图1-7层析柱装柱图（二）加样样品上柱可采取二种方式，如样品能溶于流动相，可用少量流动相溶解，从柱顶加入：如样品难溶于流动相，则可溶于适当的溶剂，拌于干燥硅胶上，待溶剂挥发尽后，再上柱。最后，在柱顶覆盖一薄层层析用硅胶或棉花，然后用流动相洗脱。（三）洗脱层析过程中溶剂的选择，对组分分离关系极大，一般没有可循的规律。通常是根据物质的极性采用相应的极性溶剂来洗脱。溶剂的洗脱能力随介电常数增大而增大，在实际吸附层析中是采用逐步递增极性的梯度洗脱方式。通常，借助硅胶薄层层析的结果来摸索分离条件，基本上可以套用于柱层析。两者所不同的在于样品与硅胶的用量比例，故通常柱层析所用的溶剂比薄层层析展开剂极性略偏小。再者可参阅前人分离同类型物质时所用的溶剂系统条件。二、氧化铝层析氧化铝层析是常用的层析方法，适用于亲脂性成分分离。广泛应用于生物碱、留体化合物、强心苷、挥发油、内酯化合物等中药成分的分离。它具有价廉、分离效果好、再生容易、活性容易控制而能适应不同化合物层析要求等优点。但是氧化铝层析还有许多缺点，有部分酚性化合物（如黄酮类化合物）、部分酸性物质（如三帖酸）能与氧化铝结合而不能应用。影响氧化铝层析的因素很多，实际操作时主要是选择具有适当活性和适当酸碱度的氧化铝，以及能充分发挥其分离效能的溶剂。（一）氧化铝层析柱的选择层析柱的装置，其内径与柱长的比例在1：10一1:20之间。有时由于特殊需要，例如两个或两个以上性质相近的成分的分离，为了提高分离效果，可适当采用细长的层析柱。（二）层析柱的制备一般先量取一定体积的溶剂（V。），将层析柱的活塞稍打开，使溶剂滴入接收器中，同时将氧化铝慢慢地加入使它一面沉降，一面添加，直到加完为止。氧化铝加入速度不宜太快，否则将带入气泡而“破坏”层析柱。必要时可在层析管外轻轻给以振动，使氧化铝均匀下降，并有助于氧化铝带入的气泡外溢。当采用活性较高的氧化铝进行层析时，更应注意。待氧化铝加完后，仍使溶剂流动一定时间，然后将氧化铝柱上面的溶剂全部滴入接收器，正确量取接收器内溶剂量（V,）。V。一V,之差，称为柱体积。这样，在层析过程中，我们就能主动掌握大致在什么时候开始收集流份。当变换溶剂的时候，就新换溶剂大致从何流份开始。氧化铝的用量一般采用样品量的20～50倍，根据被分离化合物的性质而定。有时遇到碳氢化合物如菇烯、倍半菇烯等，氧化铝对-14 -
- 14 - 图1-7 层析柱装柱图 （二）加样 样品上柱可采取二种方式，如样品能溶于流动相，可用少量流动相溶解，从柱顶加入；如样 品难溶于流动相，则可溶于适当的溶剂，拌于干燥硅胶上，待溶剂挥发尽后，再上柱。最后，在 柱顶覆盖一薄层层析用硅胶或棉花，然后用流动相洗脱。 （三）洗脱 层析过程中溶剂的选择，对组分分离关系极大，一般没有可循的规律。通常是根据物质的极 性采用相应的极性溶剂来洗脱。溶剂的洗脱能力随介电常数增大而增大，在实际吸附层析中是采 用逐步递增极性的梯度洗脱方式。通常，借助硅胶薄层层析的结果来摸索分离条件，基本上可以 套用于柱层析。两者所不同的在于样品与硅胶的用量比例，故通常柱层析所用的溶剂比薄层层析 展开剂极性略偏小。再者可参阅前人分离同类型物质时所用的溶剂系统条件。 