中浸两星期（完全浸没），然后在以下浸渍液中保存： 福尔马林 10毫升 酒精(95%) 10毫升 亚硫酸（饱和溶液）》 30-50毫升 水 2000毫升 7)浸渍标本的保存： 浸渍标本可保存在试管、玻瓶或标本缸中。为了避免标本的漂浮和移动，可以 将标本缚在玻璃上或者用玻璃将标本压下。浸渍标本最好放在暗处，以减少药液的 氧化或瓶口因温度变化太大而造成裂碎。 浸渍标本的封口很重要，因为配制浸渍液所用的药品大都是挥发性的或者容易 氧化的，密封可以保持药液的效用，封口的方法如下： .临时封口法：将蜂蜡和松香各1份，分别融化后混合，加少量凡士林调成胶 状，涂在瓶盖边缘，将盖压紧封口。明胶和石蜡的混合物也可用于封口，将明胶(4 份)在水中浸几个小时，滤去水后加热熔化，加石蜡一份，熔化后即成为胶状物 趁热使用。 b.永久封口法：将酪胶和消石灰各1份混合，加水调成糊状物，即可用于封口。 干燥后，因酪酸钙的硬化而密封。此外，将胶28克在水中浸几小时，滤去水分加热 熔化，加重铬酸钾0.324克和适量的熟石膏调成糊状，也可用于永久封口
中浸两星期（完全浸没），然后在以下浸渍液中保存： 福尔马林 10 毫升 酒精（95%） 10 毫升 亚硫酸（饱和溶液） 30-50 毫升 水 2000 毫升 7）浸渍标本的保存： 浸渍标本可保存在试管、玻瓶或标本缸中。为了避免标本的漂浮和移动，可以 将标本缚在玻璃上或者用玻璃将标本压下。浸渍标本最好放在暗处，以减少药液的 氧化或瓶口因温度变化太大而造成裂碎。 浸渍标本的封口很重要，因为配制浸渍液所用的药品大都是挥发性的或者容易 氧化的，密封可以保持药液的效用，封口的方法如下： a．临时封口法：将蜂蜡和松香各 1 份，分别融化后混合，加少量凡士林调成胶 状，涂在瓶盖边缘，将盖压紧封口。明胶和石蜡的混合物也可用于封口，将明胶（4 份）在水中浸几个小时，滤去水后加热熔化，加石蜡一份，熔化后即成为胶状物， 趁热使用。 b．永久封口法：将酪胶和消石灰各 1 份混合，加水调成糊状物，即可用于封口。 干燥后，因酪酸钙的硬化而密封。此外，将胶 28 克在水中浸几小时，滤去水分加热 熔化，加重铬酸钾 0.324 克和适量的熟石膏调成糊状，也可用于永久封口
实验三真菌显微玻片标本制作 植物病害的初步诊断，特别是对真菌病害的诊断，都要经过症状观察和显微镜 检查。症状诊断有时不是绝对可靠的，不同病原物可以产生相似的症状，同时，在 分离病原物前经过显微镜检查，对病原物先有初步了解，有助于研究方法的选择和 对结果的判断，因此标本的显微镜检查是非常重要的。真菌病害标本和培养真菌的 显微镜检查主要包括菌丝体的形态结构、孢子的形态结构、子实体的形态结构及其 与寄主的关系，有时还需要进一步观察病原物寄生的部位和寄主细胞及组织的变化。 显微玻片标本的制作是必须掌握的一项植物病理学实验技术。玻片标本制作质 量的好坏直接影响显微观察的效果，因此必须掌握要领，勤练习，多实践。 显微玻片标本制作过程中，浮载剂是必备的媒介物，其作用是防止标本材料干 燥变形和光线的折射。根据需要可以采用不同的浮载剂，常用的浮载剂是水、乳酚 油或甘油等。它们的制备及优缺点请参阅附录。 根据材料和观察目的不同，可以采用不同的玻片制作方法。常规的制片方式有 1)挑取制片，2)粘贴制片，3)徒手切片，4)组织整体透明制片。 一实验目的 1.学习玻片标本的主要制作方法 2.了解不同症状类型的病害标本应采取的制片方法和关键技术。 二.实验材料及用具： 1.散装病害干标本、自采病害鲜标本。 2.载玻片、盖玻片、接种针、刀片、蒸馏水、乳酚油、滤纸、透明胶带、培养 皿。 3.二甲苯、擦镜纸。 4.显微镜。 三.实验内容及方法 1.挑取制片：是病理学中最常用的制片方法之一，适用于病组织上生长有茂密 霉状病原物及真菌的培养物。取一块干净的载玻片，在正中滴一滴浮载剂（常用水 或乳酚油)。用解剖针挑取少许病原真菌置于浮载剂中，使稍分散：取一块洁净盖 玻片，使一边紧贴浮载剂边缘，倾斜着轻轻放下，如盖玻片周围有多余的浮载剂， 可用滤纸吸干
