1实验目的（1）学习衍生荧光法（2）学习环糊精增敏荧光法的原理
1 实验目的 ◼ （1）学习衍生荧光法。 ◼ （2）学习环糊精增敏荧光法的原理
2实验原理亚硝酸盐是食品、环保、纺织及电镀等工业中重要的分析项目之一。亚硝酸盐可能与蛋白质分解产物一仲胺类物资结合，生成致癌物质亚硝胺，食品中亚硝酸盐含量必须控制在一个很低的水平。亚硝酸盐本省无荧光，不能用荧光法直接测定。衍生荧光法借助一定的化学反应可以测定那些本身不发荧光的物质，亦可通过衍生反应，改变被测组分的化学组成和结构，借助于发光特性（波长、强度等）的改变，提高测量的选择性和灵敏度
2 实验原理 ◼ 亚硝酸盐是食品、环保、纺织及电镀等工业中 重要的分析项目之一。亚硝酸盐可能与蛋白质 分解产物－仲胺类物资结合，生成致癌物质亚 硝胺，食品中亚硝酸盐含量必须控制在一个很 低的水平。亚硝酸盐本省无荧光，不能用荧光 法直接测定。衍生荧光法借助一定的化学反应， 可以测定那些本身不发荧光的物质，亦可通过 衍生反应，改变被测组分的化学组成和结构， 借助于发光特性（波长、强度等）的改变，提 高测量的选择性和灵敏度
酸性介质中，亚硝酸根能与过量4-羟基香豆素迅速反应形成低荧光性的亚硝基衍生物一3-亚硝基4-羟基香豆素，该产物经Na,S,O3还原为3-氨基4-羟基香豆素后，在碱性介质中能发射较强的荧光，若有适量β-环糊精（β-CD）存在，由于β-CD对发光体的包络作用，荧光强度大大增强，可显著提高测量的灵敏度。体系的入/入=332urn／457urn，亚硝酸盐（以NaNO,计）在1～1200ng／25mL浓度范围内与荧光强度呈良好线性关系，检出限40pg／mL。本法灵敏度高，选择性好，可用于水样、肉制品中痕量亚硝酸盐的测定
◼ 酸性介质中，亚硝酸根能与过量4-羟基香豆素迅速反 应形成低荧光性的亚硝基衍生物一3-亚硝基4-羟基香 豆素，该产物经 Na2S2O3还原为 3-氨基4-羟基香豆素 后，在碱性介质中能发射较强的荧光，若有适量β-环 糊精(β-CD）存在，由于β-CD对发光体的包络作用， 荧光强度大大增强，可显著提高测量的灵敏度。体系 的λ/ λ=332urn／457urn，亚硝酸盐（以 NaNO2计） 在 1～1200ng／25mL浓度范围内与荧光强度呈良好 线性关系，检出限40pg／mL。本法灵敏度高，选择性 好，可用于水样、肉制品中痕量亚硝酸盐的测定
3仪器与试剂仪器：日立M850荧光分光光度计（或PELS-50B型发光光度计）：基本操作参见附录参数设置如下：带通（Bandpas）：EX=EM=3.Onm增益（PM gain）：Normal;25mL定量试管（容量瓶）1分度吸量管
3 仪器与试剂 ◼ 仪器：日立 M850荧光分光光度计（或 PE LS-50B型发光光度计）：基本操作参 见附录 ◼ 参数设置如下： ◼ 带通（Bandpas）：EX＝EM＝3．0nm ◼ 增益（PM gain）：Normal； ◼ 2 5mL定量试管（容量瓶） ◼ 分度吸量管
试剂4-羟基香豆素溶液：用1：1（体积比）的乙晴-2mol/盐酸混合液配制成0.04%溶液；NaNO,标准溶液：NaNO，（A：R级）于110O红外灯下干燥4h后，用水配制1mg/mL标准溶液，在冰箱中保存（每周新配一次），用时用水准确稀释到1ug/mL；β-CD溶液：用市售品经水重结晶的β-CD配制成0.01mol/L水溶液；Na2S2O3（A·R级）8%水溶液；1.5mol/LNaOH水溶液；pH9.6NH4CI-NH3·H,O缓冲溶液；KAI（SO4）2饱和水溶液
试剂 ◼ 4-羟基香豆素溶液：用1：1（体积比）的乙腈-2mol/L 盐酸混合液配制成0.04％溶液； ◼ NaNO2标准溶液：NaNO2（A·R级）于110○红外 灯下干燥4h后，用水配制1mg/mL标准溶液，在冰箱中 保存（每周新配一次），用时用水准确稀释到1μg/mL； ◼ β-CD溶液：用市售品经水重结晶的β-CD配制成 0.01 mol/L水溶液； ◼ Na2S2O3（A·R级）8％水溶液； ◼ 1.5mol/LNaOH水溶液； ◼ pH 9.6NH4Cl-NH3·H2O缓冲溶液； ◼ KAl（SO4）2饱和水溶液