内蒙古农业大学自编教材《农药生物测定实验指导》实验二杀虫剂触杀毒力测定微量点滴法一。实验目的：1、学习和掌握触杀毒力精密测定技术一微量点滴法。2、学习农药生物测定数据的处理方法一绘图法，最小二乘法和机率值分析法，求出致死中量（LDso）和致死中浓度（LCso）。3、明确杀虫剂杀虫毒力表示方法的意义和应用。二，实验原理：在进行农药杀虫作用方式的实验后，了解某些化合物具有触杀作用的基础上，为了明确其触杀强度以及比较几种药剂的触杀毒力大小时，需采用精密触杀毒力测定技术来求出它的致死中量（或致死中浓度）。目前许多有机合成杀虫剂大多数都具有触杀作用，因而触杀毒力测定具有一定的重要性，测定方法虽然很多，但基本上可分为两大类：一是全部施药法：如定量喷粉法、定量喷雾法和用一定浓度药液浸渍法等。其优点是操作方便，比较符合实际施药情况。但药剂容易被试虫吞食产生胃毒作用。二是局部施药法：是自前比较精确的触杀毒力测定方法。一般包括药膜法和微量点滴法。微量点滴法是将一定浓度和容积的药液点滴在试虫体的一定部位，溶剂挥发后，药剂即可自体壁进入体内发挥触杀作用，药剂不致被试虫吞食。本实验采用微量点滴法来测定农药的触杀毒力作用。三．主要仪器及试材：1、试虫：棉铃虫（3龄）2、药剂：氯氰菊酯等3、实验仪器及用具：养虫室、毛细管点滴器、分析天平、滤纸、通针、培养皿（5cm）、容量瓶、具塞小试管及试管架、镊子、移液管、丙酮等。四．实验方法与步骤：（一）试验前的准备工作1、试虫的移取：选取3龄棉铃虫，大小均匀一致的个体，放在垫有吸水纸的培养皿内，每皿10头，为一个处理。每个处理重复三次，分别在分析天平上称重，求出平均体重，备用。2、称药配药：将试药小心地移入洗净干燥的称量瓶中，在分析天平上准确称取一定量试药，放入小烧杯内，加少量丙酮溶解，再移入容量瓶中，加丙酮定容。摇匀即为母液，备用。3、毛细管点滴器的质量检定：检查毛细管微量点滴器是否通畅，并练习使用。（二）预备试验3
内蒙古农业大学自编教材《农药生物测定实验指导》 3 实验二 杀虫剂触杀毒力测定 ——微量点滴法 一．实验目的： 1、学习和掌握触杀毒力精密测定技术—微量点滴法。 2、学习农药生物测定数据的处理方法—绘图法，最小二乘法和机率值分析法，求出致死中 量（LD50）和致死中浓度（LC50）。 3、明确杀虫剂杀虫毒力表示方法的意义和应用。 二．实验原理： 在进行农药杀虫作用方式的实验后，了解某些化合物具有触杀作用的基础上，为了明确 其触杀强度以及比较几种药剂的触杀毒力大小时，需采用精密触杀毒力测定技术来求出它的 致死中量（或致死中浓度）。目前许多有机合成杀虫剂大多数都具有触杀作用，因而触杀毒 力测定具有一定的重要性，测定方法虽然很多，但基本上可分为两大类：一是全部施药法： 如定量喷粉法、定量喷雾法和用一定浓度药液浸渍法等。其优点是操作方便，比较符合实际 施药情况。但药剂容易被试虫吞食产生胃毒作用。二是局部施药法：是目前比较精确的触杀 毒力测定方法。一般包括药膜法和微量点滴法。微量点滴法是将一定浓度和容积的药液点滴 在试虫体的一定部位，溶剂挥发后，药剂即可自体壁进入体内发挥触杀作用，药剂不致被试 虫吞食。本实验采用微量点滴法来测定农药的触杀毒力作用。 三．