实验三 真菌显微玻片标本制作 植物病害的初步诊断, 特别是对真菌病害的诊断，都要经过症状观察和显微镜 检查。症状诊断有时不是绝对可靠的，不同病原物可以产生相似的症状，同时，在 分离病原物前经过显微镜检查，对病原物先有初步了解，有助于研究方法的选择和 对结果的判断，因此标本的显微镜检查是非常重要的。真菌病害标本和培养真菌的 显微镜检查主要包括菌丝体的形态结构、孢子的形态结构、子实体的形态结构及其 与寄主的关系，有时还需要进一步观察病原物寄生的部位和寄主细胞及组织的变化。 显微玻片标本的制作是必须掌握的一项植物病理学实验技术。玻片标本制作质 量的好坏直接影响显微观察的效果，因此必须掌握要领，勤练习，多实践。 显微玻片标本制作过程中，浮载剂是必备的媒介物，其作用是防止标本材料干 燥变形和光线的折射。根据需要可以采用不同的浮载剂，常用的浮载剂是水、乳酚 油或甘油等。它们的制备及优缺点请参阅附录。 根据材料和观察目的不同，可以采用不同的玻片制作方法。常规的制片方式有： 1）挑取制片，2）粘贴制片，3）徒手切片，4）组织整体透明制片。 一．实验目的： 1．学习玻片标本的主要制作方法。 2．了解不同症状类型的病害标本应采取的制片方法和关键技术。 二．实验材料及用具： 1．散装病害干标本、自采病害鲜标本。 2．载玻片、盖玻片、接种针、刀片、蒸馏水、乳酚油、滤纸、透明胶带、培养 皿。 3．二甲苯、擦镜纸。 4．显微镜。 三．实验内容及方法: 1．挑取制片：是病理学中最常用的制片方法之一，适用于病组织上生长有茂密 霉状病原物及真菌的培养物。取一块干净的载玻片，在正中滴一滴浮载剂（常用水 或乳酚油）。用解剖针挑取少许病原真菌置于浮载剂中，使稍分散；取一块洁净盖 玻片，使一边紧贴浮载剂边缘，倾斜着轻轻放下，如盖玻片周围有多余的浮载剂， 可用滤纸吸干
合格的玻片应该是：保持病原物的原有形态结构，疏密适中便于观察：无其它 微生物和影响观察的杂质：无气泡。 技术要点：1)挑取物不要太多，可少量多次挑取：2)易产生气泡的材料可先 用70%乙醇处理，再加浮载剂：3)盖玻片盖好后不要再移动：4)载玻片、盖玻片 要干净。 2.粘贴制片：是一种简单快速检查叶面真菌的方法，当病原物少不易挑取时更 宜用。最简单的做法是取一小段透明胶带，贴在真菌生长部位的叶面上，将胶带取 下放在载玻片上的一滴乳酚油中，上面再加一滴乳酚油，加盖玻片即可。 此方法只供做临时玻片，且气泡较难去净，而且有很多杂物。 3.徒手切片：也是一种最常用的方法，适于观察病菌寄生的部位和寄主细胞、 组织的变化。一般材料的徒手切片，是将病组织沾湿后，放在一片载玻片上，也可 置于表面平整的小木块上，上面加载玻片用手指轻轻压住，随着手指慢慢后退，用 刀片将材料切成薄片。将切下的薄片放在清水中，以免干燥，在水面上选取薄而均 匀的进行制片。不同的组织可用不同的切法，粗大而比较坚硬的材料，可夹在手指 之间切：细小且柔软的，可以夹在木片、新鲜的胡罗卜或马铃薯块中间切。 合格的切片应该是：显示所需要检查的病原结构或病组织变化的典型特征：厚 薄适中，利于观察：无气泡，外观整洁。 技术要点：1)选取具有典型症状的材料：2)切刀刃口由左向右移动慢慢切下 尽量切薄：3)好的切片需反复练习才能得到，不能性急：4)封片前把切片整形 排列、保持玻片标本整洁美观。 4.组织整体透明制片：用于病组织表面或组织内病原或病变的直接检视，如组 织内的菌丝和吸器等。一般先将小块叶片在95%酒精：冰乙酸(1：1，VN)混合 液中固定24小时，然后浸在饱和水合氯醛水溶液（或其它透明剂）中，待组织透明 后取出用水洗净，经稀苯胺兰水溶液染色，用甘油浮载制片。（详见方中达主编） 《植病研究方法》106-107页)。 四.作业： 1.每人上交合格挑取制片两片，徒手切片一片。 2.根据你制片的体会，写出挑取制片及徒手切片的技术要点。 五.附录： 1.常用浮载剂的制备及优缺点： a.水：用蒸馏水或以洁净的凉开水为浮载剂，优点是取材容易，能保持标本材 料的形状、大小和色泽：但是制成的玻片容易干燥和出现气泡，较小的病原物或孢 子易在水中颤动，只适宜于临时使用，不能长期保存
