差式甲基化杂交(DMH) 差异甲基化杂交(DMH,首先是1999年由 Huang等提出的,包 括CpG岛微阵列的制备、标记靶序列的制备以及扫描图谱的分析。 可选择性PR扩增和双色荧光标记肿瘤细胞与正常细胞的甲基化CpG岛, 根据其混合物与吣pG岛微阵列杂交后荧光信号的变化而获得肿瘤细胞 GpG岛甲基化谱。 DMH的优点在于能够在整个基因组范围检测甲基化的发生模式, 高度实现了微阵列技术的高通量优势。缺陷在于只能局限于酶切位点 的甲基化发生情况,遗漏了很多信息,而且由于是整个基因组范围内 的杂交,假阳性的几率较大
差式甲基化杂交（DMH） 差异甲基化杂交(DMH) ,首先是 1999 年由 Huang等提出的 ,包 括 CpG岛微阵列的制备、标记靶序列的制备以及扫描图谱的分析。 可选择性PCR扩增和双色荧光标记肿瘤细胞与正常细胞的甲基化CpG岛， 根据其混合物与CpG岛微阵列杂交后荧光信号的变化而获得肿瘤细胞 CpG岛甲基化谱。 DMH的优点在于能够在整个基因组范围检测甲基化的发生模式 , 高度实现了微阵列技术的高通量优势。缺陷在于只能局限于酶切位点 的甲基化发生情况 ,遗漏了很多信息 ,而且由于是整个基因组范围内 的杂交 ,假阳性的几率较大
e Microarray-based Epigenetic Profiling Unmethylated fraction Sample Control限制性內切酶和PCR的方法 methylation-sensitve restriction enzymes 甲基化敏感限制性内切酶切割 CpG specific Adaptor-Uioat GpG特异适配子连接 CpG specifi MerC GpG特异甲基化不敏感的内切酶 MMM NMa 净净 适配子特异的PQR扩增, 带上不同颜色的荧光标记 Unmethylated fraction + cys 与0pG岛芯片杂交 Analysis Quantiation
Microarray-based Epigenetic Profiling 限制性内切酶和PCR的方法 甲基化敏感限制性内切酶切割 CpG特异适配子连接 CpG特异甲基化不敏感的内切酶 适配子特异的PCR扩增， 带上不同颜色的荧光标记 与CpG岛芯片杂交
Hypomethylation 出 Same methylation Hypermethylation 红色:低甲基化 绿色:高甲基化 黄色:甲基化水平相等 销地 时德 Human CpG island microarray
红色：低甲基化 绿色：高甲基化 黄色：甲基化水平相等
2.高效液相色谱(HPLC法 将DNA用酸或酶裂解为碱基,通过色谱柱分离出各种 碱基,由波长254m的紫外光测定其吸收峰并定量, 灵敏度为碱基。由积分面积5mC/(5mC+0)的百分数 检测基因组DNA中5m0的含量,即DNA甲基化的水平。 此法是目前测定基因组DNA中5mC总量最标准的方法。 但不能对甲基化的位点进行定位
2. 高效液相色谱(HPLC) 法 将DNA用酸或酶裂解为碱基 ,通过色谱柱分离出各种 碱基 ,由波长254nm的紫外光测定其吸收峰并定量 , 灵敏度为碱基。由积分面积 5mC/(5mC+C)的百分数 检测基因组DNA中5mC的含量 ,即DNA甲基化的水平。 此法是目前测定基因组DNA中5mC总量最标准的方法。 但不能对甲基化的位点进行定位
垂/3.免疫化学法 基于单克隆抗体能够与5mC发生特异性反 应的原理。应用荧光素标记抗体与预先固定在 DEAE膜上的DNA特异结合,对膜上荧光进行扫 描,得到5m的水平,此方法较为灵敏,但需 要精密仪器
3. 免疫化学法 基于单克隆抗体能够与5mC发生特异性反 应的原理。应用荧光素标记抗体与预先固定在 DEAE膜上的DNA特异结合，对膜上荧光进行扫 描，得到5mC的水平，此方法较为灵敏，但需 要精密仪器