2.永久制片法将撕下的表皮通过经固定、脱水、染色、透明、封藏等过程， 可制成永久制片。整个操作可在培养皿中进行。 制片方法： 在培养皿中进行，分别加入30%乙醇5ml(1min)、40%乙醇5ml(1min)、50%乙醇5ml (1min)、番红乙醇(50%)染色液5ml(2-6h)、65%乙醇5ml(1min)、75%乙醇5ml (1min)、85%乙醇5ml(1min)、固绿乙醇(95%)染色液5ml (0.5min)、95%乙醇5ml(1min)、无水乙醇5ml(1min)2次、无水乙醇. 二甲苯混合液(1：1)5ml(1min)、 二甲苯(1min)5ml 2次，取材料于载玻片上，滴加加拿大树胶，盖上盖玻片，贴上标签即成。 (三)粉末制片法 粉末制片法是对破碎的和粉末状的中药而采用的一种制片方法，是中药显微鉴定中 常用的制片方法之一。制片用具主要有镊子、解剖针、试管、离心机、玻璃捧等。 适用对象为粉末状药材，粉末中药制成的丸、散、膏、丹等中成药，易破碎的中药材以 及贮藏年久而变得十分疏松的药材。 1.临时制片法 (1)水装片法：取过60目筛的中药粉末少许，置载玻片中央，加水1 滴，用解剖针拨匀并使它浸润粉末，再加12滴后盖上盖玻片即成。本法适用于观察淀粉 粒。 (2)水合氯醛透化装片法：取粉末少许，置载玻片中央，加水合氯醛液 1 滴，用解剖针拨匀并使它浸润粉末，在酒精灯上加热，沸即离火，再加加水合氯醛液1滴 ，用解剖针拨匀，再加热，如此反复三次。离火，加稀甘油12滴，拌匀，盖片即成。本 法用于观察除淀粉粒和菊糖外的大部分组织、细胞和细胞后含物。 2 永久制片法 取粉末适量于离心管中，加人50 %乙醇5ml,5~10分钟后离心，倾去乙醇，加番红染色剂2ml,用玻捧轻轻搅动使分散， 静止2~6小时，离心，倾去染剂，加入70%乙醇5ml,1~5分钟后离心倾去酒精，加入固绿 乙醇溶液2ml,30秒钟后即离心，倾去染剂，依次经95%、无水乙醇2次，无水乙醇- 二甲苯混合液(1：1)1次、二甲苯2次，每次1 11
2．永久制片法 将撕下的表皮通过经固定、脱水、染色、透明、封藏等过程， 可制成永久制片。整个操作可在培养皿中进行。 制片方法： 在培养皿中进行，分别加入30%乙醇5ml（1min）、40%乙醇5ml（1min）、50%乙醇5ml （1min）、番红乙醇（50%）染色液5ml（2~6h）、65%乙醇5ml（1min）、75%乙醇5ml （1min）、85%乙醇5ml（1min）、固绿乙醇（95%）染色液5ml （0.5min）、95%乙醇5ml（1min）、无水乙醇5ml（1min）2次、无水乙醇- 二甲苯混合液（1:1）5ml（1min）、 二甲苯（1min）5ml 2次，取材料于载玻片上，滴加加拿大树胶，盖上盖玻片，贴上标签即成。 （三）粉末制片法 粉末制片法是对破碎的和粉末状的中药而采用的一种制片方法，是中药显微鉴定中 常用的制片方法之一。制片用具主要有镊子、解剖针、试管、离心机、玻璃捧等。 适用对象为粉末状药材，粉末中药制成的丸、散、膏、丹等中成药，易破碎的中药材以 及贮藏年久而变得十分疏松的药材。 1．临时制片法 （1）水装片法：取过60目筛的中药粉末少许，置载玻片中央，加水1 滴，用解剖针拨匀并使它浸润粉末，再加1~2滴后盖上盖玻片即成。本法适用于观察淀粉 粒。 （2）水合氯醛透化装片法：取粉末少许，置载玻片中央，加水合氯醛液 1 滴，用解剖针拨匀并使它浸润粉末，在酒精灯上加热，沸即离火，再加加水合氯醛液1滴 ，用解剖针拨匀，再加热，如此反复三次。离火，加稀甘油1~2滴，拌匀，盖片即成。本 法用于观察除淀粉粒和菊糖外的大部分组织、细胞和细胞后含物。 2 永久制片法 取粉末适量于离心管中，加人50 %乙醇5ml，5~10分钟后离心，倾去乙醇，加番红染色剂2ml，用玻捧轻轻搅动使分散， 静止2~6小时，离心，倾去染剂，加入70%乙醇5ml，1~5分钟后离心倾去酒精，加入固绿 乙醇溶液2ml，30秒钟后即离心，倾去染剂，依次经95%、无水乙醇2次，无水乙醇- 二甲苯混合液（1:1）1次、二甲苯2次，每次l 11
