卫生学 实习指导 石河子大学医学院预防医学系
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实习一大气中二氧化硫的测定 (甲醛溶液吸收盐酸副玫瑰苯胺分光光度法)》 【目的要求】了解大气中二氧化硫的测定原理和方法。 【原理】大气中的二氧化硫被甲醛溶液吸收后，生成稳定的羟基甲基磺酸，加碱 后，与盐酸副玫瑰苯胺（简称PRA)作用，生成紫红色化合物，根据颜色深浅进行比色 定量。本法检出下限为0.3μg10ml(按与吸光度0.01相对应的浓度计)：测定范围为 10ml样品溶液中含0.3μg一20μg二氧化硫：若采样体积为20L,可测浓度范围是0.01 mg/m3-lmgm3。 【器材】空气采样器：流量范围0.1min~1Umin:普通型多孔玻板吸收管：25ml 具塞比色管：分光光度计。 【试剂】本法所用试剂纯度除特别注明外均为分析纯，水为重蒸馏水或去离子水 亦可用石英蒸馏器蒸馏的一次水。 1、吸收贮备液（甲醛邻苯二甲酸氢钾缓冲液）：称量2.04g邻苯二甲酸氢钾和 0.364g乙二胺四乙酸二钠（简称EDTA-2Na)溶于水中，移入1L容量瓶中，再加入5.30ml 37%甲醛溶液，用水稀释至刻度。贮于冰箱，可保存一年。 2、吸收应用液：临用时，将上述吸收贮备液用水稀释10倍。 3、2molL氢氧化钠溶液：称取8.0g氢氧化钠溶于100ml水中。 4、0.3%氨磺酸钠溶液：称取0.3g氨磺酸，加入3.0ml2mol/L氢氧化钠溶液，用 水稀释至100ml. 5、1mol/L盐酸溶液：量取浓盐酸（优级纯，p20=1.19gml)86ml,用水稀 至1000ml。 6、0.25%PRA溶液贮备液：称取0.125gPRA(C1H1NCI·3HC),用1molL盐 酸溶解并稀释至50ml。 7、4.5molL磷酸溶液：量取浓磷酸307ml,用水稀释至1L。 8、0.025%PRA工作液：吸取0.25%的贮备液25ml,移入250ml容量瓶中，用 4.5molL磷酸溶液稀释至刻度，放置24h后使用。此溶液避光密封保存，可使用9个 月 9、二氧化硫标准溶液贮备液：称取0.2g亚硫酸钠(NSO)及0.01g乙二胺四乙酸 二钠盐(EDTA-2Na)溶于200ml新煮沸并冷却的水中。此溶液每毫升含有相当于32(
1 实习一 大气中二氧化硫的测定 （甲醛溶液吸收-盐酸副玫瑰苯胺分光光度法） 【目的要求】了解大气中二氧化硫的测定原理和方法。 【原理】大气中的二氧化硫被甲醛溶液吸收后，生成稳定的羟基甲基磺酸，加碱 后，与盐酸副玫瑰苯胺(简称 PRA)作用，生成紫红色化合物，根据颜色深浅进行比色 定量。本法检出下限为 0.3μg/10ml(按与吸光度 0.01 相对应的浓度计)；测定范围为 10ml 样品溶液中含 0.3μg~20μg 二氧化硫；若采样体积为 20L，可测浓度范围是 0.015 mg/m3~1mg/m3。 【器材】空气采样器：流量范围 0.1 L/min～1L/min；普通型多孔玻板吸收管；25ml 具塞比色管；分光光度计。 【试剂】本法所用试剂纯度除特别注明外均为分析纯，水为重蒸馏水或去离子水； 亦可用石英蒸馏器蒸馏的一次水。 1、吸收贮备液（甲醛-邻苯二甲酸氢钾缓冲液）：称量 2.04g 邻苯二甲酸氢钾和 0.364g 乙二胺四乙酸二钠(简称 EDTA-2Na)溶于水中，移入 1L 容量瓶中，再加入 5.30ml 37％甲醛溶液，用水稀释至刻度。贮于冰箱，可保存一年。 2、吸收应用液：临用时，将上述吸收贮备液用水稀释 10 倍。 3、2mol/L 氢氧化钠溶液：称取 8.0g 氢氧化钠溶于 100ml 水中。 4、0.3％氨磺酸钠溶液：称取 0.3g 氨磺酸，加入 3.0ml 2mol/L 氢氧化钠溶液，用 水稀释至 100ml。 