二、氧化铝层析 氧化铝层析是常用的层析方法，适用于亲脂性成分分离。广泛应用于生物碱、甾体化合物、 强心苷、挥发油、内酯化合物等中药成分的分离。它具有价廉、分离效果好、再生容易、活性容 易控制而能适应不同化合物层析要求等优点。但是氧化铝层析还有许多缺点，有部分酚性化合物 （如黄酮类化合物）、部分酸性物质（如三萜酸）能与氧化铝结合而不能应用。影响氧化铝层析 的因素很多，实际操作时主要是选择具有适当活性和适当酸碱度的氧化铝，以及能充分发挥其分 离效能的溶剂。 （一）氧化铝层析柱的选择 层析柱的装置，其内径与柱长的比例在1:10—1:20之间。有时由于特殊需要，例如两个或两 个以上性质相近的成分的分离，为了提高分离效果，可适当采用细长的层析柱。 （二）层析柱的制备 一般先量取一定体积的溶剂（V0），将层析柱的活塞稍打开，使溶剂滴入接收器中，同时将 氧化铝慢慢地加入使它一面沉降，一面添加，直到加完为止。氧化铝加入速度不宜太快，否则将 带入气泡而“破坏”层析柱。必要时可在层析管外轻轻给以振动，使氧化铝均匀下降，并有助于 氧化铝带入的气泡外溢。当采用活性较高的氧化铝进行层析时，更应注意。待氧化铝加完后，仍 使溶剂流动一定时间，然后将氧化铝柱上面的溶剂全部滴入接收器，正确量取接收器内溶剂量 （V1）。V0—V1之差，称为柱体积。这样，在层析过程中，我们就能主动掌握大致在什么时候开始 收集流份。当变换溶剂的时候，就新换溶剂大致从何流份开始。氧化铝的用量一般采用样品量的 20～50倍，根据被分离化合物的性质而定。有时遇到碳氢化合物如萜烯、倍半萜烯等，氧化铝对
这些化合物的吸附力较弱，层析时氧化铝用量略增，为样品量的100～200倍，而且为了尽量减少碳氢化合物在层析柱中扩散，层析过程中不能有间歇。（三）加样一般将样品溶于有机溶剂中，轻轻注入已准备好的氧化铝柱上面，勿使氧化铝柱面受到扰动，否则将影响层析效果。如果样品不易溶于开始层析时使用的有机溶剂，那么，先将样品溶于能溶的有机溶剂，以少量的氧化铝拌匀，然后将有机溶剂挥干，再按氧化铝一般装柱法，将带有样品的氧化铝加入层析柱中。（四）洗脱洗脱过程与氧化铝活性、被吸附物质的性质、温度及溶剂的性质及浓度有关。就溶剂而言，极性溶剂的洗脱能力较非极性溶剂大，所以逐步增加溶剂的极性，可使吸附在氧化铝柱上的不同化合物逐个洗脱，达到分离的目的。三、聚酰胺层析聚酰胺是由酰胺聚合而成的一类高分子物质，商品名为锦纶、尼龙。自1955年发现聚酰胺层析分离酚性物质以来，目前已发展成为分离极性和非极性物质的用途广泛的层析方法，如黄酮类、酚类、醒类、有机酸、生物碱、类、留体、苷类、糖类、氨基酸衍生物、核苷类等。尤其是对黄酮类、酚类、醒类等物质的分离，远比其他方法优越。其特点是：对黄酮类等物质的层析是可逆的，分离效果高，可使性质极相近的类似物得到分离；其柱层析的样品容量大，适于制备分离。聚酰胺薄膜层析则是一种用途广、快速、简便的分析、分离方法。因此，聚酰胺层析应用后，不仅为黄酮等酚性物质的分离提供了有效方法，而且也为分离其他物质增加了一种手段。（一）聚酰胺粉的处理锦纶中通常有两种杂质：一种是锦纶的聚合原料单体及其小分子聚合物。另一种是蜡质（锦纶丝在制成后，表面曾涂过一层蜡）。