~5分钟。最后用吸管吸取材料于载玻片上，滴加加拿大树胶，盖上盖玻片，贴上标签即 成。 (四)组织解离制片法 组织解离法是借药物的作用，将组织软化并使各组织细胞之间的果胶质被溶化而分 离的一种制片方法，适用于观察各种细胞完整的形态。解离前，需将材料切成1 3mm的小片。 1.临时制片法 (1)氢氧化钾法：适用于组织柔软的材料，如叶、花、根尖等。 取材料薄片置试管或小烧怀中，加5%氢氧化钾溶液2-5ml,水浴加热20-30 分钟，至用玻璃棒轻压材料能散开为止，倾去碱液，用水洗涤，取少量材料置载玻片上 ，用玻璃棒压碎后，以水合氯醛试液或稀甘油装片即成。 (2)铬酸一 硝酸法：适用于木化组织较多的药材，如木质的根、根茎类药材、木类药材等。 解离液的配制：取10%铬酸一份，10%硝酸一份，等量混合而成。 取材料薄片置试管或小烧怀中，加解离液适量，浸泡1~2天，夏天在室温即可，冬天 需加温到3040℃，至用玻璃棒拌轻压材料能离散开为止，用清水离心洗涤数次，洗净酸 液，取少量材料置载玻片上，用玻璃棒压碎后，以水合氯醛试液或稀甘油装片即成。 (3)氯酸钾法：适用于木类以及坚硬的果皮及种皮等药材。其特点是解离迅速，有 漂白作用，便于染色制成水久制片，但纤维素壁细胞大多被破坏。操作时需注意安全。 取材料薄片置小烧怀或试管中，加60%硝酸5ml,小火缓缓加热至微沸，移离火焰， 加入少量氯酸钾粉，小火加热，待产生的气泡平息后，再加少量氯酸钾粉，小火加热， 当材料呈白色絮状时停止，冷却，用水离心洗涤数次，洗净酸液，吸取少量材料置载玻 片上，以水合氯醛试液或稀甘油装片即成。 2 永久制片法 取已解离的材料，置试管中，用1%番红水溶液染色2~6小时，离心，倾去染液，经30%、 50%、70%、95%、无水乙醇、无水乙醇.二甲苯混合液、纯二甲苯2 次，用干燥吸管吸取带材料的二甲苯1滴于载玻片上，滴加拿大树胶1 12
~5分钟。最后用吸管吸取材料于载玻片上，滴加加拿大树胶，盖上盖玻片，贴上标签即 成。 （四）组织解离制片法 组织解离法是借药物的作用，将组织软化并使各组织细胞之间的果胶质被溶化而分 离的一种制片方法，适用于观察各种细胞完整的形态。解离前，需将材料切成1 3mm的小片。 1．临时制片法 （1）氢氧化钾法：适用于组织柔软的材料，如叶、花、根尖等。 取材料薄片置试管或小烧怀中，加5%氢氧化钾溶液2~5ml，水浴加热20~30 分钟，至用玻璃棒轻压材料能散开为止，倾去碱液，用水洗涤，取少量材料置载玻片上 ，用玻璃棒压碎后，以水合氯醛试液或稀甘油装片即成。 （2）铬酸— 硝酸法：适用于木化组织较多的药材，如木质的根、根茎类药材、木类药材等。 解离液的配制：取10%铬酸一份，10%硝酸一份，等量混合而成。 取材料薄片置试管或小烧怀中，加解离液适量，浸泡1~2天，夏天在室温即可，冬天 需加温到30~40℃，至用玻璃棒拌轻压材料能离散开为止，用清水离心洗涤数次，洗净酸 液，取少量材料置载玻片上，用玻璃棒压碎后，以水合氯醛试液或稀甘油装片即成。 （3）氯酸钾法：适用于木类以及坚硬的果皮及种皮等药材。其特点是解离迅速，有 漂白作用，便于染色制成永久制片，但纤维素壁细胞大多被破坏。操作时需注意安全。 取材料薄片置小烧怀或试管中，加60%硝酸5ml，小火缓缓加热至微沸，移离火焰， 加入少量氯酸钾粉，小火加热，待产生的气泡平息后，再加少量氯酸钾粉，小火加热， 当材料呈白色絮状时停止，冷却，用水离心洗涤数次，洗净酸液，吸取少量材料置载玻 片上，以水合氯醛试液或稀甘油装片即成。 2 永久制片法 取已解离的材料，置试管中，用1%番红水溶液染色2~6小时，离心，倾去染液，经30%、 50%、70%、95%、无水乙醇、无水乙醇-二甲苯混合液、纯二甲苯2 次，用干燥吸管吸取带材料的二甲苯1滴于载玻片上，滴加拿大树胶1 12
