2001年，采用RNAi技术成功诱导培养的哺乳动物细 胞基因沉默：长度为21-25nt的siRNA瞬时转染体外 培养的哺乳动物细胞(hela细胞以人胚肾293细胞)能 诱导RNAi,但并不启动细胞调亡或者干扰素响应。 论文：Nature,2001,411(6836):494-498 此后，RNA千扰技术迅速兴起并掀起了一股生物 技术热潮，在20002003年间，连续4年被列入世 界十大科技进步之一。2002年，Science还将RNAi 评为十大科技进步之首。麻省理工大学的生物学 家，诺贝尔奖获得者菲利普认为RNA干扰技术将 成为十年来甚至几十年来最重要和激动人心的科 学突破
2001年，采用RNAi技术成功诱导培养的哺乳动物细 胞基因沉默：长度为21-25 nt的siRNA瞬时转染体外 培养的哺乳动物细胞(hela细胞以人胚肾293细胞)能 诱导RNAi，但并不启动细胞凋亡或者干扰素响应。 此后，RNA干扰技术迅速兴起并掀起了一股生物 技术热潮，在2000～2003年间，连续4年被列入世 界十大科技进步之一。 2002年，Science还将RNAi 评为十大科技进步之首。 麻省理工大学的生物学 家，诺贝尔奖获得者菲利普认为RNA干扰技术将 成为十年来甚至几十年来最重要和激动人心的科 学突破
2、smal1 interfering RNA,siRNA的合成过程 ·siRNA:介导沉默现象的小片段RNA称为小干扰RNA。 ·siRNA的两条单链末端为5？-磷酸和3’-羟基，且3端 均有2~3个突出的核苷酸。 19 nt duplex 5 3 3 2 nt 3 overhangs
• siRNA：介导沉默现象的小片段RNA称为小干扰RNA。 • siRNA的两条单链末端为5’－磷酸和3’－羟基，且3’端 均有２~3个突出的核苷酸。 19 nt duplex 2 nt 3’ overhangs 2、small interfering RNA，siRNA的合成过程
Dicer:dsRNA特异性核酸内切酶，RNaseⅢ 家族中的一员，果蝇中称为Dicer。 (a) ATPase/helicase DUF283 D1709.E1813 dsRBD D1320.E1364 PAZ 四个结构域： Argonaute家族的PAZ结构域， II型RNA酶活性区域， ion in Structural Biology dsRNA:结合区域， DEAH/DEXHRNA解旋酶活性区
Dicer：dsRNA特异性核酸内切酶，RNase Ⅲ 家族中的一员,果蝇中称为Dicer。 四个结构域： Argonaute家族的PAZ结构域， III型RNA酶活性区域， dsRNA结合区域， DEAH/DEXHRNA解旋酶活性区
RNA诱导的沉默复合体，RISC siRNA在ATP参与下被RNA解旋酶解旋成单链，并由其中反义 链指导形成RNA诱导的沉默复合体(RNA-induced silencing complex,RISC)。具核酸内切、外切以及解旋酶活性。 may be associated with translating ribosomes may participate in endogenous pathways that silence genes via translational repression Ago
RNA诱导的沉默复合体, RISC siRNA 在ATP参与下被RNA解旋酶解旋成单链，并由其中反义 链指导形成RNA诱导的沉默复合体(RNA-induced silencing complex，RISC)。具核酸内切、外切以及解旋酶活性
Argonaute(Ago)蛋白家族： RISC的核心元件，具有3个结构域： PAZ:与siRNA分子的3'结合 MID:与SiRNA分子的5结合 PIWI: 催化RNA的剪切 Argonaute PAZ MID PIWI 2-8nt互补配对 第9、10nt切判 MID 5 h PAZ 3 把mRNA PIWI 更新的RISC mRNA移出RISC被降解 把mRNA
Argonaute（Ago）蛋白家族: RISC的核心元件，具有3个结构域： PAZ：与siRNA分子的3’结合 MID：与siRNA分子的5’结合 PIWI：催化RNA的剪切