这些杂质必须除去，否则原料单体及其小分子聚合物可与酚类物质形成复合物。蜡质能被醇液洗脱下来，与分离物质混在一起则难以除去。除去单体及小分子聚合物的方法，具体如下：聚酰胺粉以90～95%乙醇浸泡，不断搅拌，除去气泡后装入层析柱中。用3～4倍体积的90～95%乙醇洗涤，洗至洗液透明并在蒸干后无残渣（或极少残渣）。再依次用2～2.5倍体积的5%氢氧化钠水溶液、1倍体积的蒸馏水、2～2.5倍体积的10%醋酸水溶液洗涤，最后用蒸馏水洗至中性，备用。（二）层析柱的制备若用含水溶剂系统层析，常以水装柱。在以非极性溶剂系统层析时，常以溶剂组份中极性低的组份装柱。若以氯仿装柱，因其比重较大，使聚酰胺粉浮在上面，加样时应将柱底端的氯仿层放出，并立即加样，加样后顶端以棉花塞紧，在层析关闭时，应将顶端的多余氯仿液放出，否- 15 -
- 15 - 这些化合物的吸附力较弱，层析时氧化铝用量略增，为样品量的100～200倍，而且为了尽量减少 碳氢化合物在层析柱中扩散，层析过程中不能有间歇。 （三）加样 一般将样品溶于有机溶剂中，轻轻注入已准备好的氧化铝柱上面，勿使氧化铝柱面受到扰 动，否则将影响层析效果。如果样品不易溶于开始层析时使用的有机溶剂，那么，先将样品溶于 能溶的有机溶剂，以少量的氧化铝拌匀，然后将有机溶剂挥干，再按氧化铝一般装柱法，将带有 样品的氧化铝加入层析柱中。 （四）洗脱 洗脱过程与氧化铝活性、被吸附物质的性质、温度及溶剂的性质及浓度有关。就溶剂而言， 极性溶剂的洗脱能力较非极性溶剂大，所以逐步增加溶剂的极性，可使吸附在氧化铝柱上的不同 化合物逐个洗脱，达到分离的目的。 三、聚酰胺层析 聚酰胺是由酰胺聚合而成的一类高分子物质，商品名为锦纶、尼龙。自1955年发现聚酰胺层 析分离酚性物质以来，目前已发展成为分离极性和非极性物质的用途广泛的层析方法，如黄酮 类、酚类、醌类、有机酸、生物碱、萜类、甾体、苷类、糖类、氨基酸衍生物、核苷类等。尤其 是对黄酮类、酚类、醌类等物质的分离，远比其他方法优越。其特点是：对黄酮类等物质的层析 是可逆的，分离效果高，可使性质极相近的类似物得到分离；其柱层析的样品容量大，适于制备 分离。聚酰胺薄膜层析则是一种用途广、快速、简便的分析、分离方法。因此，聚酰胺层析应用 后，不仅为黄酮等酚性物质的分离提供了有效方法，而且也为分离其他物质增加了一种手段。 （一）聚酰胺粉的处理 锦纶中通常有两种杂质：一种是锦纶的聚合原料单体及其小分子聚合物。另一种是蜡质（锦 纶丝在制成后，表面曾涂过一层蜡）。这些杂质必须除去，否则原料单体及其小分子聚合物可与 酚类物质形成复合物。蜡质能被醇液洗脱下来，与分离物质混在一起则难以除去。除去单体及小 分子聚合物的方法，具体如下：聚酰胺粉以90～95％乙醇浸泡，不断搅拌，除去气泡后装入层析 柱中。用3～4 倍体积的90～95％乙醇洗涤，洗至洗液透明并在蒸干后无残渣（或极少残渣）。 再依次用2～2.5倍体积的5％氢氧化钠水溶液、1 倍体积的蒸馏水、2～2.5 倍体积的10％醋酸水 溶液洗涤，最后用蒸馏水洗至中性，备用。 （二）层析柱的制备 若用含水溶剂系统层析，常以水装柱。在以非极性溶剂系统层析时，常以溶剂组份中极性低 的组份装柱。若以氯仿装柱，因其比重较大，使聚酰胺粉浮在上面，加样时应将柱底端的氯仿层 放出，并立即加样，加样后顶端以棉花塞紧，在层析关闭时，应将顶端的多余氯仿液放出，否
