·若在模板mRNA中插入或删除一个碱基，会改变该密码子以后的全部 氨基酸序列。若同时对模板进行插入和删除试验，保证后续密码子序 列不变，翻译得到的蛋白质序列就保持不变（除了发生突变的那个密 码子所代表的氨基酸之外)。 mRNA 5-G U A G CC U A C GG A U-3 (+ 插入 G U AG CC U C A C GG A U- (- 剧除 -GU A CC U A C GG A U- (+ (-) 用核苷酸的插入或删 除实验证明mRNA模板 司时进行插入和别除一一 G UAA G C C A C GG A U 上每三个核苷酸组成 读码框恢复 一个密码子 ()()) 一次别去5.GUA↓↓↓UAC GGA U.3 读码框不变 对烟草坏死卫星病毒的研究发现，其外壳蛋白亚基由400个氨基酸组成，而相应 的RNA片段长约1200个核苷酸，与假设的密码三联子体系正好相吻合。 11
11 • 若在模板mRNA中插入或删除一个碱基，会改变该密码子以后的全部 氨基酸序列。若同时对模板进行插入和删除试验，保证后续密码子序 列不变，翻译得到的蛋白质序列就保持不变（除了发生突变的那个密 码子所代表的氨基酸之外）。 用核苷酸的插入或删 除实验证明mRNA模板 上每三个核苷酸组成 一个密码子 • 对烟草坏死卫星病毒的研究发现，其外壳蛋白亚基由400个氨基酸组成，而相应 的RNA片段长约1200个核苷酸，与假设的密码三联子体系正好相吻合
1.以均聚物、随机共聚物和特定序列的共聚物为模 板指导多肽的合成。 ·Nirenberg?把多聚(U)作为模板加入到无细胞体系时 发现，新合成的多肽链是多聚苯丙氨酸，确定UUU代 表苯丙氨酸（Phe) 。 以多聚(C)及多聚（A)做模板得到的分别是多聚脯 氨酸和多聚赖氨酸。 。 以多聚UG为模板合成的是多聚Cys和Val,因为多聚 (UG)中含Cys和Val的密码： 5'.UGU GUG UGU GUG UGU GUG.3 。 无论读码从U开始还是从G开始，都只能有UGU(Cys) 及GUG(Val)两种密码子。 12
12 1.以均聚物、随机共聚物和特定序列的共聚物为模 板指导多肽的合成。 • Nirenberg把多聚（U）作为模板加入到无细胞体系时 发现，新合成的多肽链是多聚苯丙氨酸，确定UUU代 表苯丙氨酸（Phe）。 • 以多聚（C）及多聚（A）做模板得到的分别是多聚脯 氨酸和多聚赖氨酸。 • 以多聚UG为模板合成的是多聚Cys和Val，因为多聚 （UG）中含Cys和Val的密码： 5'.UGU GUG UGU GUG UGU GUG.3‘ • 无论读码从U开始还是从G开始，都只能有UGU（Cys） 及GUG（Val）两种密码子
1.以均聚物、随机共聚物和特定序列的共聚物为模 板指导多肽的合成。 Nirenberg及Ochoa等又用各种特定序列如只含A、C的共聚核苷 酸作模板，任意排列时可出现23=8种三联子，即CCC、CCA、 CAC、ACC、CAA、ACA、AAC、AAA,获得由Asn、His、 Pro、Gln、Thr、Lys等6种氨基酸组成的多肽。 。 以多聚（UUC)为模板，可能有3种起读方式： 5'.UUCUUC UUC UUC UUC.3'5'.UCUUCU UCUUCUUCU.3'5'.CUU CUUCUUCUU CUU.3' 产生UUC(Phe)、UCU(Ser)或CUU(Leu),得到多聚苯 丙氨酸、多聚丝氨酸或多聚亮氨酸。因此，UUC、UCU、CUU 分别是苯丙氨、丝氨酸及亮氨酸的密码子。 13
13 1.以均聚物、随机共聚物和特定序列的共聚物为模 板指导多肽的合成。 • Nirenberg及Ochoa等又用各种特定序列如只含A、C的共聚核苷 酸作模板，任意排列时可出现2 3=8种三联子，即CCC、CCA、 CAC、ACC、CAA、ACA、AAC、AAA，获得由Asn、His、 Pro、Gln、Thr、Lys等6种氨基酸组成的多肽。 • 以多聚（UUC）为模板，可能有3种起读方式： • 5'.UUC UUC UUC UUC UUC.3'或 5'.UCU UCU UCU UCU UCU.3'或 5'.CUU CUU CUU CUU CUU.3' 产生UUC（Phe）、UCU（Ser）或CUU（Leu），得到多聚苯 丙氨酸、多聚丝氨酸或多聚亮氨酸。因此，UUC、UCU、CUU 分别是苯丙氨、丝氨酸及亮氨酸的密码子
。当然，以多聚三核苷酸为模板，也可能只合成2种 均聚多肽， 。如：5.GUA GUAGUAGUA GUA.3或 5'.UAG UAGUAGUAG UAG.3' 5'.AGU AGU AGU AGU AGU.3' ·由第二种读码方式产生的密码子UAG是终止密码， 不编码任何氨基酸，因此，只产生2种密码子 GUA(Val)或AGU(Ser),合成多聚缬氨酸或 多聚丝氨酸。 14
14 • 当然，以多聚三核苷酸为模板，也可能只合成2种 均聚多肽， • 如：5'.GUA GUA GUA GUA GUA.3'或 5'.UAG UAG UAG UAG UAG.3'或 5'.AGU AGU AGU AGU AGU.3' • 由第二种读码方式产生的密码子UAG是终止密码， 不编码任何氨基酸，因此，只产生2种密码子 GUA（Val）或AGU（Ser），合成多聚缬氨酸或 多聚丝氨酸
2.核糖体结合技术 以人工合成的三核苷酸如 UUU、UCU、UGU等为模 Aminoacyl 板，在含核糖体、AA RNAS Ribosomes tRNA的适当离子强度的反 Trinucleotide 应液中保温后通过硝酸纤 维素滤膜。 ·游离的AA-tRNA因相对分 子质量小能自由过膜，与 模板对应的AA-tRNA能与 核糖体结合，体积超过膜 Trinucleotide and all tRNAs Ribosomes stick to filter Complex of ribosome,UUU, pass through filter and Phe-tRNA sticks to filter 上的微孔而被滞留。 15
15 2. 核糖体结合技术 • 以人工合成的三核苷酸如 UUU、UCU、UGU等为模 板，在含核糖体、AAtRNA的适当离子强度的反 应液中保温后通过硝酸纤 维素滤膜。 • 游离的AA-tRNA因相对分 子质量小能自由过膜，与 模板对应的AA-tRNA能与 核糖体结合，体积超过膜 上的微孔而被滞留