5、1mol/L 盐酸溶液：量取浓盐酸（优级纯，ρ20＝1.19g/ml） 86ml，用水稀释 至 1000 ml。 6、0.25％PRA 溶液贮备液：称取 0.125g PRA (C19H18N3Cl·3HCl)，用 1mol/L 盐 酸溶解并稀释至 50ml。 7、4.5mol/L 磷酸溶液：量取浓磷酸 307ml，用水稀释至 1L。 8、 0.025％PRA 工作液：吸取 0.25％的贮备液 25ml，移入 250ml 容量瓶中，用 4.5mol/L 磷酸溶液稀释至刻度，放置 24h 后使用。此溶液避光密封保存，可使用 9 个 月。 9、二氧化硫标准溶液贮备液：称取 0.2g 亚硫酸钠(Na2SO3)及 0.01g 乙二胺四乙酸 二钠盐(EDTA-2Na) 溶于 200ml 新煮沸并冷却的水中。此溶液每毫升含有相当于 320
μg~400μg二氧化硫。溶液需放置2h-3劲后标定其准确浓度（标定方法见附注）。按 标定计算的结果，立即用吸收液稀释成每毫升含25μg二氧化硫的标准贮备液，于冰 箱贮存可保存三个月。 10、二氧化硫标准工作溶液：用吸收液将标准贮备液稀释成每毫升含5μg二氧化 疏的标准工作液，贮于冰箱可保存一个月。25℃以下室温条件可保存3d。 【操作步骤： 1、采样：用一只内装有8ml吸收液的普通型多孔玻板吸收管安装于空气采样器 上，以0.5/min流量，采样30min~60min。将采样体积换算成标准状况下的采样体 积Va 2、分析： (1)标准曲线的绘制：用6支25ml比色管，按表1制备标准系列 实习表11二氧化硫标准系列 管号 012345 标准工作液(ml)00.201.002.003.004.00 吸收液(ml） 10.09.89.08.07.06.0 二氧化硫含量(4g)015101520 各管中分别加入1.0ml0.3%氨磺酸钠溶液、0.5ml2.0mol/L氢氧化钠溶液和1m 水，充分混匀后，再加入2.5ml0.025%PRA溶液快速射入混合液中，立即盖塞颠倒 混匀，放置5min-20min显色。于波长570nm处，用10mm比色皿，以水为参比，测 定各管吸光度。以吸光度值为纵坐标，二氧化硫含量(“g)为横坐标，绘制标准曲线， 并计算回归直线的斜率b。以b的倒数作为样品测定的计算因子Bs(μg吸光度)。 (2)样品测定：采样后，将吸收管中的吸收液移入25ml比色管，用少量吸收液 分两次洗涤吸收管，合并洗液于比色管中，使总体积为10ml。将该管与上述各标准系 列管同时操作，测得吸光度为A。 【计算】 C-(A-A)xB V。 式中：C一空气中二氧化硫的浓度，mgm3: A一—样品的吸光度： 2
2 μg～400μg 二氧化硫。 溶液需放置 2h~3h 后标定其准确浓度(标定方法见附注)。按 标定计算的结果， 立即用吸收液稀释成每毫升含 25μg 二氧化硫的标准贮备液，于冰 箱贮存可保存三个月。 10、二氧化硫标准工作溶液：用吸收液将标准贮备液稀释成每毫升含 5μg 二氧化 硫的标准工作液，贮于冰箱可保存一个月。25℃以下室温条件可保存 3d。 【操作步骤】： 1、采样：用一只内装有 8ml 吸收液的普通型多孔玻板吸收管安装于空气采样器 上，以 0.5L/min 流量，采样 30min～60min。将采样体积换算成标准状况下的采样体 积 V0。 2、分析： （1） 标准曲线的绘制：用 6 支 25ml 比色管，按表 1 制备标准系列。 实习表 1-1 二氧化硫标准系列 管 号 0 1 2 3 4 5 标准工作液(ml) 0 0.20 1.00 2.00 3.00 4.00 吸收液(ml) 10.0 9.8 9.0 8.0 7.0 6.0 二氧化硫含量(μg) 0 1 5 10 15 20 各管中分别加入 1.0ml 0.3％氨磺酸钠溶液、0.5ml 2.0mol/L 氢氧化钠溶液和 1ml 水， 充分混匀后，再加入 2.5ml 0.025％ PRA 溶液快速射入混合液中，立即盖塞颠倒 混匀，放置 5min~20min 显色。