实验八千热灭菌 一、目的要求 1.了解干热灭菌的原理和应用范围。 2.学习干热灭菌的操作技术。 二、基本原理 干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的日的。细胞内的蛋 白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质 凝周就越快，反之含水量越少，凝周缓慢。因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度要高 (160~170℃)，时间要长(1~2h),但干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包器皿的 纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。 】电烘箱的外观结构 地喜计排款得有生椒系黄不板7格腰 温度计： 指示灯：7.加热开关：8温度控制阀 三、实验材料 培养皿、试管、吸管、电烘箱等。 四、实验方法与步骤 1.装入待灭菌物品
实验八 干热灭菌 一、目的要求 1．了解干热灭菌的原理和应用范围。 2．学习干热灭菌的操作技术。 二、基本原理 干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。细胞内的蛋 白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质 凝固就越快，反之含水量越少，凝固缓慢。因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度要高 （160～170℃），时间要长（1～2h），但干热灭菌温度不能超过 180℃，否则，包器皿的 纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。 三、实验材料 培养皿、试管、吸管、电烘箱等。 四、实验方法与步骤 1．装入待灭菌物品 图 8-1 电烘箱的外观结构（A.外观 B.结构） 1. 温度计；2 排气阀；3.箱体；4.控温器旋钮；5.箱门；6.指示灯；7.加热开关；8.温度控制阀 9.控制室；10.侧门；11 工作室；12 保温层；13 电热器；14 散热板；15 隔板
将包好的待灭茵物品（培养皿、试管，吸管等）放入电烘箱内，关好箱门。物品不要摆 得太挤，以免妨空气流通，灭菌物品不要接电烘箱内壁的铁板，以防包装纸烤焦起火。 2.升温 接通电源，拨动开关，打开电烘箱挂气孔，旋动恒温调节器至绿灯亮，让温度逐渐上升。 当温度升至100℃时，关闭排气孔。在升温过程中，如果红灯熄灭，绿灯亮，表示箱内停止 加温，此时如果还未达到所需的160一170℃温度，则需转动调节器使红灯再亮，如此反复 调节，直至达到所需温度。 3.恒温 当温度升达到160~170℃时，恒温调节器会自动控制调节温度，保持此温度2h。 干热灭菌过程严防恒温调节的自动控制失灵而造成安全事故。 4.降温 切断电源、自然降温 5.开箱取物 待电烘箱内温度降到70℃以下后，打开箱门，取出灭菌物品。电烘箱内温度末降到70 ℃，切勿自行打开箱门以免骤然降温导致玻璃器皿炸裂。 五、思考题 1.在干热灭南操作过程中应注意哪些问题，为什么？ 2.为什么干热火茵比湿热灭菌所需要的温度要高，时间要长？请设计干热灭菌和湿热灭茵效 果比较实验方案
将包好的待灭菌物品（培养皿、试管，吸管等）放入电烘箱内，关好箱门。物品不要摆 得太挤，以免妨碍空气流通，灭菌物品不要接触电烘箱内壁的铁板，以防包装纸烤焦起火。 2．升温 接通电源，拨动开关，打开电烘箱排气孔，旋动恒温调节器至绿灯亮，让温度逐渐上升。 当温度升至 100℃时，关闭排气孔。在升温过程中，如果红灯熄灭，绿灯亮，表示箱内停止 加温，此时如果还未达到所需的 160—170℃温度，则需转动调节器使红灯再亮，如此反复 调节，直至达到所需温度。 3．恒温 当温度升达到 160～170℃时，恒温调节器会自动控制调节温度，保持此温度 2h。 干热灭菌过程严防恒温调节的自动控制失灵而造成安全事故。 4．降温 切断电源、自然降温。 5．开箱取物 待电烘箱内温度降到 70℃以下后，打开箱门，取出灭菌物品。电烘箱内温度末降到 70 ℃，切勿自行打开箱门以免骤然降温导致玻璃器皿炸裂。 五、思考题 l．在干热灭菌操作过程中应注意哪些问题，为什么? 2．为什么干热火菌比湿热灭菌所需要的温度要高，时间要长?请设计干热灭菌和湿热灭菌效 果比较实验方案
实验九高压蒸汽灭菌 一、目的要求 1.了解高压蒸汽灭茵的基本原理及应用范围。 2.学习高压蒸汽灭茵的操作方法。 二、基本原理 高压蔡汽灭菌是将待灭茵的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔 套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急刷地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气 阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点增高，得到 高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝因变性而达到灭菌的目的 在同一温度下，湿热的杀茵效力比干热大。其原因有三：一是湿热中细菌菌体吸收水分， 蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低，二是湿热的穿透力比干热大， 三是湿热的蒸汽有潜热存在。1g水在100℃时，由气态变为液态时可放出2.26kJ(千焦)的 热量。这种潜热，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力。 压力表一 31 排气阀 温度计偶O☐了三 通风口 燕气供应阀日 图9-2手提式灭茵锅 1.安全阀：2压力 4软管：5.紧固 图91卧式灭菌锅 螺栓：6.灭荫桶：7筛架：8.水 表91蛋白质含水量与凝固所需温度的关系 卵白蛋白含水量/% 30分钟内凝固所需温度/℃ 56 780
实验九 高压蒸汽灭菌 一、目的要求 1．了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围。 2．学习高压蒸汽灭菌的操作方法。 二、基本原理 高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔 套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气 阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点增高，得到 高于 100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的 在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大。其原因有三：一是湿热中细菌菌体吸收水分， 蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低，二是湿热的穿透力比干热大， 三是湿热的蒸汽有潜热存在。1g 水在 100℃时，由气态变为液态时可放出 2.26kJ(千焦)的 热量。这种潜热，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力。 表 9-1 蛋白质含水量与凝固所需温度的关系 卵白蛋白含水量/% 30 分钟内凝固所需温度/℃ 50 56 25 74～80 18 80～90 6 145 图 9-1 卧式灭菌锅 图 9-2 手提式灭菌锅 1.安全阀；2.压力表；3 放气阀；4.软管；5.紧固 螺栓；6.灭菌桶；7.筛架；8.水