滴，盖上盖玻片即成。 (五)花粉粒及孢子制片法 花粉粒和孢子的观察常用于花类中药、全草类中药、蜜源植物以及藏类植物的鉴定。为 了清晰地看到孢粉表面的纹饰和萌发孔等特征，在制片中有时需将内部的原生质体用化 学试剂去掉。 1.临时制片法 取花粉、花药或孢子囊群，放于载玻片中央，用玻璃棒压碎，去除花药残渣后滴加水合 氯醛液1滴，用解剖针搅动，使气泡溢出，再滴加水合氯醛液1滴，盖上盖玻片即成。 2.永久制片法 取孢粉材料，干样品用冰醋酸软化，或用热水浸泡使其变软，用玻璃棒压碎，移至离心 管内，加入冰醋酸，离心机离心，倾去上清液，加入新鲜配制的醋酸。 硫酸(91)混合液约3ml,在水浴上加热1~2分钟，边加热，边用玻璃棒搅拌，待消冷后 离心，取沉淀，用水洗涤2次，再用甘油水(50：50)混合液浸15分钟后离心，倾出上清液 ,将离心管倒立在滤纸上，吸尽水液，装片时用解剖针取一小块甘油冻胶，放入离心管 ，接触沉淀物，使孢花粉粘在甘油冻胶上，取出并置于载玻片上，放在烫片板上加温， 使甘油冻胶溶解。用解剖针把花粉搅均匀，盖上盖玻片，稍加压，在盖玻片四周涂上熔 溶石蜡，制片即完成，贴上标签。 甘油冻胶配制：优质明胶5g,蒸馏水30ml,甘油35ml,石碳酸（溶解于10滴水中） 0.5g(每 100ml水中加 1g)先将明胶溶解于35 ℃温蒸馏水中，然后将其他药品加入，待完全溶解而溶液尚温暖时，用粗滤纸滤入广口 瓶中，冻结后贮藏备用。 四、绘图技术 为了明确表示实验和研究的结果及所见实物的形态，常常根据观察到的实物进行绘图 ,以记载观察到的实验结果，对同学们来说不仅加深了对观察内容的理解，而且也是基 本技能的培养，所以绘图时应在仔细观察深入了解的基础上。认真仔细，持科学态度。 13
滴，盖上盖玻片即成。 （五）花粉粒及孢子制片法 花粉粒和孢子的观察常用于花类中药、全草类中药、蜜源植物以及蕨类植物的鉴定。为 了清晰地看到孢粉表面的纹饰和萌发孔等特征，在制片中有时需将内部的原生质体用化 学试剂去掉。 1．临时制片法 取花粉、花药或孢子囊群，放于载玻片中央，用玻璃棒压碎，去除花药残渣后滴加水合 氯醛液1滴，用解剖针搅动，使气泡溢出，再滴加水合氯醛液1 滴，盖上盖玻片即成。 2．永久制片法 取孢粉材料，干样品用冰醋酸软化，或用热水浸泡使其变软，用玻璃棒压碎，移至离心 管内，加入冰醋酸，离心机离心，倾去上清液，加入新鲜配制的醋酸- 硫酸（9:1）混合液约3ml，在水浴上加热1~2分钟，边加热，边用玻璃棒搅拌，待消冷后 离心，取沉淀，用水洗涤2次，再用甘油水（50:50）混合液浸15分钟后离心，倾出上清液 ，将离心管倒立在滤纸上，吸尽水液，装片时用解剖针取一小块甘油冻胶，放入离心管 ，接触沉淀物，使孢花粉粘在甘油冻胶上，取出并置于载玻片上，放在烫片板上加温， 使甘油冻胶溶解。用解剖针把花粉搅均匀，盖上盖玻片，稍加压，在盖玻片四周涂上熔 溶石蜡，制片即完成，贴上标签。 甘油冻胶配制：优质明胶5g，蒸馏水 30ml，甘油 35ml，石碳酸（溶解于10滴水中） 0.5g（每 100ml水中加 1g）先将明胶溶解于35 ℃温蒸馏水中，然后将其他药品加入，待完全溶解而溶液尚温暖时，用粗滤纸滤入广口 瓶中，冻结后贮藏备用。 四、绘图技术 为了明确表示实验和研究的结果及所见实物的形态，常常根据观察到的实物进行绘图 ，以记载观察到的实验结果，对同学们来说不仅加深了对观察内容的理解，而且也是基 本技能的培养，所以绘图时应在仔细观察深入了解的基础上。认真仔细，持科学态度。 13