于波长 570nm 处，用 10mm 比色皿，以水为参比，测 定各管吸光度。以吸光度值为纵坐标，二氧化硫含量（μg）为横坐标，绘制标准曲线， 并计算回归直线的斜率 b。以 b 的倒数作为样品测定的计算因子 Bs（μg/吸光度）。 （2）样品测定：采样后，将吸收管中的吸收液移入 25ml 比色管，用少量吸收液 分两次洗涤吸收管，合并洗液于比色管中，使总体积为 10ml。将该管与上述各标准系 列管同时操作，测得吸光度为 A。 【计算】 0 0 ( ) V A A Bs C − = 式中：C──空气中二氧化硫的浓度，mg/m3； A──样品的吸光度；
A。一试剂空白吸光度： Bs—计算因子，μg吸光度。 附注： 二氧化硫标准溶液标定方法：吸取20.00ml二氧化硫标准溶液，置于250ml碘量 瓶中，加入50ml新煮沸但己冷却的水，20.00ml碘溶液(0.1mol/L)及lml冰醋酸。 盖塞，摇匀。于暗处放置5min后，用0.1000mol/L硫代硫酸钠标准溶液滴定至浅黄色， 加入2ml5gL淀粉溶液，继续滴定至蓝色刚好褪去为终点。记录滴定所用硫代硫酸钠 的体积，平行3次，消耗硫代硫酸钠体积之差不应大于0.04ml,取其平均值：另吸取 3份含EDTA-2Na的空白水溶液20.00ml,用同法进行空白实验。记录空白滴定硫代硫 酸钠溶液的体积，平行滴定所消耗硫代硫酸钠体积之差不应大于0.04ml,取其平均值 二氧化硫标准溶液浓度计算 c=W1-V2C1x32.02x1000 20.00 式中：C一一二氧化硫标准溶液浓度，μgml: V,一一空白滴定所耗硫代硫酸钠标准容溶液的体积，ml: V2一一二氧化疏滴定所耗硫代硫酸钠标准溶液的体积，ml: C1一一硫代硫酸钠标准溶液的浓度，moL: 32.02一一二氧化硫标准溶液摩尔质量的1/2
3 A0──试剂空白吸光度； Bs──计算因子，μg/吸光度。 附注： 二氧化硫标准溶液标定方法：吸取 20.00ml 二氧化硫标准溶液，置于 250ml 碘量 瓶中，加入 50ml 新煮沸但已冷却的水，20.00ml 碘溶液（0.1mol/L）及 1ml 冰醋酸， 盖塞，摇匀。于暗处放置 5min 后，用 0.1000mol/L 硫代硫酸钠标准溶液滴定至浅黄色， 加入 2ml 5g/L 淀粉溶液，继续滴定至蓝色刚好褪去为终点。记录滴定所用硫代硫酸钠 的体积，平行 3 次，消耗硫代硫酸钠体积之差不应大于 0.04ml，取其平均值；另吸取 3 份含 EDTA-2Na 的空白水溶液 20.00ml，用同法进行空白实验。记录空白滴定硫代硫 酸钠溶液的体积，平行滴定所消耗硫代硫酸钠体积之差不应大于 0.04ml，取其平均值。 二氧化硫标准溶液浓度计算： 1000 20.00 C 32.02 1 V ) V1 2 ( C − = 式中：C——二氧化硫标准溶液浓度，μg/ml； V1——空白滴定所耗硫代硫酸钠标准容溶液的体积，ml； V2——二氧化硫滴定所耗硫代硫酸钠标准溶液的体积，ml； C1——硫代硫酸钠标准溶液的浓度，mol/L； 32.02——二氧化硫标准溶液摩尔质量的 1/2
实习二室内空气中甲醛的测定 酚试剂分光光度法) 【目的要求】了解室内空气中甲醛测定原理与方法。 【原理】空气中的甲醛与酚试剂反应生成嗪，嗪在酸性溶液中被高铁离子氧 化形成蓝绿色化合物。根据颜色深浅，比色定量。 【器材】大气采样器：流量范围01L/mn,流量稳定可调，具有定时装置 分光光度计：在630nm测定吸光度：10ml大型气泡吸收管：10l具塞比色管： 吸管若干支：空盒气压计： 【试剂】本法中所用水均为重蒸馏水或去离子交换水；所用的试剂纯度为 分析纯。 1.