生物科学专业《生物化学实验B》课程实践教学大纲（理） 课程名称：生物化学实验B 英文名称：general biochemistry experiment 课程编号：2603057 是否独立设课： 是 学 分 ： 1.5 学 时 ： 54 开课学期：3 预修课程：无机及分析化学，有机化学。 一、课程简介 生物化学实验课是在学习生物化学理论课的基础上进行的一个实践性环节，本课 程的教学任务是让学生运用已学过的知识验证一些结论、结果和现象，及综合运用已 学过的理论知识设计实验或进行综合性的实验，巩固和加深对生物化学课程中基本理 论知识的理解，训练学生理论知识的运用能力、实验操作技能、实验数据的处理和分 析能力。 二、实验报告要求与实验考核方法 实验报告必须包括：①实验目的和原理；②实验仪器和试剂；③实验步骤和结 果；④结果讨论。 实验考核方式应根据：①实验操作情况；②实验报告内容；③实验考试进行评 分。 评分方法：平时成绩和实验报告占70％，实验考试占30％。 三、实验指导书与主要参考书 陈均辉等合编：《生物化学实验》，科学出版社，第三版 王秀奇等合编：《基础生物化学实验》，高等教育出版社，第二版 萧能庚、余瑞元等合编：《生物化学实验原理和方法》，北京大学 出版社，第二版 四、实验项目一览表 《 生物化学实验B 》课程实验项目一览表 序号 实验名称 每组 人数 实验 时数 实验类型 设计∕验证∕综合 必做∕选做 1 蒽酮比色定糖法 2 3 验证 选做 2 粗脂肪含量的测定 （索氏抽提法） 2 3 验证 选做 3 总氮量的测定——凯 氏定氮法 2 6 验证 选做 4 蛋白质和氨基酸的呈 色、沉淀、变性反应 2 3 验证 选做 5 氨基酸的分离鉴定— 纸层析法 1 3 验证 必做 6 离子交换层析法分离 氨基酸 2 4 验证 必做
7 血清蛋白的醋酸纤维 薄膜电泳 1 3 验证 必做 8 聚丙析酰胺凝胶盘状 电 泳—血清蛋白的分 离 1 6 验证 必做 9 酶的特性 2 3 验证 必做 10 氨基移换反应—血清 中转氨酶活力的测定 2 4 验证 必做 11 蔗糖酶米氏常数的测 定 4 6 验证 必做 12 酵母核糖核酸的分离 鉴定 2 4 验证 必做 13 过氧化物酶的活力测 定 2 3 验证 选做 14 维生素C的定量测定 2 3 验证 选做 15 蛋白质的含量测定 1 3 设计、综合 必做 《生物化学实验B》课程实验项目1 一、实验目的 1．学习蒽酮比色定糖法的原理和方法 2．学习分光光度计的原理和操作方法 二、实验内容 用蒽酮法测定可溶性糖含量 三、实验原理 蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。蒽酮可以和游离的己 糖或多糖中的己糖基，戊醛糖及己糖醛酸起反应，反应后溶液呈蓝绿 色，在620nm处有最大吸收。 蒽酮可与其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。当样品中 存有含较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。对于以上特 定的糖类，反应较稳定。 本法多用于测定糖原含量，亦可用于测定葡萄糖含量。 四、实验方法与步骤 1．制作标准曲线：取干试管6支，按下表操作： 编号 试剂 （ml） 1 2 3 4 5 6 葡 萄 糖 标 准 液 （100ug/ml） 0 0.10 0.20 0.30 0.40 0.50
蒸馏水 1.0 0.90 0.80 0.70 0.60 0.50 蒽酮试剂 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 每管加入葡萄糖标准液和水后立即混匀，在冰浴中加入蒽酮试剂，同时在沸水浴 中加热7分钟，取出迅速冷却至室温。以第一管为参比，迅速测其于各管的吸光度。 以含糖量为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线 2．样品含糖量测定：吸取1m1无蛋白糖类溶液置试管中，浸于冰浴 中冷却，再加入4ml蒽酮试剂，沸水浴中煮沸7分钟，取出后自来水 冷却后比色，其他条件与做标准曲线相同，测得的光密度值由标准曲 线查算出样品液的糖含量。 3．计算： w=(CV/ m)×100% w：糖的质量分数（%） C：为标准曲线查出的糖含量mg／m1。 V：为样品稀释后的体积。（m1） m：为样品的重量。（mg） 五、实验要求 实验内容要求：学生为主，教师辅助，充分预习，独立完成。 及时记录实验中观察到的现象、结果和数据，原始数据必须准确简练、 详尽、清楚。