(dNTP)3、脱氧核苷三磷酸I是dATP、dCTP、dGTP和dTTP4种脱氧核苷三磷酸的混合物反应体系中各种核苷酸的浓度必须一致浓度过高虽能加快反应速度，但非特异性扩增也随之增加dNTP浓度：20～200umol/L，浓度升高增加非特异性扩增
3、脱氧核苷三磷酸（dNTP） ◼ 是dATP、dCTP、dGTP和dTTP4种脱氧 核苷三磷酸的混合物 ◼ 反应体系中各种核苷酸的浓度必须一致 ◼ 浓度过高虽能加快反应速度，但非特异 性扩增也随之增加 dNTP浓度：20 ~ 200umol/L,浓度升高增加非特异性扩增
4、DNA聚合酶从一种生活在热泉（80℃~90℃）中的水栖噬热菌（Thermusaquaticus,Taq）中提取，有很高的耐热稳定性Taq酶的作用模板指导下，以dNTP为原料，在引物3’-OH末端加上脱氧单核苷酸，形成3’，5’-磷酸二酯键，使DNA链沿5’一3”方向延伸，催化DNA合成。最适酶量：1-2.5U（酶量过多，导致非特异性扩增）
4、DNA聚合酶 ◼ 从一种生活在热泉（80℃~90℃）中的水栖 噬热菌（Thermus aquaticus, Taq）中提取， 有很高的耐热稳定性 ◼ Taq 酶的作用: 模板指导下，以dNTP为原料，在引物3’-OH末端 加上脱氧单核苷酸，形成3’, 5’ -磷酸二酯键，使 DNA链沿5’ →3’方向延伸，催化DNA合成。 最适酶量：1-2.5U （酶量过多，导致非特异性扩增）
TaDNA聚合酶复制的保真性：TaqDNA聚合酶无3’→5’外切酶活性，因而无校正功能，在复制新链的过程中会发生碱基错配。TaqDNA聚合酶在每次循环中产生的移码突变率为1/30000，碱基替换率为1/8000，故扩增的片段越长，错配的机率越高
◼ Taq DNA聚合酶复制的保真性： ◼ Taq DNA聚合酶无3’ → 5’外切酶活性，因 而无校正功能，在复制新链的过程中会发生 碱基错配。 ◼ Taq DNA聚合酶在每次循环中产生的移码突 变率为1/30000，碱基替换率为1/8000，故扩 增的片段越长，错配的机率越高
耐热的DNA多聚酶：PwoDNApolymerase, TthDNApolymerase、PfuDNApolymerase具有较高的热稳定性，较高的保真性，降低碱基错配率2～10倍
◼ 耐热的 DNA多聚酶： ◼ Pwo DNA polymerase、Tth DNA polymerase、 Pfu DNA polymerase具有较高的热稳定性，较高 的保真性，降低碱基错配率2 ~ 10倍
5、镁离子浓度镁离子浓度是一个至为关键的因素，对于反应系统本身、稳定核苷酸和提高Tag酶的活性有直接影响虽然Taq酶的活性只与游离的Mg2+浓度有关但PCR反应体系中dNTP、引物、模板DNA及整合剂的存在均可与Mg2+结合而降低游离Mg2+的浓度从而影响酶的活性。当dNTP浓度为200umol/L时，MgCI2的浓度为1.5mmol/L较宜
5、镁离子浓度 ◼ 镁离子浓度是一个至为关键的因素，对于反应 系统本身、稳定核苷酸和提高Taq 酶的活性有直 接影响 虽然Taq 酶的活性只与游离的Mg2+浓度有关， 但PCR反应体系中dNTP、引物、模板DNA及 鳌合剂的存在均可与Mg2+结合而降低游离 Mg2+的浓度从而影响酶的活性。 当dNTP浓度为200umol/L时，MgCl2的浓度为 1.5mmol/L较宜