先将精液用生理盐水稀 释（牛 100 倍、羊 200 倍、猪 20 倍），再放入计数室中，在 100 倍下计数 5 个中方格的不活 动精子数，再将计数板放入 200 度干燥箱中加温 2min，杀死全部精子，再计数同样 5 个中 方格内的总精子数。 个中方格总精子数 个中方格总精子数 个中方格不活动精子数 精子活力 5 5 − 5 = 2．3 密度测定： 2．3．1 稀释和杀死精子：取 5ul 原精液加入试 管中，用移液管吸取 3%氯化钠溶液 1000ul，混合均 匀。也可将取 10ul 原精液于载玻片上，用红细胞吸管 吸至刻度 0.5，再吸取 3%氯化钠溶液至刻度 101，用 食指和拇指压住吸管两端，摇动若干次，弃去数滴。 这两种稀释的方法稀释倍数均为 200 倍。 2．3．2 放置计数板：将干净的计数板放在载物 台上，将干净的盖玻片放在上面。 2．3．3 制作精液计数样片：将稀释好的精液取 少量从盖玻片与计数板的接缝处注入，使精液依靠毛 细作用将精液吸入计数室中。 2．3．4 找到计数室和第一个中方格：将计数板 固定在显微镜的推进器内，用 100 倍放大找到计数室，再用 400 倍找到计数室的第一个中方 格。 2．3．5 计数精子：计数左上角至右下角五个中方格的总精子数，以精子的头部为准， 依数上不数下，数左右不数右的原则进行计数位于格线上的精子，计数顺序从中方格第一排 小格向右，至第二排向左，第三排向右，第四排向左。 2．3．6 计算精子密度：精子密度=5 个中方格总精子数×5×10000×稀释倍数 如 5 个中方格的总精子数是 95，则精子密度=95×5×10000×200=9.5 亿/ml 2．3．7 牛羊精子密度范围：牛的精液精子密度为 8～12 亿/ml，羊的精子密度为 15～ 30 亿/ml。 2．4 畸形率测定 图 血球计数室（25 个中方 格，400 个小方格） 图 精子密度测定制片方法 图 精子计数方法
图精液抹片示意图 图左图为正常精子(左下为原生质小滴),右图为各种 畸形精子 2.4.1染色剂的制作:0.5克龙胆紫用20ml酒精助溶,加水至100m1,过滤至试剂瓶 中备用。也可用纯红或纯兰墨水代替0.5%的龙胆紫溶液。2.4.2牛羊精液的稀释:用微量 移液器取5ul原精液至试管中,并吸取100u1(羊可用200u1)0.9%的氯化钠溶液混合数次。 2.4.3抹片:左手食指和拇指向上捏住载玻片两端,使载玻片处于水平状态,取10u1 稀释后的精液滴至载玻片右侧。右手拿一载玻片或盖玻片,使其与左手拿的载玻片呈向右的 45度角,并使其接触面在精液滴的左侧。将载玻片向右拉至精液刚好进入两载玻片形成的 角缝中,然后平稳地向左推至左边(不得再向回拉)。抹片后,使其自然风干 2.4.4固定:在抹片上滴95%的酒精数滴,固定4min后,甩去多余的酒精 2.4.5染色:将载玻片放在用玻璃棒制成的片架上,滴上0.5%的龙胆紫或纯兰或红墨 水5~10滴,5min后,用洗瓶或自来水轻轻冲去染色剂,甩去水分晾干。 2.4.6载玻片放在400或640倍的显微镜下进行观察,共记录若干个视野200个左右 的精子 下列精子可被视为畸形精子: 头部膨大、头部小于正常大小、双头、头部不完整 尾部折回、尾部卷曲、尾部套索、双尾、断尾 有近端原生质小滴 牛羊的精畸形精子比例不应超过15% 猪的精液品质检査:方法与牛羊基本相同,但由于猪的精液量较大50~500ml,精子密 度较低1.5~5亿/ml。所以在精液品质检查时,密度测定(或计数板活力测定)时稀释的倍 数应为10~20倍,活力检查可直接进行,不必进行稀释,畸形率测定时也可用鲜精直接抹 片。 3.稀释液配制 目的要求:掌握稀释配制的基本程序和操作方法 主要用品:250m三角瓶、25oml烧杯、100ml量筒、感量为0.1克的天平、玻璃漏斗 电炉、石棉网、玻璃棒、定性滤纸、消毒纸巾、硫酸纸、灭菌牛皮纸、橡皮筋、10m一次 性注射器、lml注射器、5ml注射器、鸡蛋、75%酒精棉球、葡萄糖、柠檬酸钠、青霉素、链 霉素 操作:
13 2．4．1 染色剂的制作：0.5 克龙胆紫用 20ml 酒精助溶，加水至 100ml，过滤至试剂瓶 中备用。也可用纯红或纯兰墨水代替 0.5%的龙胆紫溶液。2．4．2 牛羊精液的稀释：用微量 移液器取 5ul 原精液至试管中，并吸取 100ul（羊可用 200ul）0.9%的氯化钠溶液混合数次。 2．4．3 抹片：左手食指和拇指向上捏住载玻片两端，使载玻片处于水平状态，取 10ul 稀释后的精液滴至载玻片右侧。右手拿一载玻片或盖玻片，使其与左手拿的载玻片呈向右的 45 度角，并使其接触面在精液滴的左侧。将载玻片向右拉至精液刚好进入两载玻片形成的 角缝中，然后平稳地向左推至左边（不得再向回拉）。抹片后，使其自然风干。 2．4．4 固定：在抹片上滴 95%的酒精数滴，固定 4min 后，甩去多余的酒精。 2．4．5 染色：将载玻片放在用玻璃棒制成的片架上，滴上 0.5%的龙胆紫或纯兰或红墨 水 5～10 滴，5min 后，用洗瓶或自来水轻轻冲去染色剂，甩去水分晾干。 2．4．6 载玻片放在 400 或 640 倍的显微镜下进行观察，共记录若干个视野 200 个左右 的精子。 下列精子可被视为畸形精子： 头部膨大、头部小于正常大小、双头、头部不完整 尾部折回、尾部卷曲、尾部套索、双尾、断尾 有近端原生质小滴 牛羊的精畸形精子比例不应超过 15%。 猪的精液品质检查：方法与牛羊基本相同，但由于猪的精液量较大 50～500ml，精子密 度较低 1.5～5 亿/ml。所以在精液品质检查时，密度测定（或计数板活力测定）时稀释的倍 数应为 10～20 倍，活力检查可直接进行，不必进行稀释，畸形率测定时也可用鲜精直接抹 片。 3．稀释液配制 目的要求：掌握稀释配制的基本程序和操作方法。 主要用品：250ml 三角瓶、250ml 烧杯、100ml 量筒、感量为 0.1 克的天平、玻璃漏斗、 电炉、石棉网、玻璃棒、定性滤纸、消毒纸巾、硫酸纸、灭菌牛皮纸、橡皮筋、10ml 一次 性注射器、1ml 注射器、5ml 注射器、鸡蛋、75%酒精棉球、葡萄糖、柠檬酸钠、青霉素、链 霉素 操作： 图 左图为正常精子（左下为原生质小滴），右图为各种 畸形精子 图 精液抹片示意图