Eco019|2674 BstAPl 179 Aatll 2617 Ndel 183 Sspl 2501 Ehel 235 Pdm|2294 cql 2215 2486146 MCS Sca|2177 儿Uc18/19 Sapl 683 2686b bp 852 Afllll, BspLul 11 806 Gsul 1784 626 cfr10|1779 Eco3111766 1466 Eam1105|1694 rep Cail 1217
Ava 15a) T7 promoter 311-327 F7) Bpu11021 ind Il(173) T transcription start 310 Tz· Tag coding sequence Nh≌ 207-239 Dra lll(mo1 Xb3 1(27 Multiple cloning sites (BamH I-Xho D)158 t ongin(4075432 203 Sca l(4538) His Tag coding PyU 14428 Mlu le1034 sequence 140-157 Pst I4303 Bcl I0078 Bs1245) T terminator 26-72 Bsa li411 己→ Bmg l(1273) Apa k 1275) lac/ coding sequence Eaml 1D5 I(4058 ET21a(+) 5443p) 714-1793 EcoRV(1514) Hpa 1 16701 pBR322 origin 3227 bla coding sequence AlwN I(3581) ShaL(1900) 3988-4845 PpuM I(2111 f, origin 4977-5432 sp5) BspLUI 1 1(3165 Bulo l 271) Sap lag) 日st1107l29 BspG I(2891) Tth111l210
T7 promoter 311-327 T7 transcription start 310 T7 •Tag coding sequence 207-239 Multiple cloning sites (BamH I - Xho I) 158- 203 His•Tag coding sequence 140-157 T7 terminator 26-72 lacI coding sequence 714-1793 pBR322 origin 3227 bla coding sequence 3988-4845 f1 origin 4977-5432
lac operator 3606-3625 T, promoter 1-17 lac operator 22-42 l(3o1) T, transcription start 18 PinA l3sg9), promoter Xba kan, Bgl (223) BssH II (20) multiple cloning region BSpLU11|(3263 Nsp k3267) 276467 (Nco FPac D) His Tag coding Ⅲl(362 sequence 437-454 AlwN l(2854 Pwu le7).ORF HSV· Tag( coding pETBlue-2 sequence 395-430 3653bp) lacZ start codon 491 Bpu1102l(1001) BspE I(1078) lacz a-peptide ORF 57 491 E coli promoter 541-569 Xmn I(2338) Dra Ill(1329) fl origin 1096-1551 cQ 1(2244 Sca k2219) bla cod ssp k1534 Ahd k(1739) 1669-2526 pUC origin 3206
lac operator 3606–3625 T7 promoter 1–17 lac operator 22–42 T7 transcription start 18 multiple cloning region 276–467 (Nco I–Pac I) His•Tag® coding sequence 437–454 HSV•Tag® coding sequence 395–430 lacZ start codon 491 lacZ α-peptide ORF 57– 491 E. coli promoter 541–569 f1 origin 1096–1551 bla coding sequence 1669–2526 pUC origin 3206
受体细胞 受体细胞为外源基因的克隆和表达提供特定的环境和条件 载体体系一定要与受体细胞的基因型相配 如:利用a互补筛选的载体要选择801acZ△M15基因型的受体细胞才能实 现a互补筛选 思考题 1.受体细胞的特点什么? 都有哪些受体细胞? 3.载体和受体(宿主)细胞之间的关系是什么? 4.如何选择合适的受体细胞?
受 体 细 胞 受体细胞为外源基因的克隆和表达提供特定的环境和条件 载体体系一定要与受体细胞的基因型相配 如：利用α互补筛选的载体要选择ф80 lacZ△M15基因型的受体细胞才能实 现α互补筛选 思考题 1. 受体细胞的特点什么？ 2. 都有哪些受体细胞？ 3. 载体和受体（宿主）细胞之间的关系是什么？ 4. 如何选择合适的受体细胞？
JM109菌株 可作为大多数质粒载体的受体菌,也可以用于制备M13等噬菌体载体的单链 DNA。该菌株易于培养,并且可以用较多的转化方法进行有效的转化。 DH5a菌株 种常用于质粒克隆的菌株。其j801acZ△M15基因的产物可与pUC载体编 码的b半乳糖苷酶氨基端实现a互补,可用于蓝白斑筛选。recA1和endA1 的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。 BL21(DE3)菌株 该菌株用于以T7RNA聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主 T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受控于λ噬菌体DE区的1acUV5启动子,该 区整合于BL21的染色体上。该菌适合于非毒性蛋白的表达
JM109 菌株 可作为大多数质粒载体的受体菌，也可以用于制备M13等噬菌体载体的单链 DNA。该菌株易于培养，并且可以用较多的转化方法进行有效的转化。 DH5α 菌株 一种常用于质粒克隆的菌株。其 j80lacZ△M15基因的产物可与pUC载体编 码的b-半乳糖苷酶氨基端实现a互补，可用于蓝白斑筛选。recA1 和endA1 的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。 BL21（DE3） 菌株 该菌株用于以T7 RNA聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。 T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受控于λ噬菌体DE3区的lacUV5启动子，该 区整合于BL21的染色体上。该菌适合于非毒性蛋白的表达