则，聚酰胺会浮起而搅乱层析带。（三）加样聚酰胺的样品容量较大，一般每100mL聚酰胺粉可上样1.5～2.5g，可根据具体情况适当增加或减少。若利用聚酰胺除去质，样品上柱量可大大增加，通常观察质在柱上形成的橙红色色带的移动，当样品加至该色带移至柱的近底端时，停止加样。样品常用洗脱剂溶解，浓度在20～30%。不溶样品可用甲醇、乙醇、丙酮、乙醚等易挥发溶剂溶解，拌入聚酰胺干粉中，拌匀后将溶剂减压蒸去，以洗脱剂浸泡装入柱中。（四）洗脱聚酰胺层析的洗脱剂常采用不同浓度的乙醇液（10%、30%、50%、70%、95%），三氯甲烷一甲醇（19:1，10:1，5：1，2：1，1:1）依次洗脱。若仍有物质未洗脱下来，可采用3.5%氨水洗脱。洗脱剂的更换，一般根据流出液的颜色，当颜色变为很淡时更换下一种溶剂，并以适当体积分瓶收集，分瓶浓缩。各瓶浓缩液以聚酰胺薄膜层析检查其成分，成分相同者合并。再进入下一步纯化（如以适当溶剂结晶等）。四、活性炭层析活性炭柱层析对于分离水溶性物质（如氨基酸、糖类及某些苷类）是一种较好的方法，它是分离水溶性物质的主要方法之一。其特点是样品上柱量大，分离效果好，活性炭来源较易，价格便宜，适用于大量制备分离。但是，由于活性炭的生产原料不同，制备方法及规格不一，其吸附力不象氧化铝、硅胶那样易于控制。到目前为止，尚无测定其吸附力级别的理想方法，因而限制了其广泛应用。（一）活性炭的来源、规格及性能活性炭的来源一般分为动物炭、植物炭和矿物（煤）炭三种，分别采用动物的骨头、未屑、煤屑高温炭化而成。自前市售的医药用活性炭及层析用活性炭多以木屑做原料，加氯化锌在700～800℃高温炭化、活化，经适当处理除去杂质而制成。由于植物体内含有各种金属离子及生产过程中加入氯化锌，虽在出厂前经过适当处理，但也难免含有微量重金属离子，用时应注意。用于层析的活性炭，基本上可以分三类：1.粉末状活性炭：一般为医药用或化学纯活性炭。该类活性炭颗粒极细，呈粉末状，其总表面积特别大，吸附力及吸附量也特别大，是活性炭中吸附力最强的一类。但是，由于其颗粒太细，在层析过程中流速极慢，需要加压或减压操作，手续较繁。2.颗粒状活性炭：其颗粒较前者为大，其总表面积也相应减小，吸附力及吸附量也较次于前者。但是，在层析过程中流速易于控制，勿需加压或减压操作，克服了粉末状活性炭的缺点。3.锦纶活性炭：这种活性炭是以锦纶为粘合剂，将粉末状活性炭制成颗粒。其总表面积较-16-
- 16 - 则，聚酰胺会浮起而搅乱层析带 。 （三）加样 聚酰胺的样品容量较大，一般每100mL聚酰胺粉可上样1.5～2.5g，可根据具体情况适当增加 或减少。若利用聚酰胺除去鞣质，样品上柱量可大大增加，通常观察鞣质在柱上形成的橙红色色 带的移动，当样品加至该色带移至柱的近底端时，停止加样。样品常用洗脱剂溶解，浓度在20～ 30％。不溶样品可用甲醇、乙醇、丙酮、乙醚等易挥发溶剂溶解，拌入聚酰胺干粉中，拌匀后将 溶剂减压蒸去，以洗脱剂浸泡装入柱中。 （四）洗脱 聚酰胺层析的洗脱剂常采用不同浓度的乙醇液（10％、30％、50％、70％、95％），三氯甲 烷－甲醇（19:1，10:1，5:1，2:1，1:1）依次洗脱。若仍有物质未洗脱下来，可采用3.5％氨水 洗脱。洗脱剂的更换，一般根据流出液的颜色，当颜色变为很淡时更换下一种溶剂，并以适当体 积分瓶收集，分瓶浓缩。各瓶浓缩液以聚酰胺薄膜层析检查其成分，成分相同者合并。再进入下 一步纯化（如以适当溶剂结晶等）。 四、活性炭层析 活性炭柱层析对于分离水溶性物质（如氨基酸、糖类及某些苷类）是一种较好的方法，它是 分离水溶性物质的主要方法之一。其特点是样品上柱量大，分离效果好，活性炭来源较易，价格 便宜，适用于大量制备分离。但是，由于活性炭的生产原料不同，制备方法及规格不一，其吸附 力不象氧化铝、硅胶那样易于控制。到目前为止，尚无测定其吸附力级别的理想方法，因而限制 了其广泛应用。 （一）活性炭的来源、规格及性能 活性炭的来源一般分为动物炭、植物炭和矿物（煤）炭三种，分别采用动物的骨头、木屑、 煤屑高温炭化而成。目前市售的医药用活性炭及层析用活性炭多以木屑做原料，加氯化锌在 700～800℃高温炭化、活化，经适当处理除去杂质而制成。由于植物体内含有各种金属离子及生 产过程中加入氯化锌，虽在出厂前经过适当处理，但也难免含有微量重金属离子，用时应注意。 用于层析的活性炭，基本上可以分三类： 1．粉末状活性炭：一般为医药用或化学纯活性炭。该类活性炭颗粒极细，呈粉末状，其总 表面积特别大，吸附力及吸附量也特别大，是活性炭中吸附力最强的一类。但是，由于其颗粒太 细，在层析过程中流速极慢，需要加压或减压操作，手续较繁。 2．颗粒状活性炭：其颗粒较前者为大，其总表面积也相应减小，吸附力及吸附量也较次于 前者。但是，在层析过程中流速易于控制，勿需加压或减压操作，克服了粉末状活性炭的缺点。 3．锦纶活性炭：这种活性炭是以锦纶为粘合剂，将粉末状活性炭制成颗粒。其总表面积较
颗粒状活性炭为大，较粉末状活性炭为小，其吸附力较二者皆弱。因为锦纶不仅单纯起一种粘合作用，它也是一种活性炭的脱活性剂，因此可用于分离前两种活性炭吸附太强而不易洗脱的化合物。用其分离酸性氨基酸及碱性氨基酸，可取得很好效果。流速易控制，操作简便，（二）活性炭对物质的吸附规律及应用活性炭在水溶液中的吸附力最强，在有机溶剂中吸附力较弱，故用有机溶剂脱吸附。在一定条件下，对不同物质的吸附力也不一样，一般来讲：1：对极性基团（如-COOH，-NH2，-OH等）多的化合物的吸附力大于极性基团少的化合物，例如，活性炭对酸性氨基酸和碱性氨基酸的吸附力大于中性氨基酸。原因就是酸性氨基酸中的羧基比中性氨基酸多，碱性氨基酸中的氨基（或其他碱性基团）比中性氨基酸多。因而，可借此性质将酸性氨基酸或碱性氨基酸与中性氨基酸分开。2.对芳香族化合物的吸附力大于脂肪族化合物，因而可借此性质将芳香族氨基酸与脂肪族氨基酸（两者的氨基和羧基数目相同）分开。也可将某些水溶性芳香族物质与脂肪族物质分开。3.对分子量大的化合物的吸附力大于分子量小的化合物。例如，活性炭对肽的吸附力大于氨基酸，对多糖的吸附力大于单糖。