主要实验证据·染色质DNA的Tm值比自由DNA高,说明染色质中DNA与蛋白质分子相互作用。·染色质状态下,DNA的复制和转录活性低于自由DNA中的反应。·DNA酶I对染色质DNA的消化慢于纯DNA。·DNaSel或小球菌核酸酶可以切割游离DNA上的任何磷酸二酯键。少数几个位点以外,染色质的DNA是被保护不受消化的
27 主要实验证据 • 染色质DNA的Tm值比自由DNA高,说明染色质中DNA与蛋白 质分子相互作用。 • 染色质状态下,DNA的复制和转录活性低于自由DNA中的反应。 • DNA酶I对染色质DNA的消化慢于纯DNA。 • DNaseI或小球菌核酸酶可以切割游离DNA上的任何磷酸二酯 键。少数几个位点以外,染色质的DNA是被保护不受消化的
主要实验证据应用X射线衍射技术:发现核小体颗粒是直径为11nm、高6.0nm的扁园柱体,具有二分对称性(dyadsymmetry)核心组蛋白的构成是先形成(H3)2、(H4)2四聚体,然后再与两个H2A、H2B异二聚体结合形成八聚体
主要实验证据 ◆应用X射线衍射技术:发现核小体颗粒是直径为11nm、高 6.0nm的扁园柱体,具有二分对称性(dyad symmetry), 核心组蛋白的构成是先形成(H3)2、(H4)2四聚体, 然后再与两个H2A、H2B异二聚体结合形成八聚体
H3H2AH2BEH4座H2B(b)(aA由X-射线晶体行射(2.8A)所揭示的核小体三维结构(引自K.Luger等,1997)a通过DNA超螺旋中心轴所显示的核小体核心颗粒8个组蛋白分子的位置b.垂直于中心轴的角度所见到的核小体核心颗粒的盘状结构;C.半个核小体核心颗粒的示意模型,一圈DNA超螺旋(73bp)和4种核心组蛋白分子,每种组蛋白由3个α螺旋和一个伸展的N-端尾部组成N-端尾部有序排列,参与核小体之间的相互作用,以形成螺线管等高级结构
由X-射线晶体衍射(2.8A)所揭示的核小体三维结构(引自K.Luger等,1997) a.通过DNA超螺旋中心轴所显示的核小体核心颗粒8个组蛋白分子的位置; b.垂直于中心轴的角度所见到的核小体核心颗粒的盘状结构; c.半个核小体核心颗粒的示意模型,一圈DNA超螺旋(73bp)和4种核心组蛋白分子,每种组蛋 白由3 个α螺旋和一个伸展的N-端尾部组成。 N-端尾部有序排列,参与核小体之间的相互作用,以形成螺线管等高级结构
主要实验证据·用非特异性微球菌核酸酶消化染色质,部分酶解片段分析结果电泳得到一系列片段,是Chromat200bp的倍数。DaPartially dognadedcheomatin电镜中10nm的颗粒长度为protenFigure 16-19Evidenceforthe ExistenceofNucleosomes200bp。DceatinthathodbenpaislydegadedbyeamentwithmicracoAnayatuceaswasfractionatadbydenltygradntentrifugationtoenpelficttophonDNAfragmentsgraphTheindividualpeikswureenanalyedbothtelectronmcoscopybttomandbygelelectrophoresisattrenovalctcreomatinFigure 16-18 Evideace That Proteins Are Clustered at Z00 Base-einsiphakhtunstsfingegroenparPair Intervals Along the DNA Molecule in Chromatin Fibers,InssciatedwithbasepafAemddleekconsiserimtiDNAtiagmeetsgoneratedbyncsedigesonheseopeclusfitsiwth00irat liver chtomatinwere analgtedby.gel electrcphoresis,The discoveneakonthlettoatsofclutesoicloassccawthot tteDNAfragmentsaremultiplesof 200basepaitssuggeststhatECObusepuesofDNAThiindicatosthatthebasicneatunititintones are cdustared ar 200base-pair intervas along theDNA,theretychrometin is a protein particle associated with 200 base pairs of.DNAconferringregulapattemofprotectionageintnucleasedigestion
30 主要实验证据 ◆用非特异性微球菌核酸酶消化染 色质,部分酶解片段分析结果 电 泳 得 到 一 系 列 片 段 , 是 200bp的倍数。 电 镜 中 1 0 n m 的 颗 粒 长 度 为 200bp
?SV40微小染色体(minichromosome)分析与电镜观察·对核酸酶敏感性的增加与核小体去除有关。Figure 21-18The Circular DNA Molecule of an SV40 Virus inInfectedHostCellInthishigh-powerelectro1ofanSv4DNA molecule, the bracket shows a small region.on.the tighit side of.thcortespondsto.thelocatialDNaseIhypersensitive sites (TEM)
31 ◆SV40微小染色体(minichromosome)分析与电镜观察 • 对核酸酶敏感性的增加与核小体去除有关