切不可照书描绘。 药用植物和中药材形态及其显微构造，除可用文字描述外，一般均需附图说明，绘 图是药用植物学和中药鉴定学工作中的一项基本技能。绘图的精确与好坏，明显地影响 药用植物学和中药鉴定学研究的结果与质量。常用绘图方法有徒手绘图法和显微描绘法 两种。若按绘图工具则可分为铅笔绘图法、墨线绘图法和彩色绘图法等。绘制显微组织 简图，要用国际通用的代表符号来表示。 (一)绘图的基础知识 药用植物和中药材及其显微构造图是实物的形象记录，要求比例正确，形态逼真， 结构清楚。对药用植物和中药材的形态图还要求富有立体感，不能随意夸张和任意涂影 。要正确绘出实物的立体结构图，必须有一定的透视知识，如前大、后小、近明、远暗 透视方向一致，各透视线最终消失到一点等基础知识。 绘图常有以下规定：①一切结构均用线条来表示。线条要求粗细均匀，光滑清晰， 明暗一致，接头处无分叉，切忌重复描绘。②所有结构线条不能用尺或其他圆规或曲线 板等工具代画，必须徒手作图，以表示生物的自然形态。③显示立体结构可用透视线条 来表示。对球形、圆柱体或圆锥体的立体结构可以用圆点衬托明暗光线的方式，而不可 用任何涂影来表示。点要小而圆，由密到稀逐步过渡。④各部位应先画了引线再注文字 。引线用直尺画实线来表示，要求细直、均匀、不交叉，以免误指。注字时要尽可能详 细些。所注文字最好在图右边的一侧，排列整齐。图内的结构名称，可直接用文字写明 ，也可用数码代注，再在图下集中注明。注字书写要求清楚、端正。图下需注明标本的 名称、部位和放大倍数。⑤实验题目写在绘图纸的上方，图题和所用材料的名称和部位 写在图的下方。 用直尺量出画在纸上图象的长度或大小 放大倍数= 用显微目尺量出被测观察物在同一方向上的实际长度或大小 (二)徒手绘图法的步骤 1.选择最典型的标本或结构。 2.仔细观察各部位的形状和结构及其间的比例关系和较明显的立体结构。 14
切不可照书描绘。 药用植物和中药材形态及其显微构造，除可用文字描述外，一般均需附图说明，绘 图是药用植物学和中药鉴定学工作中的一项基本技能。绘图的精确与好坏，明显地影响 药用植物学和中药鉴定学研究的结果与质量。常用绘图方法有徒手绘图法和显微描绘法 两种。若按绘图工具则可分为铅笔绘图法、墨线绘图法和彩色绘图法等。绘制显微组织 简图，要用国际通用的代表符号来表示。 （一）绘图的基础知识 药用植物和中药材及其显微构造图是实物的形象记录，要求比例正确，形态逼真， 结构清楚。对药用植物和中药材的形态图还要求富有立体感，不能随意夸张和任意涂影 。要正确绘出实物的立体结构图，必须有一定的透视知识，如前大、后小、近明、远暗 、透视方向一致，各透视线最终消失到一点等基础知识。 绘图常有以下规定：①一切结构均用线条来表示。线条要求粗细均匀，光滑清晰， 明暗一致，接头处无分叉，切忌重复描绘。②所有结构线条不能用尺或其他圆规或曲线 板等工具代画，必须徒手作图，以表示生物的自然形态。③显示立体结构可用透视线条 来表示。对球形、圆柱体或圆锥体的立体结构可以用圆点衬托明暗光线的方式，而不可 用任何涂影来表示。点要小而圆，由密到稀逐步过渡。④各部位应先画了引线再注文字 。引线用直尺画实线来表示，要求细直、均匀、不交叉，以免误指。注字时要尽可能详 细些。所注文字最好在图右边的一侧，排列整齐。图内的结构名称，可直接用文字写明 ，也可用数码代注，再在图下集中注明。注字书写要求清楚、端正。图下需注明标本的 名称、部位和放大倍数。⑤实验题目写在绘图纸的上方，图题和所用材料的名称和部位 写在图的下方。 用直尺量出画在纸上图象的长度或大小 用显微目尺量出被测观察物在同一方向上的实际长度或大小 （二）徒手绘图法的步骤 1．选择最典型的标本或结构。 2．仔细观察各部位的形状和结构及其间的比例关系和较明显的立体结构。 14 放大倍数=
