2.显微镜的使用：（1）搬移：取放或搬移显微镜时，要一手握镜臂，一手托镜座，防止碰撞。绝不可一手斜提，前后摇摆而行，因这样容易发生碰撞，使目镜和反光镜脱落损坏。（2）安放：显微镜置子自已座位前方，以便子观察与绘图。（3）调光：旋转粗调螺旋，下降载物台，转动物镜转换器，使低倍镜对准通光孔（听到转换器边缘缺刻与固定扣相接合发出的轻微咔声，说明物镜对准了镜筒和通光孔的中心），上升聚光器，找开光源和光圈，身体坐正，两眼同时静开由目镜内观察，横拉目镜座可调眼距，观察视野是否为光亮均匀的圆形，同时一手调节反光镜，使其正对外界光源，使光线射入镜筒，并调整至出现光亮均匀的圆形视野为止。（4）置片：取需观察的切片置于载物台上，注意将有盖玻片的一面向上，用夹将其固定，旋转移动标尺旋钮，使切片上有组织片的部位对准通光孔。（5）低倍镜使用：自侧面视低倍镜，小心旋转粗调螺旋，使载物台徐徐上升至镜头下端距盖玻片约0.5cm处，两眼在目镜中观察，并反方向旋转粗调螺旋，使载物台缓缓下降，直至视野中见到物像为止，再转动细调螺旋，至物像清晰。最后旋转移动标尺，观察组织切片。（6）高倍镜使用：先在低倍镜下找到需要观察的物像并移到视野的中央，旋转物镜转换器，换成高倍镜观察，同时适当旋转细调螺旋至物像清晰（7）油镜使用：高倍镜下将需观察的结构移至视野中央，移去高倍镜，下降载物台在标本玻片上滴加香柏油，转换油镜（100×），上升载物台使油镜镜头浸在香油中，观察时轻轻调节细调螺旋至物像清晰。观察完毕下降载物台，取下组织标本，用滴加二甲苯的控镜纸轻轻擦去镜头和切片上（拉纸法）的香柏油，最后用干净的擦镜纸擦去镜头上的二甲苯。（8）收藏：观察结束后，关闭显微镜电源，下降载物台，取下切片放入切片盒，旋转物镜转换器，使物镜与通光孔错开，上升载物台使物镜接近载物台（不要接触），将显微镜各部擦净，套上镜罩。3.显微镜的保养和维护：（1）显微镜应放在阴凉、干燥、无灰尘、无酸碱蒸汽的地方、套好镜罩。（2）使用时不要放置在实验台边缘，严格按操作规程进行。（3）观察新鲜材料时，要加盖玻片，防止水或其它药液沾染镜头和载物台，若沾染要立即用擦镜纸擦干，以免腐蚀损坏镜头。（4）不可随意拆卸镜头和任何零件。显微镜各光学部分沾有灰尘，禁用口吹、手抹或用普通纸张、抹布等擦试，应用擦镜纸轻轻拭净，各机械部分若沾附灰尘，先将灰尘除去，再用清洁的绸布擦干净。（5）使用过程中，若显微镜出现故障影响观察时，切勿擅自修理，应及时报告指导教师处理。四、石蜡切片技术：石蜡切片技术是组织学研究使用的最基本的标本制片方法，其基本原理和主要步骤如下：1.取材与固定【KG2>》（1）取材：从动物体取下所需的器官材料。取材的动物要健康，材6
6 2.显微镜的使用: （1）搬移：取放或搬移显微镜时，要一手握镜臂，一手托镜座，防止碰撞。绝不可一手斜 提，前后摇摆而行，因这样容易发生碰撞，使目镜和反光镜脱 （2 （3）调光：旋转粗调螺旋，下降载物台，转动物镜转换器，使低倍镜对准通光孔（听到转 换器边缘缺刻与固定扣相接合发出的轻微咔嚓声，说明物镜对准了镜筒和通光孔的中心），上升 聚光器，找开光源和光圈，身体坐正，两眼同时睁开由目镜内观察，横拉目镜座可调眼距，观 察视野是否为光亮均匀的圆形，同时一手调节反光镜，使其正对外界光源，使光线射入镜筒， （4）置片：取需观察的切片置于载物台上，注意将有盖玻片的一面向上，用夹将其固定， （5）低倍镜使用：自侧面视低倍镜，小心旋转粗调螺旋，使载物台徐徐上升至镜头下端距 盖玻片约 0.5cm 处，两眼在目镜中观察，并反方向旋转粗调螺旋，使载物台缓缓下降，直至视 野中见到物像为止，再转动细调螺旋，至物像清晰。