主要仪器及试材： 1、试虫：棉铃虫（3 龄） 2、药剂：氯氰菊酯等 3、实验仪器及用具：养虫室、毛细管点滴器、分析天平、滤纸、通针、培养皿（5cm）、容 量瓶、具塞小试管及试管架、镊子、移液管、丙酮等。 四．实验方法与步骤： （一）试验前的准备工作 1、试虫的移取： 选取 3 龄棉铃虫，大小均匀一致的个体，放在垫有吸水纸的培养皿内，每皿 10 头，为 一个处理。每个处理重复三次，分别在分析天平上称重，求出平均体重，备用。 2、称药配药： 将试药小心地移入洗净干燥的称量瓶中，在分析天平上准确称取一定量试药，放入小烧 杯内，加少量丙酮溶解，再移入容量瓶中，加丙酮定容。摇匀即为母液，备用。 3、毛细管点滴器的质量检定： 检查毛细管微量点滴器是否通畅，并练习使用。 （二）预备试验
内蒙古农业大学自编教材《农药生物测定实验指导》为了确定合适的施药浓度（或剂量）（要求试虫死亡率分布在20-80%范围内），在正式试验前，必须先用几个浓度或剂量（范围较大）进行试点滴，根据死亡结果，确定最合适的点滴浓度，预备试验所用试虫可以减少一半左右，（三）正式试验步骤1、药液的配制：根据预备试验结果，将容量瓶中的母液按等比级数用丙酮稀释成5个浓度，如1.6、0.8、0.4、0.2、0.1ug/u1等。每浓度5ml，装入具塞小试管。并以丙酮为对照。2、称重：将选好的试虫，在分析天平上称重，每个浓度为一个处理，每个处理10头试虫，重复三次，将每10头试虫放在垫有吸水纸的干净培养血内，待处理。3、点滴：使用毛细管点滴器对棉铃虫（3龄）幼虫进行触杀毒力测定。首先进行预备练习，以毛细管点滴器吸丙酮点滴在滤纸上，反复多次，以点滴的大小均匀一致，每次均有为熟练。然后点滴虫体，先对照，再从低浓度到高浓度，每个浓度点滴虫体的中胸背部，每虫一滴，每浓度20头，重复三次。点滴药液量根据试虫大小确定，一般以试虫接受药液不从体壁上流失为宜。棉铃虫3龄幼虫，点滴量为0.3-0.5μ1，各处理试虫的点药量应一致。4、培养：处理完毕后，将处理过的试虫置于27℃的环境中，饲喂新鲜饲料，24小时，48小时后检查死虫数，以物触其虫体无任何反应者为死亡。五：实验注意事项：1、目标试虫的选择：应选用具有一定的代表性及经济价值，耐药性较强、生长健壮、自然死亡率底，虫龄虫体大小一致，最好采用人工饲养的试虫。2、环境条件的选择：温度在20-28℃，相对湿度在60%-80%，通气良好。3、处理设计：每处理需试虫15-30头，重复三次，每次试验均要设空白对照，施药时要注意各处理用药等量均匀一致。4、实验中对照（CK）的死亡率最好小于10%，大于20%时实验必须重做。5、药液的配制中，要求不少于5个浓度梯度，各处理的死亡率在20-80%之间为最好。6、点滴操作过程中，点滴力度适宜，应避免力度过大而导致虫体损伤。并随时检查点滴器是否通畅。六：实验结果处理：观察死活虫数，计算死亡率及校正死亡率，并将结果记入表中。死虫数死亡率：x100%总虫数校正死亡率_处理死亡率－对照死亡率、×100%1-对照死亡率如自然死亡率超过20%，说明试虫群体生活力差或试验方法有问题，应重做。为了求得供试药剂的致死中量、需要根据用药浓度及体积求出每头试虫的受药量，并换算出单位虫体重的受药量。4
