五.异源同序酶( isoschizomer,同裂酶) 1.定义:能识别相同序列但来源不同的两种或多 种限制酶 2.特点:1)识别相同顺序 2)切割位点的异同 Kpnl GGTACC Asp718 G'GTACC SstI CCGC Gg Sacl CcGg 六限制酶的星反应( star activity) 1.特点:限制酶识别序列特异性降低 2.发生星反应的限制酶和条件(见下页) 3.星反应的利用和避免
五. 异源同序酶（isoschizomer，同裂酶） 1. 定义：能识别相同序列但来源不同的两种或多 种限制 酶 2. 特点：1）识别相同顺序 2）切割位点的异同 KpnI GGTAC C Asp718 G GTACC SstI CCGC GG SacI CCGC GG 六.限制酶的星反应（star activity） 1. 特点: 限制酶识别序列特异性降低 2. 发生星反应的限制酶和条件（见下页） 3. 星反应的利用和避免
表1具有星反应的限制性内切酶与条件 限制酶 诱发星活性的条件a 识别序列 Aval 1,2,4 BamHl 1-5,8 G GATCN G PuAtCC BstI 2,4 Bsul EcoRI 1,2,4-6 NAATTN ael Hhal HindⅢ 6 Hpal PstI 1,2,4,7 PvuⅡ Sa li 1,2,4,7 Scal 4-6,8 SstⅡ Xbal a.1:亚乙二醇(45%;2:甘油(12%);3:乙醇(2%;4:高酶/DNA比(>25/ug); 5:Mn+代替Mg+;6:pH8.5;7:二甲基亚砜(8%;8:无NaCl
表1 具有星反应的限制性内切酶与条件 限制酶 诱发星活性的条件a 识别序列 AvaI 1, 2, 4 BamHI 1 - 5, 8 G GATCN, G PuATCC BstI 2, 4 BsuI 2, 4, 6 EcoRI 1, 2, 4 - 6 N AATTN HaeⅢ 2, 4 HhaI 2, 4, 7 HindⅢ 6 HpaI 1, 2, 4 PstI 1, 2, 4, 7 PvuⅡ 2, 4 SalI 1, 2, 4, 7 ScaI 4 - 6, 8 SstⅡ 2, 4 XbaI 2, 4, 7 a.1：亚乙二醇(45%)；2:甘油(12%)；3：乙醇(12%)；4：高酶/DNA比(>25U/μg)； 5：Mn++代替Mg++；6:pH8.5; 7:二甲基亚砜(8%); 8:无NaCl
七.其它特异性的内切酶及其用途 1.末端酶(λ terminase): 5’- GGGCGGCGACCTN-3 5”,出现的频率约412 分子量为117,000=1A(74,000)+2Nul(21,000 2. Omega核酸酶( ISel): 由内含子编码,用于rRNA的剪切,出现的频率约418 69X1010bp,其识别顺序为 5-TAGGGATAA LAGGGTAAT-3 TATT 3. I-Ppol:来自于 Physarum polycephalum 识别序列: CTCTCTTAAGGTAGC AATT 4.用途 遗传标记,构建载体
七. 其它特异性的内切酶及其用途 1. λ末端酶（λ terminase）： 5’-GGGCGGCGACCTN--3’ N--5’，出现的频率约4 12 分子量为 117,000 = 1 A（74,000）+ 2 Nul（21,000） 2. Omega核酸酶（I-SceI）： 由内含子编码，用于rRNA的剪切，出现的频率约4 18 = 6.9 X 1010 bp，其识别顺序为 5’-TAGGGATAACAGGGTAAT-3’ TATT 3. I-PpoI：来自于Physarum polycephalum 识别序列：CTCTCTTAA GGTAGC AATT 4. 用途 遗传标记，构建载体
八.限制酶的用途 1.DNA重组 2.限制酶(物理)图谱绘制 3.突变分析(RFLP分析) 4.限制酶的部分酶切与完全酶切 附:IS型限制酶的特点 1.具有特异型核苷酸顺序识别能力,但该顺序不 具有对称结构。 2.酶切位点与识别位点不一致,切点常在识别位 点的一侧,1-20nt 3.酶切后的末端经补平后又可发生酶切反应。 4.产生粘性末端可以是1-5个核苷酸 5.均为单体,分子量为47-108kD
八. 限制酶的用途 1. DNA重组 2. 限制酶（物理）图谱绘制 3. 突变分析（RFLP分析） 4. 限制酶的部分酶切与完全酶切 附：IIS型限制酶的特点 1. 具有特异型核苷酸顺序识别能力，但该顺序不 具有对称结构。 2. 酶切位点与识别位点不一致，切点常在识别位 点的一侧，1-- 20nt。 3. 酶切后的末端经补平后又可发生酶切反应。 4. 产生粘性末端可以是1--5个核苷酸。 5. 均为单体，分子量为47—108 kD
第二节 DNA甲基化酶
第二节 DNA 甲 基 化 酶