最后旋转移动标尺，观察组织切片。 （6）高倍镜使用：先在低倍镜下找到需要观察的物像并移到视野的中央，旋转物镜转换器， （7）油镜使用：高倍镜下将需观察的结构移至视野中央，移去高倍镜，下降载物台在标本 玻片上滴加香柏油，转换油镜（100×），上升载物台使油镜镜头浸在香油中，观察时轻轻调节 细调螺旋至物像清晰。观察完毕下降载物台，取下组织标本，用滴加二甲苯的控镜纸轻轻擦去 （8）收藏：观察结束后，关闭显微镜电源，下降载物台，取下切片放入切片盒，旋转物镜 转换器，使物镜与通光孔错开，上升载物台使物镜接近载物台（不要接触），将显微镜各部擦净， 3.显微镜的保养和维护: （1 （2 （3）观察新鲜材料时，要加盖玻片，防止水或其它药液沾染镜头和载物台，若沾染要立即 （4）不可随意拆卸镜头和任何零件。显微镜各光学部分沾有灰尘，禁用口吹、手抹或用普 通纸张、抹布等擦试，应用擦镜纸轻轻拭净，各机械部分若沾附灰尘，先将灰尘除去，再用清 洁的绸布擦干净。 （5）使用过程中，若显微镜出现故障影响观察时，切勿擅自修理，应及时报告指导教师处 理。 四、石蜡切片技术： 石蜡切片技术是组织学研究使用的最基本的标本制片方法，其基本原理和主要步骤如下： 1. KG2〗（1）取材：从动物体取下所需的器官材料。取材的动物要健康，材
料愈新鲜愈好，应在致死后立即取材，防止组织细胞自溶变性，取材的器械要锋利：所取材料力求小而薄（以不超过0.5cm为宜），不能挤压和损伤。（2）固定：将所取的材料立即投入固定液中，目的是使组织蛋白迅速凝固，使细胞内的结构和成分不再发生变化，保持组织细胞与活体相似的形态结构，固定后的组织块变硬，便于进一步处理。常用的固定剂有10%甲醛液，固定时间为3一5天，固定好的组织块需在自来水中冲洗24小时，然后再进行脱水。2.脱水与透明：（1）脱水：固定后的组织块内含有的大量水分要彻底脱去，以便石蜡的浸入。常用的脱水剂为乙醇，脱水过程必须循序渐进，从低度开始，逐步升高，使组织块中的水分逐渐被乙醇所取代，脱水时间应根据组织块的大小灵活掌握，较大组织块的脱水时间要相应延长，较小的要适应缩短。具体操作：将组织块移入85%乙醇（I）：（II）各8一12小95%乙醇（I）（II）各2小时，100%乙醇（I）、（II）各1小时。因无水乙醇对组织有脆化作用，故在无水乙醇中时间要短一些。（2）透明：由于乙醇与石蜡不能相溶，故浸蜡前要对脱水后的组织块进行透明。常用透明剂有三甲苯、氯仿、苯、香柏油或冬青油等，透明剂能同乙醇和石蜡相溶，并能增强组织块的折光系数，故透明的组织块呈半透明状。使用二甲苯作透明剂的透明过程为：将脱水后的组织块放入无水乙醇与二甲苯混合液1：1中，时间可调节，在移入二甲苯中透明15一20分钟。3.浸蜡与包埋：（1）浸蜡：将透明后的组织块置于刚过熔点的熔化石蜡中浸渍，使石蜡逐渐渗入并完全置换出透明剂。过程为：先将透明的组织块移入二甲苯与石蜡混合液（1：1）中，在60℃温箱中放置30分钟，再移入熔化的石蜡（软蜡）2小时，硬蜡2小时。（2）色埋：将浸蜡后的组织块置于盛有熔化石蜡的模具中，并使之凝固成蜡块。4.切片与贴片：（1）切片：将修整后的蜡块夹在切片机的固定器内，使蜡块的被切面与刀口平行，刀和蜡块成一斜角，以右手摇动摇柄进行切片，切片厚度以5一8μm为宜，连续操作可切成蜡带，此时左手持毛笔轻轻取下蜡带，放于盒中。