内蒙古农业大学自编教材《农药生物测定实验指导》 4 为了确定合适的施药浓度（或剂量）（要求试虫死亡率分布在 20-80%范围内），在正式 试验前，必须先用几个浓度或剂量（范围较大）进行试点滴，根据死亡结果，确定最合适的 点滴浓度，预备试验所用试虫可以减少一半左右。 （三）正式试验步骤 1、药液的配制： 根据预备试验结果，将容量瓶中的母液按等比级数用丙酮稀释成 5 个浓度，如 1.6、0.8、 0.4、0.2、0.1μg/μl 等。每浓度 5ml，装入具塞小试管。并以丙酮为对照。 2、称重： 将选好的试虫，在分析天平上称重，每个浓度为一个处理，每个处理 10 头试虫，重复 三次，将每 10 头试虫放在垫有吸水纸的干净培养皿内，待处理。 3、点滴： 使用毛细管点滴器对棉铃虫（3 龄）幼虫进行触杀毒力测定。首先进行预备练习，以毛 细管点滴器吸丙酮点滴在滤纸上，反复多次，以点滴的大小均匀一致，每次均有为熟练。然 后点滴虫体，先对照，再从低浓度到高浓度，每个浓度点滴虫体的中胸背部，每虫一滴，每 浓度 20 头，重复三次。点滴药液量根据试虫大小确定，一般以试虫接受药液不从体壁上流 失为宜。棉铃虫 3 龄幼虫，点滴量为 0.3-0.5μl，各处理试虫的点药量应一致。 4、培养： 处理完毕后，将处理过的试虫置于 27℃的环境中，饲喂新鲜饲料，24 小时，48 小时后 检查死虫数，以物触其虫体无任何反应者为死亡。 五．实验注意事项： 1、目标试虫的选择：应选用具有一定的代表性及经济价值，耐药性较强、生长健壮、自然 死亡率底，虫龄虫体大小一致，最好采用人工饲养的试虫。 2、环境条件的选择：温度在 20-28℃，相对湿度在 60%-80%，通气良好。 3、处理设计：每处理需试虫 15-30 头，重复三次，每次试验均要设空白对照，施药时要注 意各处理用药等量均匀一致。 4、实验中对照（CK）的死亡率最好小于 10%，大于 20%时实验必须重做。 5、药液的配制中，要求不少于 5 个浓度梯度，各处理的死亡率在 20-80%之间为最好。 6、点滴操作过程中，点滴力度适宜，应避免力度过大而导致虫体损伤。并随时检查点滴器 是否通畅。 六．实验结果处理： 观察死活虫数，计算死亡率及校正死亡率，并将结果记入表中。 100% 1 100% 对照死亡率 处理死亡率 对照死亡率 校正死亡率 总虫数 死虫数 死亡率 如自然死亡率超过 20%，说明试虫群体生活力差或试验方法有问题，应重做。 为了求得供试药剂的致死中量、需要根据用药浓度及体积求出每头试虫的受药量，并换 算出单位虫体重的受药量
内蒙古农业大学自编教材《农药生物测定实验指导》每头试虫受药量（微克）=每微升药液中含药剂微克数X每头试虫受药微升数每头试虫受药量（微克）单位虫体重受药量（微克药量/克虫体重）：试虫平均体重（克）根据测定结果，以单位体重受药量（或每头受药量）的对数值为x，校正死亡率换算成机率值为y，求毒力回归方程y=a+bx，并求致死中量（LDso）值，且进行可靠性检验。七．思考题：1、求出药量对数一死亡率机率值毒力回归方程，求出供试药剂的致死中量。2、为什么要以致死中量或致死中浓度作为比较药剂毒力的标准。3、在实验过程中哪些地方容易出误差，如何克服。表3杀虫剂精密毒力测定原始数据记录表浓每微升药试虫每头试虫每头试虫校正供试度平均死亡液中含有单位虫体重接受药量死亡接受药液接受药量药剂(%)药剂微克体重率(%)（微克药量/克虫体重）微升数(微克)率(%)数(克)对照表 4杀虫剂精密毒力测定数据换算表单位虫体重接受药量或供试药量对校正死亡死亡率毒力回归相关每头试虫受药量LDso药剂系数数值率（%）方程机率值(微克药量/克虫体重）4
