第二节外源基因在原核细胞中的表达 原核生物细胞表达的特点 6在大肠杆菌mRNA的核糖体结合位点上,含有一个 翻译起始密码子及同16SRNA3”末端碱基互补的序列,即 SD序列。 Shine- Dalgarno(S-D) sequence:含有一个启始密码子 和一段同核糖体16SRNA3末端碱基互补的序列,叫 Shine Dalgarno(SD)序列
第二节外源基因在原核细胞中的表达 一、原核生物细胞表达的特点 6.在大肠杆菌mRNA的核糖体结合位点上，含有一个 翻译起始密码子及同16S RNA 3’末端碱基互补的序列，即 SD序列。 Shine-Dalgarno（S-D）sequence:含有一个启始密码子 和一段同核糖体16SRNA3’末端碱基互补的序列，叫ShineDalgarno（S-D）序列
第二节外源基因在原核细胞中的表达 二、外源基因在原核细胞中表达具备条件 1通过表达载体将外源基因导入宿主菌,并指导宿主菌的酶系统合 成外源蛋白。 2外源基因不能带有间隔顺序内含子),因而必须用cDNA或全化 学合成基因,而不能用基因组DNA。 3必须利用原核细胞的强启动子和SD序列等调控元件控制外源基 因的表达。 4外源基因与表达载体连接后,必须形成正确的开放阅读框架 (ORF)。 5利用宿主菌的调控系统,调节外源基因的表达,防止外源基因的 表达产物对宿主菌的毒害
第二节外源基因在原核细胞中的表达 二、外源基因在原核细胞中表达具备条件 1.通过表达载体将外源基因导入宿主菌，并指导宿主菌的酶系统合 成外源蛋白。 2.外源基因不能带有间隔顺序(内含子)，因而必须用cDNA或全化 学合成基因，而不能用基因组DNA。 3.必须利用原核细胞的强启动子和SD序列等调控元件控制外源基 因的表达。 4.外源基因与表达载体连接后，必须形成正确的开放阅读框架 (ORF)。 5.利用宿主菌的调控系统，调节外源基因的表达，防止外源基因的 表达产物对宿主菌的毒害
第二节外源基因在原核细胞中的表达 原核生物基因表达载体的组成特征 启动子 核糖体结合位点(SD序列) 终止子 选择标记基因 复制子 原核生物基因表达的受体系统 大肠杆菌受体系统、芽孢杆菌受体系统 链霉菌受体系统、蓝藻受体系统
第二节外源基因在原核细胞中的表达 原核生物基因表达载体的组成特征 启动子 核糖体结合位点(SD序列) 终止子 选择标记基因 复制子 原核生物基因表达的受体系统 大肠杆菌受体系统、芽孢杆菌受体系统 链霉菌受体系统、蓝藻受体系统