3.用较淡的铅笔(2H或4H),按照实物或显微图像的比例关系和立体投影画出轮 廓草图，并留出书写图题和注字的地方。注意：铅笔一定要削尖。 4.经反复对照修改后，再用较浓的铅笔(B或2B)绘出修改图。 5.画引线，注字 (三)墨线绘图法 墨线绘图法系用特制的绘图小蘸笔，蘸墨汁在透明硫酸纸上画墨线图的一种方法。 由于书籍或论文上的附图需制版后铅印，不能用铅笔图，必须用墨线图，故墨线图实际 上就是将铅笔图用墨线描绘，增加线条的反差度，有利于印刷清楚。画墨线图的要求， 基本上与铅笔图相同，但对画线条和打点的要求更高。若有个别线条画错，可先用锐利 刀片轻轻刮净线条，再用橡皮将纸面擦至光滑或用指甲磨光后重画。 画墨线图的具体步骤：①用铅笔在白纸上画好草图。②在玻璃板上（或下有白灯光 的毛玻璃台上)将草图压在硫酸纸下，用蘸笔复绘草图。③打点衬托立体感，一定要去 掉下面草图后，在玻璃板上直接打点。打点要求细小、均匀，不要重叠。④画引线，注 字。 (四)显徽组织简图的画法和有关代表符号 药用植物组织绘图法一般分为详图和简图： 1.详图：描绘植物组织所有细胞轮廓。分清每种组织、每个细胞的形状，如实反应 出植物组织真实情况。 2.简图：以不同的线条表示不同细胞或组织的轮廓，看起来清晰，一目了然，但每 个细胞的情况反应不出来。 显微组织简图是将显微构造的各种组织位置和比例关系，用国际通用的代表符号， 画成较简明的组织构造图，使能清晰地了解该器官组织构造的全貌。画法同墨线图和铅 笔图。常用的各组织和细胞内含物的代表符号见图1- 2。往往用简图和详图配合。共同表示某种组织的显微特征。以简图表示轮廓。每部分组 织再选择有代表性的一部分组织绘详图。 15
3．用较淡的铅笔（2H或4H），按照实物或显微图像的比例关系和立体投影画出轮 廓草图，并留出书写图题和注字的地方。注意：铅笔一定要削尖。 4．经反复对照修改后，再用较浓的铅笔（B或2B）绘出修改图。 5．画引线，注字。 （三）墨线绘图法 墨线绘图法系用特制的绘图小蘸笔，蘸墨汁在透明硫酸纸上画墨线图的一种方法。 由于书籍或论文上的附图需制版后铅印，不能用铅笔图，必须用墨线图，故墨线图实际 上就是将铅笔图用墨线描绘，增加线条的反差度，有利于印刷清楚。画墨线图的要求， 基本上与铅笔图相同，但对画线条和打点的要求更高。若有个别线条画错，可先用锐利 刀片轻轻刮净线条，再用橡皮将纸面擦至光滑或用指甲磨光后重画。 画墨线图的具体步骤：①用铅笔在白纸上画好草图。②在玻璃板上（或下有白灯光 的毛玻璃台上）将草图压在硫酸纸下，用蘸笔复绘草图。③打点衬托立体感，一定要去 掉下面草图后，在玻璃板上直接打点。打点要求细小、均匀，不要重叠。④画引线，注 字。 （四）显微组织简图的画法和有关代表符号 药用植物组织绘图法一般分为详图和简图： 1．详图：描绘植物组织所有细胞轮廓。分清每种组织、每个细胞的形状，如实反应 出植物组织真实情况。 2．简图：以不同的线条表示不同细胞或组织的轮廓，看起来清晰，一目了然，但每 个细胞的情况反应不出来。 显微组织简图是将显微构造的各种组织位置和比例关系，用国际通用的代表符号， 画成较简明的组织构造图，使能清晰地了解该器官组织构造的全貌。画法同墨线图和铅 笔图。常用的各组织和细胞内含物的代表符号见图1- 2。往往用简图和详图配合。共同表示某种组织的显微特征。以简图表示轮廓。每部分组 织再选择有代表性的一部分组织绘详图。 15