（2）展片：将切下的蜡片放于温水约40℃的表面，使皱褶自然舒展开来。（3）贴片：借助镊子，将蜡片贴在洁净载玻片上。贴片后，将切片置于切片架上放入温箱（40℃左右）中烘干4小时以上。5.染色与封固：（1）染色：切片染色后可增加细胞和组织中各结构间色彩的对比以便于观察。切片染色的方法很多，常用的是苏木精（hematoxglin）·伊红（eosin）染色，简称HE染色。染色的具体步骤如下：①脱蜡：将切片放入二甲苯（I）、（I）中，各置5一10分钟，溶去切片上的石蜡。②将脱蜡的切片经各级浓度乙醇（由高到低）下行至水：将从二甲苯（I）中取出的切片依次经过：二甲苯与无水乙醇混合液（1：1）无水乙醇95%乙醇85%乙醇70%乙醇各3分钟，最后在蒸馏水浸3分钟，即可染色。7
7 料愈新鲜愈好，应在致死后立即取材，防止组织细胞自溶变性，取材的器械要锋利；所取材料 力求小而薄（以不超过 0.5cm （2）固定：将所取的材料立即投入固定液中，目的是使组织蛋白迅速凝固，使细胞内的结 构和成分不再发生变化，保持组织细胞与活体相似的形态结构，固定后的组织块变硬，便于进 一步处理。常用的固定剂有 10%甲醛液，固定时间为 3—5 天，固定好的组织块需在自来水中冲 洗 24 2.脱水与透明: （1）脱水：固定后的组织块内含有的大量水分要彻底脱去，以便石蜡的浸入。常用的脱水 剂为乙醇，脱水过程必须循序渐进，从低度开始，逐步升高，使组织块中的水分逐渐被乙醇所 取代，脱水时间应根据组织块的大小灵活掌握，较大组织块的脱水时间要相应延长，较小的要 适应缩短。具体操作：将组织块移入 85%乙醇（I）.（Ⅱ）各 8—12 小 95%乙醇（I）（Ⅱ）各 2 小时，100%乙醇（I）、（Ⅱ）各 1 小时。因无水乙醇对组织有脆化作用，故在无水乙醇中时间要 （2）透明：由于乙醇与石蜡不能相溶，故浸蜡前要对脱水后的组织块进行透明。常用透明 剂有二甲苯、氯仿、苯、香柏油或冬青油等，透明剂能同乙醇和石蜡相溶，并能增强组织块的 折光系数，故透明的组织块呈半透明状。使用二甲苯作透明剂的透明过程为：将脱水后的组织 块放入无水乙醇与二甲苯混合液 1：1 中，时间可调节，在移入二甲苯中透明 15—20 3.浸蜡与包埋: （1）浸蜡：将透明后的组织块置于刚过熔点的熔化石蜡中浸渍，使石蜡逐渐渗入并完全置 换出透明剂。过程为：先将透明的组织块移入二甲苯与石蜡混合液（1：1）中，在 60℃温箱中 放置 30 分钟，再移入熔化的石蜡（软蜡）2 小时，硬蜡 2 小时。 （2 4.切片与贴片: （1）切片：将修整后的蜡块夹在切片机的固定器内，使蜡块的被切面与刀口平行，刀和蜡 块成一斜角，以右手摇动摇柄进行切片，切片厚度以 5—8μm 为宜，连续操作可切成蜡带，此 （2）展片：将切下的蜡片放于温水约 40 （3）贴片：借助镊子，将蜡片贴在洁净载玻片上。贴片后，将切片置于切片架上放入温箱 （40℃左右）中烘干 4 小时以上。 5.染色与封固: （1）染色：切片染色后可增加细胞和组织中各结构间色彩的对比以便于观察。切片染色的 方法很多，常用的是苏木精（hematoxglin）·伊红（eosin）染色，简称 HE 染色的具体步骤如下： ①脱蜡：将切片放入二甲苯（I）、（Ⅱ）中，各置 5—10 分钟，溶去切片上 ②将脱蜡的切片经各级浓度乙醇（由高到低）下行至水：将从二甲苯（Ⅱ）中取出的切片 依次经过：二甲苯与无水乙醇混合液（1：1）无水乙醇 95%乙醇 85%乙醇 70%乙醇各 3 分钟，最 后在蒸馏水浸 3