吸收液原液：称量O.10g酚试剂[CHSN(CH)C:NWH·HC1,简称MBT),加 水溶解，倾于100ml具塞量筒中，加水到刻度。放冰箱中保存，可稳定3d。 2.吸收液：量取吸收原液5ml,加95l水。临用前现配。 3.1%硫酸铁铵溶液：称量1.0g硫酸铁铵[NHFe(S0)212L0]用0.1mol几 盐酸溶解，并稀释至100l。 4.0.1000mo1/L碘溶液：称量30g碘化钾，溶于25m1水中，加入12.7g 碘。待碘完全溶解后，用水定容至1000ml。移入棕色瓶中，暗处贮存。 5.1o1/L氢氧化钠溶液：称量40g氢氧化钠，溶于水中，并稀释至1000ml。 6.0.5m01/L硫酸溶液：取28ml浓疏酸缓慢加入水中，冷却后，稀释至1000 ml。 7.0.1000mol/L碘酸钾标准溶液：准确称量3.5667g经105℃烘干2h的碘 酸钾（优级纯），溶解于水，移入1L容量瓶中，再用水定溶至1000■l。 8.0.1olL盐酸溶液：量取82l浓盐酸加水稀释至1000l。 9.1%淀粉溶液：将1g可溶性淀粉，用少量水调成糊状后，再加入100ml沸 水，并煮沸23min至溶液透明。冷却后，加入0.1g水杨酸或0.4g氯化锌保存。 10.硫代硫酸钠标准溶液：称量25g硫代硫酸钠(NaS05L0),溶于1000ml 新煮沸并己放冷的水中，此溶液浓度约为0.1mol/儿。加入0.2g无水碳酸钠，贮 存于棕色瓶内，放置一周后，再标定其准确浓度。 4
4 实习二 室内空气中甲醛的测定 (酚试剂分光光度法) 【目的要求】 了解室内空气中甲醛测定原理与方法。 【原理】 空气中的甲醛与酚试剂反应生成嗪，嗪在酸性溶液中被高铁离子氧 化形成蓝绿色化合物。根据颜色深浅，比色定量。 【器材】 大气采样器：流量范围 0~1 L/min，流量稳定可调，具有定时装置； 分光光度计：在 630 nm 测定吸光度；10 ml 大型气泡吸收管；10 ml 具塞比色管； 吸管若干支；空盒气压计； 【试剂】 本法中所用水均为重蒸馏水或去离子交换水；所用的试剂纯度为 分析纯。 1. 吸收液原液：称量 0.10 g 酚试剂[C6 H4SN(CH3)C:NNH2•HCl，简称 MBTH]，加 水溶解，倾于 100 ml 具塞量筒中，加水到刻度。放冰箱中保存，可稳定 3 d。 2. 吸收液：量取吸收原液 5 ml，加 95 ml 水。临用前现配。 3. 1%硫酸铁铵溶液：称量 1.0 g 硫酸铁铵[NH4Fe (SO4)2 •12 H2 O]用 0.1 mol/L 盐酸溶解，并稀释至 100 ml。 4. 0.1000 mol/L 碘溶液：称量 30 g 碘化钾，溶于 25 ml 水中，加入 12.7 g 碘。待碘完全溶解后，用水定容至 1000 ml。移入棕色瓶中，暗处贮存。 5. 1 mol/L 氢氧化钠溶液：称量 40 g 氢氧化钠，溶于水中，并稀释至 1000 ml。 6. 0.5 mol/L 硫酸溶液：取 28 ml 浓硫酸缓慢加入水中，冷却后，稀释至 1000 ml。 7. 0.1000 mol/L 碘酸钾标准溶液：准确称量 3.5667 g 经 105℃烘干 2 h 的碘 酸钾(优级纯)，溶解于水，移入 1 L 容量瓶中，再用水定溶至 1000 ml。 8. 0.1 mol/L 盐酸溶液：量取 82 ml 浓盐酸加水稀释至 1000 ml。 9. 1%淀粉溶液：将 1 g 可溶性淀粉，用少量水调成糊状后，再加入 100 ml 沸 水，并煮沸 2~3 min 至溶液透明。冷却后，加入 0.1 g 水杨酸或 0.4 g 氯化锌保存。 10. 硫代硫酸钠标准溶液：称量 25 g 硫代硫酸钠(Na2 S2O3 •5H2 O)，溶于 1000 ml 新煮沸并已放冷的水中，此溶液浓度约为 0.1 mol/L。加入 0.2 g 无水碳酸钠，贮 存于棕色瓶内，放置一周后，再标定其准确浓度