()DNA聚合酶催化的反应 1.5至3′的聚合活性 催化四种dNTP一个一个地接到DNA 链上去。 (dNMP)n+ dNTP>(dNMP)n+1 PPi
(一) DNA聚合酶催化的反应 1. 5´至3´的聚合活性 催化四种dNTP一个一个地接到DNA 链上去。 (dNMP)n + dNTP → (dNMP)n+1 + PPi
聚合反应机理:⑨50 G:::C 引物3 模|3 A:r+板 3 链5 ⑦1so ==A
聚合反应机理： 5' 3' P O G P O A 模板链 CTA 3' 5' 引物 3' 3' 5' 5'OH P O G P O A O OH T P 模板链 CTA 3' 5' 引物 3' 3'3' 5' 5' P 5' O OH T P P 3' 5
聚合反应的特点: (1)以单链DNA为模板 (2)以dNTP为原料 (3)引物提供3'-OH (4)聚合方向为5-3
聚合反应的特点 ： (1) 以单链DNA为模板 (2) 以dNTP为原料 (3) 引物提供3´-OH (4) 聚合方向为5´ →3´
2核酸外切酶活性 5→3外切酶活性: 切除引物 切除突变的片段 3→5外切酶活性 切除错配的核苷酸 5 3 C+TT AGG◆A GAA GT C G 3 5
2.核酸外切酶活性 3´ →5´外切酶活性： 切除错配的核苷酸 5´ →3´外切酶活性： 切除引物 切除突变的片段 C T T C A G G A G A A G T C C G G C G 5' 3' 3' 5
H2c O Base HO H new ● O-P phosphodiester o-P-0-P-0 bond H2C QBase pyrophosphate (PPi HO H this becomes new 3 end
pyrophosphate (PPi) this becomes new 3’ end new phosphodiester bond