③切片由蒸馏水中转入苏木精染色液染色15一20分钟，使细胞内的嗜碱性物质着色。④用蒸馏水洗去切片上残余的染液。③0.25一0.5%盐酸酒精溶液分色数十秒钟。③放入自来水中20一30分钟，蓝化镜检。7置入70%乙醇、85%乙醇、95%乙醇中各3分钟。置入伊红染液中染色20秒钟，使细胞质中嗜酸性物质着色。依次进入95%乙醇（I）、（II）各5分钟，100%乙醇（I）、（I），各5一10分钟，以除去切片上的水份。透明：切片入无水乙醇与二甲苯混合液（1：1）再入二甲苯（I）、（II）各5分钟。（2）封固：取出切片，用干净白布拭净组织周围的二甲苯，在组织中央滴一小滴中性树胶，用镊子加盖盖玻片，在酒精灯上烤一下，赶走水气，加盖盖玻片的另一面，要倾斜地由左边盖在树胶与组织上，慢慢向下放平，以免产生气泡。切片封好后，平放于切片板上自然干燥，或置于37℃温箱中烤，待树胶干燥后，贴上标签即可用来观察由此可见，组织切片制作过程是一个连续、复杂的操作过程，其中任何一项操作发生问题，都会影响切片的质量，制作过程中必须认真细致。附：常用固定液和染液的配制：1.10%甲醛，固定液的配制：甲醛溶液100mlNaHPO, · H204g6.5gNaH,PO蒸馏水900ml2.Bouin固定液的配制：饱和苦味酸溶液75份甲醛25份冰醋酸5份由于Bouin固定液的各种成份一旦混合，若不立即使用将会失效，故Bouin固定液只能现配现用。2.苏木精染液的配制：（1）Ehrlich酸性苏木精染色法苏木素2g100ml95%乙醇溶解后加蒸馏水及甘油各100ml，钾矾3g及冰醋酸100ml，混合后呈红色，用纱布封闭瓶盖，经两周后成熟，转为暗红紫色。（2）Harris苏木精染液：甲液：苏木素0. 5g95%乙醇5. 0ml8
8 ③切片由蒸馏水中转入苏木精染色液染色 15—20 ⑤0.25—0.5% ⑥放入自来水中 20—30 ⑦置入 70%乙醇、85%乙醇、95%乙醇中各 3 ⑧置入伊红染液中染色 20 ⑨依次进入 95%乙醇（I）、（Ⅱ）各 5 分钟，100%乙醇（I）、（Ⅱ），各 5—10 分钟，以除去 ⑩透明：切片入无水乙醇与二甲苯混合液（1∶1）再入二甲苯（I）、（Ⅱ）各 5 （2）封固：取出切片，用干净白布拭净组织周围的二甲苯，在组织中央滴一小滴中性树胶， 用镊子加盖盖玻片，在酒精灯上烤一下，赶走水气，加盖盖玻片的另一面，要倾斜地由左边盖 在树胶与组织上，慢慢向下放平，以免产生气泡。切片封好后，平放于切片板上自然干燥，或 置于 37 由此可见，组织切片制作过程是一个连续、复杂的操作过程，其中任何一项操作发生问题， 都会影响切片的质量，制作过程中必须认真细致。 附：常用固定液和染液的配制: 1.10%甲醛，固定液的配制: 甲醛溶液 100ml NaHPO4·H2O 4g NaH2PO4 6.5g 蒸馏水 900ml 2.Bouin 固定液的配制: 饱和苦味酸溶液 75 份 甲醛 25 份 冰醋酸 5 份 由于 Bouin 固定液的各种成份一旦混合，若不立即使用将会失效，故 Bouin 固定液只能现 2.苏木精染液的配制: （1）Ehrlich 苏木素 2g 95%乙醇 100ml 溶解后加蒸馏水及甘油各 100ml，钾矾 3g 及冰醋酸 100ml，混合后呈红色，用纱布封闭瓶 （2）Harris 苏木精染液: 甲液：苏木素 0.5g 95%乙醇 5.0ml