0 160-170 在使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要，因为空气的 膨胀压大于水蒸汽的膨胀压，所以，当水蒸汽中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸汽的 温度低于饱和蒸汽的温度。 一般培养基用0.1Da,121.5℃，15-30min可达到彻底灭菌的目的。灭南的温度及维持 的时间随灭菌物品的性质和容量等具体情况而有所改变。例如含糖培养基用0.06Ma (8Ib/i或0.59kg/cm)112.6℃灭前，然后以无菌操作手续加入灭菌的糖溶液。又如盛于 试管内的培养基以0.1Mpa,12L.5℃灭南20min即可，而盛于大瓶内的培养基最好以0.1Mpa 121℃灭菌30min。 三、实验材料 牛肉音蛋白胨培养基，培养皿(6套一包)，手提式高压蒸汽灭菌锅等。 四、实验方法与步骤 1.首先将内层锅取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。 切勿忘记加水，同时水量不可过少，以防灭菌铜烧干而引起炸裂事故。 2.放回内层锅，并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤，以免防碍蒸汽流通而影响灭菌效 果。三角烧瓶与试管口端均不要与锅壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。 3.加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对 的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。 4.用电炉或煤气加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全 排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加到逐渐上升。当锅内压力升到所需压力 时，控制热源，维持压力至所需时间。本实验用0.1Mpa,12L.5℃，20min灭菌。 灭菌的主要因素是温度而不是压力，因此锅内冷空气必须完全排尽后，才能关上排气阀，维持所需压 力。 5.灭菌所需时间到后，切断电源或关闭煤气，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力 降至“0”时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。 压力一定要降到“0”时，才能打开样气阀，开盖取物。否则就会因钢内压力夹然下降，使容器内的 培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染，甚至灼伤操作者。 6.将取出的灭菌培养基，需摆斜面的则摆成斜面，然后放入37℃温箱培养24h,经检查若 无杂菌生长，即可待用。 五、实验报告
0 160～170 在使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要，因为空气的 膨胀压大于水蒸汽的膨胀压，所以，当水蒸汽中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸汽的 温度低于饱和蒸汽的温度。 一般培养基用 0.1Mpa，121.5℃,15～30min 可达到彻底灭菌的目的。灭菌的温度及维持 的时间随灭菌物品的性质和容量等具体情况而有所改变。例如含糖培养基用 0.06Mpa （8Ib/in2 或 0.59kg/cm2 ）112.6℃灭菌，然后以无菌操作手续加入灭菌的糖溶液。又如盛于 试管内的培养基以 0.1Mpa,121.5℃灭菌 20min 即可，而盛于大瓶内的培养基最好以 0.1Mpa， 121℃灭菌 30min。 三、实验材料 牛肉膏蛋白胨培养基，培养皿(6 套一包)，手提式高压蒸汽灭菌锅等。 四、实验方法与步骤 1．首先将内层锅取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。 切勿忘记加水，同时水量不可过少，以防灭菌锅烧干而引起炸裂事故。 2．放回内层锅，并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤，以免防碍蒸汽流通而影响灭菌效 果。三角烧瓶与试管口端均不要与锅壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。 3．加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对 的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。 4．用电炉或煤气加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全 排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加到逐渐上升。当锅内压力升到所需压力 时，控制热源，维持压力至所需时间。本实验用 0.1Mpa，121.5℃，20min 灭菌。 灭菌的主要因素是温度而不是压力。因此锅内冷空气必须完全排尽后，才能关上排气阀，维持所需压 力。 5．灭菌所需时间到后，切断电源或关闭煤气，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力 降至“0”时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。 压力一定要降到“0”时，才能打开排气阀，开盖取物。否则就会因锅内压力突然下降，使容器内的 培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染，甚至灼伤操作者。 6．将取出的灭菌培养基，需摆斜面的则摆成斜面，然后放入 37℃温箱培养 24h，经检查若 无杂菌生长，即可待用。 五、实验报告
检查培养基灭菌是否彻底。 六、思考题 1.高压蒸汽灭南开始之前，为什么要将锅内冷空气排尽？灭菌完毕后，为什么待压力降低“0” 时才能打开排气阀，开盖取物？ 2。在使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时，怎样杜绝一切不安全的因素？ 3.灭菌在微生物实验操作中有何重要意义？ 4.黑曲霉的孢子与芽孢杆菌的孢子对热的抗性哪个最强？为什么？
检查培养基灭菌是否彻底。 六、思考题 1. 高压蒸汽灭菌开始之前，为什么要将锅内冷空气排尽?灭菌完毕后，为什么待压力降低“0” 时才能打开排气阀，开盖取物？ 2. 在使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时，怎样杜绝一切不安全的因素? 3. 灭菌在微生物实验操作中有何重要意义? 4. 黑曲霉的孢子与芽孢杆菌的孢子对热的抗性哪个最强?为什么?