因此可利用活性炭分离氨基酸与肽，单糖与多糖。氨基酸、单糖先洗脱下来；肽、多糖后洗脱下来。（三）活性炭的处理活性炭是一种强吸附剂，对气体的吸附力及吸附量都很大。气体分子占据了活性炭的吸附表面，因而造成所谓活性炭“中毒”，使其活力降低。同时，又有一些气体可引起某些副反应，如氧气可引起层析物质的氧化。为了防止该副反应的发生，最简单方便的方法就是加热烘干，可将吸附的绝大多数气体除去。一般在使用前，将活性炭在150℃加热干燥4～5小时即可。锦纶活性炭因锦纶受热温度高要变形，在100℃干燥4～5小时即可。另外，活性炭在生产过程中曾加入氯化锌活化，生产原料木屑内也含有各种金属离子，它们对层析带来很多麻烦。特别是重金属离子，其本身具有很高的毒性，而且吸附在活性炭表面上，具有强的催化作用，致使层析物质产生某些催化反应，因此必须将其除去。医药用、化学纯活性炭在出厂前对所含杂质及重金属均经检查，符合规定要求。锦纶活性炭在制备过程中也经过大量酸洗、水洗，勿需特别处理即可应用。但是，工业用活性炭在用前必须进行严格处理，一般可用下述方法处理：将工业用活性炭置于烧瓶中，加入2～3MOL盐酸，水浴加热半小时，在加热过程中，间歇地振摇。然后减压滤干，如此以酸处理2至3次，再以热蒸馏水洗涤至pH5～6，滤干，烘箱中150℃干燥8小时，置于瓶中，密塞备用。（四）柱层析的操作1.装柱：因活性炭在水中吸附力最强，一般在水中装柱。活性炭以蒸馏水浸泡1小时左右，-17-
- 17 - 颗粒状活性炭为大，较粉末状活性炭为小，其吸附力较二者皆弱。因为锦纶不仅单纯起一种粘合 作用，它也是一种活性炭的脱活性剂，因此可用于分离前两种活性炭吸附太强而不易洗脱的化合 物。用其分离酸性氨基酸及碱性氨基酸，可取得很好效果。流速易控制，操作简便。 （二）活性炭对物质的吸附规律及应用 活性炭在水溶液中的吸附力最强，在有机溶剂中吸附力较弱，故用有机溶剂脱吸附。在一定 条件下，对不同物质的吸附力也不一样，一般来讲： 1．对极性基团（如-COOH，-NH2，-OH等）多的化合物的吸附力大于极性基团少的化合物。 例如，活性炭对酸性氨基酸和碱性氨基酸的吸附力大于中性氨基酸。原因就是酸性氨基酸中的羧 基比中性氨基酸多，碱性氨基酸中的氨基（或其他碱性基团）比中性氨基酸多。因而，可借此性 质将酸性氨基酸或碱性氨基酸与中性氨基酸分开。 2．对芳香族化合物的吸附力大于脂肪族化合物，因而可借此性质将芳香族氨基酸与脂肪族 氨基酸（两者的氨基和羧基数目相同）分开。也可将某些水溶性芳香族物质与脂肪族物质分开。 3．对分子量大的化合物的吸附力大于分子量小的化合物。例如，活性炭对肽的吸附力大于 氨基酸，对多糖的吸附力大于单糖。因此可利用活性炭分离氨基酸与肽，单糖与多糖。氨基酸、 单糖先洗脱下来；肽、多糖后洗脱下来。 （三）活性炭的处理 活性炭是一种强吸附剂，对气体的吸附力及吸附量都很大。气体分子占据了活性炭的吸附表 面，因而造成所谓活性炭“中毒”，使其活力降低。同时，又有一些气体可引起某些副反应，如 氧气可引起层析物质的氧化。为了防止该副反应的发生，最简单方便的方法就是加热烘干，可将 吸附的绝大多数气体除去。一般在使用前，将活性炭在150℃加热干燥4～5小时即可。