2)限制性核酸内切酶的类型及特性 按限制酶的组成、与修饰酶活性关系以及切 断核酸的情况不同,分为三类: I型 Ⅱ型 Ⅲ型
2)限制性核酸内切酶的类型及特性 按限制酶的组成、与修饰酶活性关系以及切 断核酸的情况不同，分为三类： Ⅰ型 Ⅱ型* Ⅲ型
第一类(型)限制性內切醢能识别专 的核苷酸顺序,并在识别点附近的一些 核苷酸上切割DNA分子中的双链,但是切 割的核苷酸顺序没有专一性,是随机的。 这类限制性内切酶在DNA重组技术或基因 工程中用处不大,无法用于分析DNA结构 或克隆基因。这类酶如EcoB、EcoK等
第一类（I型）限制性内切酶能识别专一 的核苷酸顺序，并在识别点附近的一些 核苷酸上切割DNA分子中的双链，但是切 割的核苷酸顺序没有专一性，是随机的。 这类限制性内切酶在DNA重组技术或基因 工程中用处不大，无法用于分析DNA结构 或克隆基因。这类酶如EcoB、EcoK等
第二类(型)限制性內切醢能识别专一的核 苷酸顺序,并在该顺序内的固定位置上切割 双链。由于这类限制性内切酶的识别和切割 的核苷酸都是专一的。因此,这种限制性内 切酶是DNA重组技术中最常用的工具酶之一。 这种酶识别的专一核苷酸顺序最常见的是4 个或6个核苷酸,少数也有识别5个核苷酸以 及7个、8个、9个、10个和11个核苷酸的。 II型限制性内切酶的识别顺序是一个回文 对称顺序,即有一个中心对称轴,从这个轴 朝二个方向“读”都完全相同。这种酶的切 割可以有两种方式:
第二类(II型)限制性内切酶能识别专一的核 苷酸顺序，并在该顺序内的固定位置上切割 双链。由于这类限制性内切酶的识别和切割 的核苷酸都是专一的。因此，这种限制性内 切酶是DNA重组技术中最常用的工具酶之一。 这种酶识别的专一核苷酸顺序最常见的是4 个或6个核苷酸，少数也有识别5个核苷酸以 及7个、8个、9个、10个和11个核苷酸的。 II 型限制性内切酶的识别顺序是一个回文 对称顺序，即有一个中心对称轴，从这个轴 朝二个方向“读”都完全相同。这种酶的切 割可以有两种方式：
粘性末端;是交错切割,结果形成两条单链末端 这种末端的核苷酸顺序是互补的,可形成氢键, 所以称为粘性末端。 如 EcoR的识别顺序为: 53…GA|TT_C…3 C-TTAAG 5 垂直线表示中心对称轴,从两侧“读”核苷酸顺序都是 GAATTC或 CTTAAG,这就是回文顺序( pal indrome)。和 表示在双链上交错切割的位置,切割后生成5’G和 AATTC.3、3…TA和G5二个DNA片段,各有 个单链末端,二条单链是互补的,其断裂的磷酸二酯键以 及氢键可通过DNA连接酶的作用而“粘合
粘性末端；是交错切割，结果形成两条单链末端， 这种末端的核苷酸顺序是互补的，可形成氢键， 所以称为粘性末端。 如EcoRI的识别顺序为： 5’…… G’AA|TT_C ……3’ 3’…… C_TT|AA’G …… 5’ 垂直线表示中心对称轴，从两侧“读”核苷酸顺序都是 GAATTC或CTTAAG，这就是回文顺序（palindrome）。_和 ‘表示在双链上交错切割的位置，切割后生成5’……G和 AATTC……3’ 、3’……CTTAA和G……5’二个DNA片段，各有一 个单链末端，二条单链是互补的，其断裂的磷酸二酯键以 及氢键可通过DNA连接酶的作用而“粘合”
平头末端: l型酶切割方式的另一种是在同一位置 上切割双链,产生平头末端。例如 EcoRV 的识别位置是: GAT ATC 3 3.. CTATAG….5 切割后形成5…GAT和ATc 3 3 ●●·。● GTA和TAG 5’。这种末端同 样可以通过DNA连接酶连接起来
II型酶切割方式的另一种是在同一位置 上切割双链，产生平头末端。例如EcoRV 的识别位置是： 5’…… GAT’|ATC …… 3’ 3’…… CTA’|TAG …… 5’ 切割后形成5’…… GAT和ATC …… 3’ 、 3’…… CTA和TAG …… 5’。这种末端同 样可以通过DNA连接酶连接起来。 平头末端：