细胞融合过程需经过三 细胞融合装贸 细胞融合仪 个阶段(p156图7-1) 电极 输出+ 数字显示表 原生质体 0 1、点接触两个细胞表 ☐电极 面结合在一起的凝集状态。 其结合力不那么强，而且各 能加电压 个细胞保持完整的球形。 200 100 0 2、面接触 病毒PEG等 -100 使细胞进入面接触状态。在 1.未加压 2.加高频交流 电 此阶段各个细胞呈斜球形， 电极 细胞膜异始发生融合。 原生质体状态 3、融合融合过程进一 电极 步进行，则全部形成球或卵 脂分子 形融合细胞。 质膜状态 腹周 膜虹界表
⚫ 细胞融合过程需经过三 个阶段（p156 图7-1） ⚫ 1、点接触 两个细胞表 面结合在一起的凝集状态。 其结合力不那么强，而且各 个细胞保持完整的球形。 ⚫ 2、面接触 病毒/PEG等 使细胞进入面接触状态。在 此阶段各个细胞呈斜球形， 细胞膜开始发生融合。 ⚫ 3、融合 融合过程进一 步进行，则全部形成球或卵 形融合细胞
二、融合细胞的筛选与鉴定 。荧光标记筛选： 荧光抗体技术+流式细胞仪=快速分选术 ●形态、生化或遗传标记： 区别在形态生化上具有明显特征的细胞（藻类）；利用遗传标记 对筛选出的细胞株做鉴定。 。选择培养基筛选： 利用杂种细胞特有的生化途径，使用选择培养基进行筛选。脾脏 细胞与骨髓瘤细胞融合：DNA合成途径1.糖与氨基酸（叶酸为辅 酶)，2.次黄嘌呤、胸腺嘧啶核苷途径。HAT培养基筛选融合细胞
二、融合细胞的筛选与鉴定 ⚫ 荧光标记筛选： 荧光抗体技术+流式细胞仪=快速分选术 ⚫ 形态、生化或遗传标记： 区别在形态\生化上具有明显特征的细胞（藻类）；利用遗传标记 对筛选出的细胞株做鉴定。 ⚫ 选择培养基筛选： 利用杂种细胞特有的生化途径，使用选择培养基进行筛选。脾脏 细胞与骨髓瘤细胞融合：DNA合成途径1.糖与氨基酸（叶酸为辅 酶），2.次黄嘌呤、胸腺嘧啶核苷途径。HAT培养基筛选融合细胞
三、细胞融合技术的应用 单克 k士太4 Epitopes 抗原可 胞增殖 Isolate plcen cells Hybridize Select 田 胞后代 细胞融 Isolate serum ⊙ 1 Plasma cells Myeloma cells Hybridomas 8用喝 Clones 2 Ab-1 Ab-1 Ab-2 Ab- Ab- Polyclonal antiserum Monoclonal antibodies
三、细胞融合技术的应用 ⚫ 单克隆抗体的生产： 外源蛋白通常会诱导脾脏的B淋巴细胞产生抗体， 抗原可诱导多种B细胞合成不同的抗体。被激活的B细 胞增殖产生可合成抗体的后代，称之为克隆。多种B细 胞后代的细胞群，称之为多克隆。单克隆的制备需要 细胞融合技术。 1. B淋巴细胞 2. 骨髓瘤细胞
。微生物有种：酵母与有益曲霉菌的杂交育种。（面 包、葡萄酒等) 。植物有种：1972，粉蓝烟草和郎氏烟草原生质体融 合。目前已应用于粮油作物的再生植株上 。基因定位：融合细胞染色体选择性脱落 Human fibroblast Sendai umor ell virus medium Formation of hybrids Heterokaryote Proliferation of hybrids to form colonies 883 Hybrid cell on selective medium Hybrid colony A Colony B Colony C
⚫ 微生物育种：酵母与有益曲霉菌的杂交育种。（面 包、葡萄酒等） ⚫ 植物育种：1972，粉蓝烟草和郎氏烟草原生质体融 合。目前已应用于粮油作物的再生植株上 ⚫ 基因定位：融合细胞染色体选择性脱落