乙液：硫酸铝钾（钾明矾）10g蒸馏水100ml氧化汞0. 25g冰醋酸几滴先将甲液用玻棒搅拌使苏木精溶解，再将硫酸铝钾溶于蒸馏水，并加热使之溶解，去火；迅速加入甲液，煮沸后，再去火，立即加入氧化汞后再煮沸，将此液迅速冷却后用滤纸过滤，加入几滴冰醋酸即可。此液可保存数月。3.0.5%伊红染液的配制：将0.5g伊红溶于100m195%乙醇中即可。4.0.5%盐酸酒精溶液配制：将0.5m1盐酸加入70%酒精100m1中即可。9
9 乙液：硫酸铝钾（钾明矾） 10g 蒸馏水 100ml 氧化汞 0.25g 冰醋酸 几滴 先将甲液用玻棒搅拌使苏木精溶解，再将硫酸铝钾溶于蒸馏水，并加热使之溶解，去火； 迅速加入甲液，煮沸后，再去火，立即加入氧化汞后再煮沸，将此液迅速冷却后用滤纸过滤， 3. 0.5%伊红染液的配制: 将 0.5g 伊红溶于 100ml95% 4. 0.5%盐酸酒精溶液配制: 将 0.5ml 盐酸加入 70%酒精 100ml 中即可
实验一细胞一、目的要求：1、观察和识别细胞的基本形态结构2、观察细胞器的形态特征。二、内容和方法：（一）观察切片1、细胞的基本构造一一羊脊神经节，HE染色低倍镜：找到大小不等的圆形细胞群，选择结构较完整的细胞移到视野中央高倍镜：（1）细胞膜（Cellmembrane）：可见细胞呈圆形，有清晰的界膜，呈粉红色的曲线状，即细胞膜。（2）细胞核（nucleus）：位于细胞中央，大而圆、呈兰紫色。核膜清晰，核内染色质里细粒状，核中央有一致密的圆形小体是核仁。（3）细胞质（cytoplasm）：分布于细胞核与细胞膜之间，呈粉红色细粒状在神经节细胞外围有一层棱形或不规则形的小细胞，是卫星细胞。（二）示教切片：1.高尔基复合体（GolgiComplex）一—羊脊神经节，银染低倍镜：找到大小不等，圆形的脊神经节细胞，细胞核不着色或呈透明的淡黄色，胞质内可见散在褐色结构。高倍镜：细胞核周围胞质内分布有褐色或黑褐色的网状或卷曲的小体即为高尔基复合体。2.线粒体（mitochondrion）一一羊肝脏，苏木精染色低倍镜：肝细胞多边形，染成黑兰色，细胞中央可见1一2个大而圆的细胞核，找见着色均匀、体积略大些的肝细胞。高倍镜：细胞质呈细粒状，胞质内分布有许多短线状或颗粒状兰黑色小体即线粒体。三、实验作业：1.绘制脊神经节神经细胞的高倍图，2.细胞器模式图注字。10
10 实验一 细胞 一、目的要求: 1 2、观察细胞器的形态特征。 二、内容和方法: 1、细胞的基本构造——羊脊神经节，HE 染色 （1）细胞膜（Cell membrane）：可见细胞呈圆形，有清晰的界膜，呈粉红色的曲线状，即 （2）细胞核（nucleus）：位于细胞中央，大而圆、呈兰紫色。核膜清晰，核内染色质里细 （3）细胞质(cytoplasm ) （二）示教切片: 1. 高尔基复合体（Golgi Complex）—— 低倍镜：找到大小不等，圆形的脊神经节细胞，细胞核不着色或呈透明的淡黄色，胞质内 高倍镜：细胞核周围胞质内分布有褐色或黑褐色的网状或卷曲的小体即为高尔基复合体。 2.线粒体（mitochondrion）—— 低倍镜：肝细胞多边形，染成黑兰色，细胞中央可见 1—2 个大而圆的细胞核，找见着色均 高倍镜：细胞质呈细粒状，胞质内分布有许多短线状或颗粒状兰黑色小体即线粒体。 三、实验作业: 1. 2.细胞器模式图注字