一、自的基因的来源1.采用限制性内切酶，从生物组织中获取目的基因；2.通过mRNA合成cDNA：3.人工合成的DNA片段4.聚合酶链式反应（PCR）扩增特定基因片段
一、目的基因的来源 1. 采用限制性内切酶，从生物组织中获取目的基因； 2. 通过mRNA合成cDNA； 3. 人工合成的DNA片段； 4. 聚合酶链式反应（PCR）扩增特定基因片段
二、目的基因的克隆通过载体在适当的宿主中克隆选择载体目的基因与载体的连接重组体导入受体细胞通过PCR反应克隆目的基因
二、目的基因的克隆 • 通过载体在适当的宿主中克隆 选择载体 目的基因与载体的连接 重组体导入受体细胞 • 通过PCR反应克隆目的基因
三、 目的基因的转移电穿孔法显微注射法裸露DNA直接注射磷酸钙一DNA共沉淀法脂质载体包埋法病毒介导的生物学方法
三、目的基因的转移 ◆电穿孔法 ◆显微注射法 ◆裸露DNA直接注射 ◆磷酸钙—DNA共沉淀法 ◆脂质载体包埋法 ◆病毒介导的生物学方法
培养细胞选择性基因感兴趣的DNA新网在特定容器内将细胞与DNA混合利用脉冲电场提高细胞膜的S通透性，从而使外源DNA中细胞通过膜上电击转移至细胞中。此法简单、的小孔吸人DNA城Z童效率较高，广泛应用于培养菲DNA进人细胞核细胞的基因转移冰发不选择选择瞬间表达稳定表达电穿孔法实现外源基因的转移
电穿孔法实现外源基因的转移 利用脉冲电场提高细胞膜的 通透性，从而使外源DNA 转移至细胞中。此法简单、 效率较高，广泛应用于培养 细胞的基因转移
利用显微操作技术转移外源基因的方法。，此法转入原楼并基因长度可达数百kb；?受精卵能随机地整合在受体细胞负压固定管染色体DNA上，国因此应用外源基因O注射针范围广。但是这种整合有植人假孕母鼠时会导致转基因动物基因组的重排、易位、合缺失或嵌合小鼠定点突变。杂交，筛选纯合转基因小鼠显微注射转基因技术
显微注射转基因技术 利用显微操作技术转移外 源基因的方法。此法转入 基因长度可达数百kb；并 能随机地整合在受体细胞 染色体DNA上，因此应用 范围广。但是这种整合有 时会导致转基因动物基因 组的重排、易位、缺失或 定点突变