FSC-H 100 密度图 FSC-H 二维等高图和密度图
二维等高图和密度图
Counts 个 FSC-H SSC-H Pseudo 3d plot 3D Plot
Pseudo 3D Plot 3D Plot
流弌细胞术操作流程 样品 培养细胞 标记 新鲜组织 单细胞 检测 是液 荧光抗体 石蜡包埋 脱落细胞 表烈测定细胞分选 统计学 继缜 培养 分析
样品 培养细胞 新鲜组织 石蜡包埋 脱落细胞 单细胞 悬液 标记 荧光抗体 检测 表型测定 细胞分选 流式细胞术操作流程 统计学 分析 继续 培养
1。流式细胞术样品制备的要求 °制备单细胞暠液是流式细胞分析的基础。 标本应新鲜:采用密度梯度高心分高外周血淋巴细胞 在分高和洗涤过程中应迣免高速心而致细胞膜结 构破坏 常用溶血剂处理红细胞。 温度和pH:25-37℃,pH7.0-7.2。 制备实体组织标本的单细胞是液时多采用机橄法,而 少用化学法或酶消化法。培养细胞用酶消化法。 °被检细胞或颗粒大小0.2-80pm 样品中至少20000个细胞,浓度105-106个/毫升
15 1. 流式细胞术样品制备的要求 • 制备单细胞悬液是流式细胞分析的基础。 • 标本应新鲜；采用密度梯度离心分离外周血淋巴细胞 ，在分离和洗涤过程中应避免高速离心而致细胞膜结 构破坏。 • 常用溶血剂处理红细胞。 • 温度和pH：25-37℃，pH 7.0-7.2。 • 制备实体组织标本的单细胞悬液时多采用机械法，而 少用化学法或酶消化法。培养细胞用酶消化法。 • 被检细胞或颗粒大小0.2－80mm • 样品中至少20000个细胞，浓度105-106个/毫升
2.免疫荧光染色 荧光豪偶联抗体 抗体上偶联荧光素(FITC、PE等),通 过抗原抗体反应让目标细胞特异性的 带上荧光。 染色过程即抗原抗体反应过程 荧光染料/荧光化合物 是少少漫 PI、DAPI插入核瞼链中; CFSE和蛋白质失价结合 Annexin v-fito检测凋亡 ·荧光蛋白 如GFP、YFP,不卿要染色,直接检测
• 荧光素偶联抗体 –抗体上偶联荧光素(FITC、PE等)，通 过抗原抗体反应让目标细胞特异性的 带上荧光。 –染色过程即抗原抗体反应过程。 • 荧光染料/荧光化合物 –PI、DAPI等插入核酸链中； –CFSE和蛋白质共价结合； –Annexin V-FITC检测凋亡。 • 荧光蛋白 –如GFP、YFP，不需要染色，直接检测 2.免疫荧光染色