酵母双杂交系统的缺点①许多靶蛋白与GAL4BD融合后，具有转录激活报告基因的功能，从而导致假阳性结果；②如果蛋白质需要通过翻译后修饰才能发生相互作用，而这种特定的翻译后修饰在酵母细胞中又不发生，则导致假阴性结果；③它只能研究在核内表达的蛋白质的相互作用，而且融合蛋白的构建可能会影响到蛋白质本身的活性或折叠状态，这些因素亦可导致假阴性结果
①许多靶蛋白与GAL4 BD融合后，具有转录激活报 告基因的功能，从而导致假阳性结果； ②如果蛋白质需要通过翻译后修饰才能发生相互作 用，而这种特定的翻译后修饰在酵母细胞中又不发 生，则导致假阴性结果； ③它只能研究在核内表达的蛋白质的相互作用，而 且融合蛋白的构建可能会影响到蛋白质本身的活性 或折叠状态，这些因素亦可导致假阴性结果。 酵母双杂交系统的缺点
Co-IP应用无细胞体外转录、翻译系统直接以PCR产物为转录对象，将具有编码特点的DNA片段转录为mRNA，该过程模拟真核转录环境--免网状细胞的内环境而实现的。该过程的操作本质是建立在无RNA酶的基础上，随后的翻译过程使每一个亮氮酸都带有生物素标记，从而使翻译产物能够被亲和素-碱性磷酸酶（Streptavidin-AP）识别，以WesternBlueStabilizedSubstrate作为Streptavidin-AP作用的底物进行显色，根据产生的淡紫色条带的大小判断酵母双杂交Bait蛋白和Prey蛋白是否发生作用
应用无细胞体外转录、翻译系统直接以PCR产物为转录对象，将 具有编码特点的DNA片段转录为mRNA，该过程模拟真核转录环 境-兔网状细胞的内环境而实现的。该过程的操作本质是建立在 无RNA酶的基础上，随后的翻译过程使每一个亮氨酸都带有生物 素标记，从而使翻译产物能够被亲和素-碱性磷酸酶 （Streptavidin-AP）识别，以Western Blue Stabilized Substrate作 为Streptavidin-AP作用的底物进行显色，根据产生的淡紫色条带的 大小判断酵母双杂交Bait蛋白和Prey蛋白是否发生作用。 Co-IP
实例介绍：研究目标：布鲁氏菌表面蛋白在布鲁氏菌侵染巨噬细胞过程中所起的作用。主要研究方法：酵母双杂交、免疫共沉淀研究的目标蛋白：布鲁氏菌表面蛋白（外膜蛋白基因omp31和V型分泌系统蛋白基因virB2、virB3、virB5、virB8基因）病原侵染的细胞类型：巨噬细胞
实例介绍： 研究目标：布鲁氏菌表面蛋白在布鲁氏菌侵染巨 噬细胞过程中所起的作用。 主要研究方法：酵母双杂交 、免疫共沉淀 研究的目标蛋白：布鲁氏菌表面蛋白(外膜蛋白基 因omp31和Ⅳ型分泌系统蛋白基因virB2、virB3、 virB5、virB8基因) 病原侵染的细胞类型：巨噬细胞
研究背景布鲁氏菌病是一种由布鲁氏菌引起的严重危害人民健康和畜牧业发展的人畜共患传染病，是《中华人民共和国传染病防治法》规定的乙类传染病。AAP
研究背景 布鲁氏菌病是一种由布鲁氏菌引起的严重危害人民健康和畜牧 业发展的人畜共患传染病，是《中华人民共和国传染病防治法》 规定的乙类传染病
研究背景病原学研究发现，布鲁氏菌外膜蛋白和V型分泌系统家族蛋白与布鲁氏菌的侵染、胞内生存、繁殖有直接关系，是公认的毒力因子
病原学研究发现，布鲁氏菌外膜蛋白和Ⅳ型分泌系 统家族蛋白与布鲁氏菌的侵染、胞内生存、繁殖有 直接关系，是公认的毒力因子。 研究背景