内蒙古农业大学自编教材《农药生物测定实验指导》 5 每头试虫受药量（微克）=每微升药液中含药剂微克数×每头试虫受药微升数 / 每头试虫受药量（微克） 单位虫体重受药量（微克药量 克虫体重） 试虫平均体重（克） 根据测定结果，以单位体重受药量（或每头受药量）的对数值为 x，校正死亡率换算成 机率值为 y，求毒力回归方程 y=a+bx，并求致死中量（LD50）值，且进行可靠性检验。 七．思考题： 1、求出药量对数—死亡率机率值毒力回归方程，求出供试药剂的致死中量。 2、为什么要以致死中量或致死中浓度作为比较药剂毒力的标准。 3、在实验过程中哪些地方容易出误差，如何克服。 表 3 杀虫剂精密毒力测定原始数据记录表 供试 药剂 浓 度 (%) 每微升药 液中含有 药剂微克 数 每头试虫 接受药液 微升数 每头试虫 接受药量 (微克) 试虫 平均 体重 (克) 单位虫体重接受药量 (微克药量/克虫体重) 死亡 率（%） 校正 死亡 率（%） 对照 表 4 杀虫剂精密毒力测定数据换算表 供试 药剂 单位虫体重接受药量或 每头试虫受药量 (微克药量/克虫体重) 药量对 数值 校正死亡 率（%） 死亡率 机率值 毒力回归 方程 相关 系数 LD50
内蒙古农业大学自编教材《农药生物测定实验指导》实验二杀虫剂胃毒毒力测定一。实验目的：1、学习和掌握胃毒毒力测定技术。2、学习农药生物测定数据的处理方法一绘图法，最小二乘法和机率值分析法，求出致死中量（LD50）和致死中浓度（LC50）。3、明确杀虫剂杀虫毒力表示方法的意义和应用。二．实验原理：胃毒作用方式的测定是用来判断毒剂通过昆虫取食进入消化道的毒杀能力，测定方法是把药加入饵料中饲喂昆虫，或将药液注入昆虫的口腔内，迫使全部吞食，较理想的方法是夹毒叶片法。其基本原理是在两片叶中夹入均匀分散的药剂，制成夹毒叶片饲喂昆虫，药剂随昆虫取食进入消化道而发生毒杀作用。三.主要仪器及试材：1、试虫：棉铃虫幼虫（3龄）2、药剂：吡虫啉等3、实验仪器及用具：养虫室、淀粉糊、分析天平、滤纸、通针、培养皿（5cm）、容量瓶、具塞小试管及试管架、镊子、剪刀、移液管、丙酮等。四实验方法与步骤：1、药剂的配制：使用丙酮，将药剂分别配制成1000ug/ml、100μg/ml、10μg/ml三个浓度，每浓度5ml，装入具塞小试管。2、将菜叶剪成直径2cm的小片若干张，用微量注射器将丙酮药液定量（10ul）点滴在叶片上，待丙酮挥发后，用淀粉糊涂在无药的叶片上，用镊子移于带药的叶片上，将上下两张叶片粘合制成夹毒叶片，饲喂试虫，另喂无毒叶片为对照，每浓度处理试虫20头，重复三次。3、培养：处理完毕后，将处理过的试虫置于27℃的环境中，饲喂新鲜饲料，24小时，48小时后检查死虫数，以物触其虫体无任何反应者为死亡。6