锦纶活性 炭因锦纶受热温度高要变形，在100℃干燥4～5小时即可。另外，活性炭在生产过程中曾加入氯 化锌活化，生产原料木屑内也含有各种金属离子，它们对层析带来很多麻烦。特别是重金属离 子，其本身具有很高的毒性，而且吸附在活性炭表面上，具有强的催化作用，致使层析物质产生 某些催化反应，因此必须将其除去。医药用、化学纯活性炭在出厂前对所含杂质及重金属均经检 查，符合规定要求。锦纶活性炭在制备过程中也经过大量酸洗、水洗，勿需特别处理即可应用。 但是，工业用活性炭在用前必须进行严格处理，一般可用下述方法处理：将工业用活性炭置 于烧瓶中，加入2～3MOL盐酸，水浴加热半小时，在加热过程中，间歇地振摇。然后减压滤干， 如此以酸处理2至3次，再以热蒸馏水洗涤至pH5～6，滤干，烘箱中150℃干燥8小时，置于瓶中， 密塞备用。 （四）柱层析的操作 1．装柱：因活性炭在水中吸附力最强，一般在水中装柱。活性炭以蒸馏水浸泡1小时左右
不断搅拌除去气泡。倒入柱中，让其自然沉降，装至所需体积，备用。粉未状活性炭因流速太慢，则需与硅藻土（1：1）混合后，再用蒸馏水调成糊状装柱，待样品上柱后，层析柱顶端连有自动控制的加压泵进行层析。2.加样：样品一般用水溶解。浓度在25～50%之间，即1g样品溶于2～4mL水中。活性炭层析的样品上柱量较大，一般每100mg活性炭可上样5～10g。在某些情况下，样品的上柱量及样品浓度可适当增加或减少。例如，当欲分离之成分在样品中的相对含量较低，且易吸附于柱上，而其他成分不易吸附时，则可将上柱量增大，使大部分成分很快从柱上流下，而欲分离成分经适当洗脱即可得到：当欲分离成分不易被活性炭吸附且不易吸附成分不只一个，则样品上柱量必须大大减少，才能达到分离目的。总之，具体情况具体分析，不能生搬硬套。某些样品在水中不易溶解时，可加适量甲醇、乙醇或丙酮使其溶解。但样品体积不可太大，样品上柱量也应相应减少，否则影响分离效果。3.洗脱：洗脱溶剂一般采用水、各种浓度的乙醇液。也有人采用5～10%丙酮液、2～5%醋酸、1～5%苯酚水溶液等洗脱，但不常用。最常用的是水一乙醇溶液梯度洗脱，其洗脱顺序是：水、10%、20%、30%、50%、70%的乙醇溶液。若仍有部分物质未洗脱下来，最后可用适当有机溶剂或3.5%氨水洗脱。流出液以适当体积分瓶收集，分别浓缩。用过的活性炭可以用酸碱处理回收，因活性炭来源较易，价格便宜，一般不回收使用。五、大扎吸附树脂层析大孔吸附树脂是一种不含交换基团的、具有大孔结构的高分子吸附剂，主要以苯乙烯等为原料加入一定量致孔剂甲酰胺聚合而成，通常分为非极性、中极性和弱极性三类，是吸附性和分子筛原理相结合的分离材料。它可有效地吸附具有不同化学性质的各种类型的化合物，以范德华力从很低浓度的溶液中吸附有机物。其分子筛特性则是由于其本身多孔性结构所决定。大孔吸附树脂由于具有选择性好、吸附容量大、机械强度高、再生处理方便、吸附速度快、解吸容易等优点，现厂泛应用手工业废水的处理，维生素、抗生素的分离提纯及水溶性成分的分离纯化，近年来多用于皂苷及其它苷类化合物的分离。（一）大孔吸附树脂的类型及性能大孔吸附树脂一般为白色颗粒状，理化性质稳定，不溶于酸、碱及有机溶剂。按性能分为极性、中极性和非极性三种类型。非极性吸附树脂是以苯乙烯为单位，二乙烯苯为交联剂聚合而成，故称为芳香族吸附剂。中极性吸附树脂是以甲基丙烯酸酯为单位和交联剂聚合而成，也称为脂肪族吸附剂。极性吸附树脂则在结构中含有硫氧、酰胺、氮氧等基团。由于树脂性质各异，使用时须加以选择。如分离极性较大的化合物应选用中极性的树脂，而极性较小的化合物则选用非极性树脂。-18 -
