GFP性质 1、检测方便 2、荧光稳定 3、无毒害 4、具有共用性和通用性 5、易于构建载体 6、可进行活细胞定时定位观察
GFP性质 1、检测方便 2、荧光稳定 3、无毒害 4、具有共用性和通用性 5、易于构建载体 6、可进行活细胞定时定位观察
GFP的应用 (1)研究基因表达的调控元件和蛋白定位。 (2)研究基因表达的时序控制与空间定位。 (3)可用于发育分子机理研究。 (4)筛选药物。 (5)临床检验。 (6)转基因动物和植物的筛选标记
GFP 的应用 (1) 研究基因表达的调控元件和蛋白定位。 (2) 研究基因表达的时序控制与空间定位 。 (3) 可用于发育分子机理研究。 (4) 筛选药物 。 (5) 临床检验。 (6) 转基因动物和植物的筛选标记
干扰素 电泳检测 重组质粒的构建 电泳检测 PcR扩增 感受态细胞的制备 酶切 EGFP目的基因获取 转化 pET28a质粒酶切位点选择 引物设计 筛选及复筛及酶切验证 PcR检测 PTG诱导表达 SDS-PAGE检测目的蛋白 包涵体检测 分离纯化
干扰素 电泳检测 重组质粒的构建 电泳检测 酶切 pET28a质粒酶切位点选择 感受态细胞的制备 转化 筛选及复筛及酶切验证 PCR检测 IPTG诱导表达 SDS-PAGE检测目的蛋白 包涵体检测 分离纯化 PCR扩增 EGFP目的基因获取 引物设计
实验用品及方法介绍 方法介绍 研究绿色荧光蛋白在大肠杄菌体内的基因克隆和表达。通过质粒重 组形成所需要的重组质粒pET-28a-GFP,将重组质粒导入大肠杆菌 体内,通过酶切、PCR及用|PTG诱导检测是否在大肠杆菌体内诱导 表达成功。根据电泳结果及荧光现象得岀结论,重组质粒在大肠杆 菌体内成功诱导表达
实验用品及方法介绍 研究绿色荧光蛋白在大肠杆菌体内的基因克隆和表达。通过质粒重 组形成所需要的重组质粒pET-28a-GFP，将重组质粒导入大肠杆菌 体内，通过酶切、PCR及用IPTG诱导检测是否在大肠杆菌体内诱导 表达成功。根据电泳结果及荧光现象得出结论，重组质粒在大肠杆 菌体内成功诱导表达。 方法介绍
实验用品 PEGFP-N3模板、菌株E.co丨iDH5α、E.co丨iBL21、质粒 pET28a、限制性内切酶EcoR丨、HindⅢ、T4DNA连接酶、1 kb dna I adder DNA凝胶回收试剂盒及质粒小提试剂盒、DNA纯化试剂盒及|PTG PR用试剂、卡那霉素、琼脂糖及PR合成引物等、蛋白胨、酵母浸出 粉、琼脂粉等。 PCR仪、凝胶成像系统、荧光显微镜υYγ-6C电泳槽和电泳仪、高速 式离心机、UV2300紫外可见分光光度计
实验用品 PEGFP -N3模板、菌株E. coli DH5 α、E. coli BL21 、质粒 pET28a 、 限制性内切酶 EcoRⅠ、 Hind Ⅲ、T4 DNA连接酶、1 kb DNA ladder DNA 凝胶回收试剂盒及质粒小提试剂盒、DNA 纯化试剂盒及 IPTG、 PCR用试剂、卡那霉素、琼脂糖及 PCR 合成引物等、蛋白胨、酵母浸出 粉、琼脂粉等。 PCR仪、 凝胶成像系统、荧光显微镜DYY-6C电泳槽和电泳仪、高速台 式离心机、UV2300 紫外可见分光光度计