BL21(DE3) plysS菌株 该菌株带有质粒 pLySS,具有氯霉素抗性。此质粒含有表达T7溶菌酶的基因, T7溶菌酶能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达。适 合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达
BL21（DE3）pLysS 菌株 该菌株带有质粒pLysS，具有氯霉素抗性。此质粒含有表达T7 溶菌酶的基因， T7溶菌酶能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰 IPTG诱导的表达。适 合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达
目的基因的来源和分离 基因组文库:基因组文库是含有某种生物体全部基因的随机片段的重 组DNA克隆群体 ◆cDNA文库:将真核细胞内全部mRNA转录成cDNA并将双链cDNA和载体连 接,由此得到的cDNA克隆群体直接从特定的mRNA入手 PCR和 RT-PCR 基因的化学合成 从蛋白质入手 思考题 为什么需要目的基因? 2.如何鉴定目的基因? 3.如何获得目的基因?
目 的 基 因 的 来 源 和 分 离 基因组文库：基因组文库是含有某种生物体全部基因的随机片段的重 组DNA克隆群体 cDNA文库：将真核细胞内全部mRNA转录成cDNA并将双链cDNA和载体连 接，由此得到的cDNA克隆群体直接从特定的mRNA入手 PCR和RT-PCR 基因的化学合成 从蛋白质入手 思考题 1. 为什么需要目的基因？ 2. 如何鉴定目的基因？ 3. 如何获得目的基因？
外源基因导入受体细胞 ◆CaCl2处理后的细菌转化或转染 ◆高压电穿孔 聚乙二醇介导的原生质体转化 ◆原生质体融合 细胞核的显微注射 颗粒轰击技术
外 源 基 因 导 入 受体 细 胞 CaCl2处理后的细菌转化或转染 高压电穿孔 聚乙二醇介导的原生质体转化 原生质体融合 细胞核的显微注射 颗粒轰击技术
重组子的筛选 1.根据重组载体的特点进行筛选:抗药性筛选法、插入失活 2.营养缺陷型筛选法:载体上携带某些营养成分基因而受体菌缺失 3.限制性酶切分析 4.核酸杂交:原位杂交、 Southern、 Northern 5. PCR 6.表达产物的检测:电泳、测活、蛋白印迹 7.序列测定
重 组 子 的 筛 选 1. 根据重组载体的特点进行筛选：抗药性筛选法、插入失活 2. 营养缺陷型筛选法：载体上携带某些营养成分基因而受体菌缺失 3. 限制性酶切分析 4. 核酸杂交：原位杂交、Southern、Northern 5. PCR 6. 表达产物的检测：电泳、测活、蛋白印迹 7. 序列测定
分子生物学实验室常用仪器设备
分子生物学实验室常用仪器设备