- 18 - 不断搅拌除去气泡。倒入柱中，让其自然沉降，装至所需体积，备用。粉末状活性炭因流速太 慢，则需与硅藻土（1:1）混合后，再用蒸馏水调成糊状装柱，待样品上柱后，层析柱顶端连有 自动控制的加压泵进行层析。 2．加样：样品一般用水溶解。浓度在25～50％之间，即1 g样品溶于2～4mL水中。活性炭层 析的样品上柱量较大，一般每100mg活性炭可上样5～10g。在某些情况下，样品的上柱量及样品 浓度可适当增加或减少。例如，当欲分离之成分在样品中的相对含量较低，且易吸附于柱上，而 其他成分不易吸附时，则可将上柱量增大，使大部分成分很快从柱上流下，而欲分离成分经适当 洗脱即可得到；当欲分离成分不易被活性炭吸附且不易吸附成分不只一个，则样品上柱量必须大 大减少，才能达到分离目的。总之，具体情况具体分析，不能生搬硬套。某些样品在水中不易溶 解时，可加适量甲醇、乙醇或丙酮使其溶解。但样品体积不可太大，样品上柱量也应相应减少， 否则影响分离效果。 3．洗脱：洗脱溶剂一般采用水、各种浓度的乙醇液。也有人采用5～10％丙酮液、2～5％醋酸、 1～5％苯酚水溶液等洗脱，但不常用。最常用的是水－乙醇溶液梯度洗脱，其洗脱顺序是：水、 10％、20％、30％、50％、70％的乙醇溶液。若仍有部分物质未洗脱下来，最后可用适当有机溶 剂或3.5％氨水洗脱。流出液以适当体积分瓶收集，分别浓缩。用过的活性炭可以用酸碱处理回 收，因活性炭来源较易，价格便宜，一般不回收使用。 五、大孔吸附树脂层析 大孔吸附树脂是一种不含交换基团的、具有大孔结构的高分子吸附剂，主要以苯乙烯等为原 料加入一定量致孔剂甲酰胺聚合而成，通常分为非极性、中极性和弱极性三类，是吸附性和分子 筛原理相结合的分离材料。它可有效地吸附具有不同化学性质的各种类型的化合物，以范德华力 从很低浓度的溶液中吸附有机物。其分子筛特性则是由于其本身多孔性结构所决定。大孔吸附树 脂由于具有选择性好、吸附容量大、机械强度高、再生处理方便、吸附速度快、解吸容易等优 点，现广泛应用于工业废水的处理，维生素、抗生素的分离提纯及水溶性成分的分离纯化，近年 来多用于皂苷及其它苷类化合物的分离。 （一）大孔吸附树脂的类型及性能 大孔吸附树脂—般为白色颗粒状，理化性质稳定，不溶于酸、碱及有机溶剂。按性能分为极 性、中极性和非极性三种类型。非极性吸附树脂是以苯乙烯为单位，二乙烯苯为交联剂聚合而 成，故称为芳香族吸附剂。中极性吸附树脂是以甲基丙烯酸酯为单位和交联剂聚合而成，也称为 脂肪族吸附剂。极性吸附树脂则在结构中含有硫氧、酰胺、氮氧等基团。由于树脂性质各异，使 用时须加以选择。如分离极性较大的化合物应选用中极性的树脂，而极性较小的化合物则选用非 极性树脂