内蒙古农业大学自编教材《农药生物测定实验指导》 6 实验二 杀虫剂胃毒毒力测定 一．实验目的： 1、 学习和掌握胃毒毒力测定技术。 2、 学习农药生物测定数据的处理方法—绘图法，最小二乘法和机率值分析法，求出致 死中量（LD50）和致死中浓度（LC50）。 3、 明确杀虫剂杀虫毒力表示方法的意义和应用。 二．实验原理： 胃毒作用方式的测定是用来判断毒剂通过昆虫取食进入消化道的毒杀能力，测定方法是 把药加入饵料中饲喂昆虫，或将药液注入昆虫的口腔内，迫使全部吞食，较理想的方法是夹 毒叶片法。其基本原理是在两片叶中夹入均匀分散的药剂，制成夹毒叶片饲喂昆虫，药剂随 昆虫取食进入消化道而发生毒杀作用。 三．主要仪器及试材： 1、 试虫：棉铃虫幼虫（3 龄） 2、 药剂：吡虫啉等 3、 实验仪器及用具：养虫室、淀粉糊、分析天平、滤纸、通针、培养皿（5cm）、容 量瓶、具塞小试管及试管架、镊子、剪刀、移液管、丙酮等。 四．实验方法与步骤： 1、 药剂的配制：使用丙酮，将药剂分别配制成 1000μg/ml、100μg/ml、10μg/ml 三个 浓度，每浓度 5ml，装入具塞小试管。 2、 将菜叶剪成直径 2cm 的小片若干张，用微量注射器将丙酮药液定量（10ul）点滴在 叶片上，待丙酮挥发后，用淀粉糊涂在无药的叶片上，用镊子移于带药的叶片上， 将上下两张叶片粘合制成夹毒叶片，饲喂试虫，另喂无毒叶片为对照，每浓度处理 试虫 20 头，重复三次。 3、 培养：处理完毕后，将处理过的试虫置于 27℃的环境中，饲喂新鲜饲料，24 小时， 48 小时后检查死虫数，以物触其虫体无任何反应者为死亡
内蒙古农业大学自编教材《农药生物测定实验指导》五．验结果处理：观察死活虫数，计算死亡率及校正死亡率，并将结果记入表中。死虫数死亡率：×100%总虫数处理死亡率－对照死亡率×100%校正死亡率=1-对照死亡率如自然死亡率超过20%，说明试虫群体生活力差或试验方法有问题，应重做。为了求得供试药剂的致死中量、需要根据用药浓度及体积求出每头试虫的受药量，并换算出单位虫体重的受药量。每头试虫受药量（微克）=每微升药液中含药剂微克数×每头试虫受药微升数根据测定结果，在Excel中进行数据处理，以单位体重受药量（或每头受药量）的对数值为x，校正死亡率换算成机率值为y，求毒力回归方程y=a+bx，并求致死中量（LD50）值，且进行可靠性检验。表 1毒杀作用方式实验结果记载表处理24小时试验药剂重复供试虫数浓度(或剂量)死虫数死亡率(%)校正死亡率(%)7
内蒙古农业大学自编教材《农药生物测定实验指导》 7 五．验结果处理： 观察死活虫数，计算死亡率及校正死亡率，并将结果记入表中。 如自然死亡率超过 20%，说明试虫群体生活力差或试验方法有问题，应重做。 为了求得供试药剂的致死中量、需要根据用药浓度及体积求出每头试虫的受药量，并换 算出单位虫体重的受药量。 每头试虫受药量（微克）=每微升药液中含药剂微克数×每头试虫受药微升数 根据测定结果，在 Excel 中进行数据处理，以单位体重受药量（或每头受药量）的对数 值为 x，校正死亡率换算成机率值为 y，求毒力回归方程 y=a+bx，并求致死中量（LD50） 值，且进行可靠性检验。 表 1 毒杀作用方式实验结果记载表 试验药剂 浓度(或剂量) 重复 供试虫数 处理 24 小时 死虫数 死亡率(%) 校正死亡率(%) 100% 1 对照死亡率 处理死亡率 对照死亡率 校正死亡率 100% 总虫数 死虫数 死亡率