2、外源基因的转移 通过不同方法,将目的基因转移 至受体细胞
11 2、外源基因的转移 ⚫ 通过不同方法，将目的基因转移 至受体细胞
(1)化学法 磷酸钙沉淀法 目的基因与磷酸钙等物质混合,形成沉淀的DNA 微细颗粒,易通过细胞膜进入细胞内,并整合到受 体细胞基因组中,在适当条件下得以表达。方法简 单,但转化效率低。 ca2(Po4)2+DNA→混合微细颗粒 (Ga离子浓度125mmol,DNA离子浓度 5~0ug/m|。PH7.0) 沉淀反应20-30mn 细胞在沉淀物中暴露5-24h
12 （1）化学法 磷酸钙沉淀法： 目的基因与磷酸钙等物质混合，形成沉淀的DNA 微细颗粒，易通过细胞膜进入细胞内，并整合到受 体细胞基因组中，在适当条件下得以表达。方法简 单，但转化效率低。 Ca2(PO4)2+DNA → 混合微细颗粒 （ Ca离子浓度 125 mmol， DNA 离子浓度 5～0ug/ml。 PH 7.0） ↓ 沉淀反应20~30min ↓ 细胞在沉淀物中暴露 5~24h
(2)物理方法 1、电穿孔法( electroporation) 将细胞至于高压脉冲电场中,通过电压 使细胞产生可逆性的穿孔。周围基质中 的DNA可渗进细胞,进而表达 瞬间 细胞 细胞膜核摸通透性增加 高压脉冲 DNA渗入细胞
13 (2)物理方法 1、电穿孔法（electroporotion） 将细胞至于高压脉冲电场中，通过电压 使细胞产生可逆性的穿孔。周围基质中 的DNA可渗进细胞，进而表达。 瞬间 细胞 细胞膜核摸通透性增加 高压脉冲 DNA渗入细胞
2、显微注射法( microinjection) 利用显微操作把目的基因直接注入靶细胞或 细胞核中 Transgenic Mice Fomal Malo Microinjection Pipette pronucleus pronucleus Holding DNA Solution Pipette Transgene Integration
14 2、显微注射法（microinjection ） 利用显微操作把目的基因直接注入靶细胞或 细胞核中
例:转基因动物的制备 重组基因DNA 微注射(体外 小鼠受精卵 回植 假妊娠 仔鼠 动物模型:转基因鼠 (每个鼠细胞中都含有外源基因,按孟德尔方式遗传)
15 例：转基因动物的制备 重组基因 DNA 微注射 （体外） 小鼠受精卵 回植 假妊娠 仔 鼠 动物模型：转基因鼠 (每个鼠细胞中都含有外源基因，按孟德尔方式遗传)