PCR及分子标记
PCR 及分子标记
PCR Polymerase Chain Reaction) Three steps: denaturation primer annealing, polymerization Peoples choice Reaction
PCR(Polymerase Chain Reaction) Three steps: denaturation, primer annealing, polymerization. Peoples Choice Reaction
The PCR cycle 95C step to denature the duplex dna An annealing step of around 55c to allow the primers to bind 72C polymerization step g2+, dNTPs are required in addition to template, primers, buffer and enzyme
The PCR cycle • 95C step to denature the duplex DNA, • An annealing step of around 55C to allow the primers to bind, • 72C polymerization step. • Mg2+,dNTPs are required in addition to template,primers,buffer and enzyme
历史 605-705:基因的体外分离技术。 Khorana(1971):美国MT教授、1968年 诺贝 尔医学奖得主“经过DNA变性,与合适引物 杂交,用DNA聚合醃伸引物,并不断重复 该过程便可克隆tRNA基因” 核酸体外扩增最早设想遗忘: 当时很难进行测序和合成寡核苷酸引物 当时(1970) Smith等发现了内切酶,体外克 隆基因成为可能
历史 60s-70s：基因的体外分离技术。 Khorana（1971）：美国MIT教授、1968年 诺贝 尔医学奖得主 “经过DNA变性，与合适引物 杂交，用DNA聚合酶延伸引物，并不断重复 该过程便可克隆tRNA基因” 。 核酸体外扩增最早设想遗忘: 当时很难进行测序和合成寡核苷酸引物； 当时(1970)Smith等发现了内切酶，体外克 隆基因成为可能
Kary Mullis(1985) 发明过程 Ⅵuis在“偶然想出的聚合酶链反应”一文中写到: 丶这种简单得令人惊奇,可以无限量地拷贝DNA 片段的方法是在不可想象的情况下,即驾车行驶在 月色下的加利福尼亚山间公路上时想出来的 发展过程: 开始使用大肠杆菌DNA聚合酶 Klenow片段, 该酶不耐热,每次加热变性DNA后都要重新补加。 耗时、费力、易出错。耐热DNA聚合酶的应用使得 自动化
Kary Mullis(1985) 发明过程 Mullis 在“偶然想出的聚合酶链反应”一文中写到: “这种简单得令人惊奇，可以无限量地拷贝DNA 片段的方法是在不可想象的情况下， 即驾车行驶在 月色下的加利福尼亚山间公路上时想出来的” 。 发展过程： 开始使用大肠杆菌 DNA聚合酶Klenow片段， 该酶不耐热，每次加热变性DNA后都要重新补加。 耗时、费力、易出错。耐热DNA聚合酶的应用使得 自动化