记录时不能夹杂主观因素，在定量实验中观测的数据， 如称量物的重量、滴定管的读数、光密度值等，都应设计一定的表格， 依据仪器的精确度记录有效数字。 实验报告要求： 实验报告应包括下列各项： （1）报告的题目（要简明确切）； （2）写报告人及共同测定人员的姓名； （3）实验目的； （4）实验原理； （5）实验仪器和试剂（包括主要仪器的规格、主要试剂的名称）； （6）实验数据记录（包括原始数据记录表格和整理后的数据记录表格）； （7）实验结果。明确提出本次实验的结论，用公式计算或用文字说明 （8）分析与讨论，要对实验结果作出估计，分析误差大小及原因，对实验中发现 的问题应进行讨论，对实验方法、实验设备有何改进建议也可写入此栏； （9）回答思考题。 考核评价要求：以出勤、随堂提问、预习情况、实验操作情况和实验报告等为主 要考核内容 六、场地、设备与器材
12幢新实验大楼1楼生化实验室 1．试管及试管架 2．吸量管(1ml、5mL) 3．恒温水浴箱(100℃) 4．制冰机 5．分光光度计 6．滴管 《生物化学实验B》课程实验项目2 一、实验目的 1.学习和掌握用索氏提取器提取脂肪的原理和方法 2.学习和掌握用重量分析法对粗脂肪进行定量测定 3.了解脂肪的一般提取方法 二、实验内容 用索氏提取器提取脂肪并对粗脂肪进行定量测定。 三、实验原理 根据相似相溶原理，脂类物质易溶于有机溶剂中。在索氏提取 器中用有机溶剂对样品中的脂类物质进行提取。因提取的是脂类物质 的混合物，包括脂肪、游离脂酸、固醇及色素等脂溶性物质，称其为 粗脂肪。 四、实验方法与步骤 1.称出小瓶重量：将洗净的索氏提取器小烧瓶用铅笔在磨口处编号，103~105 C烘2小时，即可达恒重，干燥器冷却，分析天平称重，并记录。 2.用分析天平称取干燥样品2g，用滤纸包扎好，放入浸提管内。 3.回馏：在已称重的小烧瓶内加1/2~1/3体积的石油醚（30-60℃）。连接索氏提 取器各部分，加热回馏2~4小时。控制温度，每小时回馏3~5小时较宜。 4.提取完毕后，待石油醚完全流回小烧瓶，卸开抽提管，取出滤纸筒，再回馏 一次，以洗净残留在提取器上的脂肪。然后，卸开抽提管，将石油醚蒸发回 收。基本蒸尽时，停止加热，取下小烧瓶，用吹风机将瓶内石油醚在通风柜中 吹尽，再在烘箱中103~105 C烘干（约半小时），取出，干燥器内冷却，称 重，从瓶的前后重量差可计算脂肪的含量。 5.同上述，用不包样品的滤纸做空白实验。 6.计算：含油量%=油脂重量/试样重量×100 五、实验要求 同上 六、场地、设备与器材 12幢新实验大楼1楼生化实验室 1．索氏提取器（50ml） 。
2．分析天平 3．烧杯 4．烘箱 5．干燥器 6．恒温水浴锅 7．镊子 8．脱脂滤纸 9．脱脂棉 《生物化学实验B》课程实验项目3 一、实验目的 1．掌握凯氏定氮法测定蛋白质含量的原理和方法 2．学会使用凯氏定氮仪 二、实验内容 用凯氏定氮法测定蛋白质含量 三、实验原理 常用凯氏定氮法测定天然有机物(如蛋白质，核酸及氨基酸等)的含氮量。 含氮的有机物与浓硫酸共热时，其中的碳、氢二元素被氧化成二氧化碳和水，而 氮则转变成氨，并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。此过程通常称之为“消化”。 但是，这个反应进行得比较缓慢，通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高反应液的 沸点并加入硫酸铜作为催化剂，以促进反应的进行。甘氨酸的消化过程可表示如下： 浓碱可使消化液中的硫酸按分解，游离出氨，借水蒸汽将产生的氨蒸馏到—定 量，一定浓度的硼酸溶液中，硼酸吸收氨后使溶液中氢离子浓度降低，然后用标准无 机酸滴定，直至恢复溶液中原来氢离子浓度为止，最后根据所用标准酸的当量数(相 当于待测物中氨的当量数)计算出待测物中的总氮量。 四、实验方法与步骤 1．凯氏定氮仪的构造和安装 凯氏定氦仪由蒸汽发生器，反应管及冷凝器三部分组成。 蒸气发生器包括电炉及一个1～2升容积的烧瓶(图中1，2)。蒸气发生器借橡皮管 (图中3)与反应管相连。反应管上端有一个玻璃杯(图中4)，样品和碱液可由此加入到 反应室(图中5)中，反应室中心有一长玻璃管，其上端通过反应室外层(图中6)与蒸汽 发生器相连，下端靠近反应室的底部。反应室外层下端有一开口，上有一皮管夹(见 图中7)，由此可放出冷凝水及反应废液。反应产生的氨可通过反应室上端细管及冷凝 器(图中8)通到吸收瓶(图中9)中，反应管及冷轻器之间惜磨口(图中10)连接起来，防止 漏气