、普通分光光度法 单组分的测定 通常采用AC标准曲线法定量测定。 2.多组分的同时测定 组分a组分b (1)若各组分的吸收曲线互不重叠,则可 在各自最大吸收波长处分别进行测定。这 本质上与单组分测定没有区别 入2 (2)若各组分的吸收曲线互有重叠,则可A|a 根据吸光度的加合性求解联立方程组得出 各组分的含量 n1-Eaa1bCa + Eabc 入1A2 A,2=Cax2bca t Eba2bcb
一、普通分光光度法 1.单组分的测定 通常采用 A-C 标准曲线法定量测定。 2.多组分的同时测定 ⑴ 若各组分的吸收曲线互不重叠，则可 在各自最大吸收波长处分别进行测定。这 本质上与单组分测定没有区别。 ⑵ 若各组分的吸收曲线互有重叠，则可 根据吸光度的加合性求解联立方程组得出 各组分的含量。 Aλ1= εaλ1bca ＋ εbλ1bcb Aλ2= εaλ2bca ＋ εbλ2bcb
二、示差分光光度法(示差法) 普通分光光度法一般只适于测定微量组分,当待测组分含 量较高时,将产生较大的误差。需采用示差法。即提高入射 光强度,并采用浓度稍低于待测溶液浓度的标准溶液作参比 溶液。 设:待测溶液浓度为c2,标准溶液浓度为cs(c<cx)。 则: A=&b A=8b c △A=Ax-As=b(cx-cs)=b△c 测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的吸 光度之差AA
二、示差分光光度法（示差法） 普通分光光度法一般只适于测定微量组分，当待测组分含 量较高时，将产生较大的误差。需采用示差法。即提高入射 光强度，并采用浓度稍低于待测溶液浓度的标准溶液作参比 溶液。 设：待测溶液浓度为cx，标准溶液浓度为cs(cs < cx)。 则： Ax= εb cx As = εb cs ΔＡ＝Ａx －Ａs =εb(cx － cs ）=εbΔc 测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的吸 光度之差ΔＡ
MA=A - Ascb(c-Cs)=cbAc 测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的 吸光度之差AA 示差法测得的吸光度与Ac呈直线关系。由标准曲线上 查得相应的Ac值,则待测溶液浓度c: c=C+Ac 示差法标尺扩展原理: 普通法:cs的T=10%;cx的T5%示差法:cs做参比,调 T=-100%则:cx的T=50%;标尺扩展10倍 普通法。102030405060708090T% 示差法102030405060708090T%
ΔA＝Ax －As =εb(cx － cs ）=εbΔc 测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的 吸光度之差ΔA。 示差法测得的吸光度与Δc呈直线关系。由标准曲线上 查得相应的Δc值，则待测溶液浓度cx ： cx = cs + Δc 示差法标尺扩展原理： 普通法： cs的T=10%；cx的T=5%.示差法：cs 做参比，调 T=100%则： cx的T=50% ；标尺扩展10倍
三、双波长分光光度法 不需空白溶液作参比;但需要两个单色器获得两束单色 光(A1和A2);以参比波长A1处的吸光度Ax1作为参比,来 消除干扰。在分析浑浊或背景吸收较大的复杂试样时显示出 很大的优越性。灵敏度、选择性、测量精密度等方面都比单 波长法有所提高。 A=Ax2=Al=( )bc 两波长处测得的吸光度差值AA与待测组分浓度成正比 。Ex1和x2分别表示待测组分在λ1和λ2处的摩尔吸光系 数 嘹一单色器 吸收池 按受器双波长
三、双波长分光光度法 不需空白溶液作参比；但需要两个单色器获得两束单色 光(λ1和λ2)；以参比波长λ1处的吸光度Aλ1作为参比，来 消除干扰。在分析浑浊或背景吸收较大的复杂试样时显示出 很大的优越性。灵敏度、选择性、测量精密度等方面都比单 波长法有所提高。 ΔA ＝Aλ2 －Aλ1 ＝ (ελ2 －ελ1)b c 两波长处测得的吸光度差值ΔA与待测组分浓度成正比 。ελ1和ελ2分别表示待测组分在λ1和λ2处的摩尔吸光系 数
关键问题: 测量波长A2和参比波长41的选择与组合 以两组分x和y的双波长法测定为例: 设:x为待测组分,y为干扰组分,二者的吸光度差分别为: AA和A4、,则该体系的总吸光度差AA为: AA、+=AA、+AA 如何选择波长1、2有一定的要求。 单色器 吸收池 接受器双波长
关键问题: 测量波长λ2和参比波长λ1的选择与组合 以两组分x和y的双波长法测定为例： 设：x为待测组分，y为干扰组分，二者的吸光度差分别为: ΔAx和ΔAy，则该体系的总吸光度差ΔAx+y为： ΔAx+y = ΔA x + ΔAy 如何选择波长λ1 、λ2有一定的要求