合格的玻片应该是：保持病原物的原有形态结构，疏密适中便于观察；无其它 微生物和影响观察的杂质；无气泡。 技术要点：1）挑取物不要太多，可少量多次挑取；2）易产生气泡的材料可先 用 70%乙醇处理，再加浮载剂；3）盖玻片盖好后不要再移动；4）载玻片、盖玻片 要干净。 2．粘贴制片：是一种简单快速检查叶面真菌的方法，当病原物少不易挑取时更 宜用。最简单的做法是取一小段透明胶带，贴在真菌生长部位的叶面上，将胶带取 下放在载玻片上的一滴乳酚油中，上面再加一滴乳酚油，加盖玻片即可。 此方法只供做临时玻片，且气泡较难去净，而且有很多杂物。 3．徒手切片：也是一种最常用的方法，适于观察病菌寄生的部位和寄主细胞、 组织的变化。一般材料的徒手切片，是将病组织沾湿后，放在一片载玻片上，也可 置于表面平整的小木块上，上面加载玻片用手指轻轻压住，随着手指慢慢后退，用 刀片将材料切成薄片。将切下的薄片放在清水中，以免干燥，在水面上选取薄而均 匀的进行制片。不同的组织可用不同的切法，粗大而比较坚硬的材料，可夹在手指 之间切；细小且柔软的，可以夹在木片、新鲜的胡罗卜或马铃薯块中间切。 合格的切片应该是：显示所需要检查的病原结构或病组织变化的典型特征；厚 薄适中，利于观察；无气泡，外观整洁。 技术要点：1）选取具有典型症状的材料；2）切刀刃口由左向右移动慢慢切下， 尽量切薄；3）好的切片需反复练习才能得到，不能性急；4）封片前把切片整形、 排列、保持玻片标本整洁美观。 4．组织整体透明制片；用于病组织表面或组织内病原或病变的直接检视，如组 织内的菌丝和吸器等。一般先将小块叶片在 95%酒精：冰乙酸（1 : 1，V/V）混合 液中固定 24 小时，然后浸在饱和水合氯醛水溶液（或其它透明剂）中，待组织透明 后取出用水洗净，经稀苯胺兰水溶液染色，用甘油浮载制片。（详见方中达主编） 《植病研究方法》106 - 107 页）。 四．作业： 1．每人上交合格挑取制片两片，徒手切片一片。 2．根据你制片的体会，写出挑取制片及徒手切片的技术要点。 五．附录： 1．常用浮载剂的制备及优缺点： a．水：用蒸馏水或以洁净的凉开水为浮载剂，优点是取材容易，能保持标本材 料的形状、大小和色泽；但是制成的玻片容易干燥和出现气泡，较小的病原物或孢 子易在水中颤动，只适宜于临时使用，不能长期保存
b.乳酚油：配方如下： 乳酸 20ml 甘油 40ml 石碳酸20ml 蒸馏水20ml 将上述四种成分混合即可。若在乳酚油中加入适量的染料，则兼有染色作用。 常用的染料有0.05-0.1%的棉兰或0.1%酸性红等即成乳酚油染剂。这种染剂可在下 述情况下使用：1)菌丝无色，不易看清，染色后观察更清晰：2)病原物过小，在 显微镜下不易观察，染色后易观察：3)病原物的菌丝或孢子有无隔膜不清楚，染色 后便于观察。 乳酚油使用方便，兼有透明和防腐作用，易于制片保存，因此常称这种制片为 半永久性玻片。但是制片时容易使玻片发生气泡，影响一些真菌孢子的大小，其成 份中含有的酸可溶解真菌的色素，使保存的标本褪色。乳酚油还可溶解菌丝体中的 脂肪类物质，而在玻片上形成油滴。 c.甘油明胶：按5g明胶、35ml甘油和30ml水配制。先将挑取在玻片上的甘 油明胶微热，待溶化和气泡消失后，放入干燥或含水份很少的标本，加盖玻片，并 轻压盖玻片擦去溢出的多余甘油明胶，制成的玻片平放10余天，干燥后可长期保存。 此方法适用于徒手切片制片。如遇含水较多的材料，可先将材料置于甘油中脱水。 取出后，用吸水纸吸去多余的甘油，再移入玻片上的甘油明胶内，继续上述步骤。 2.病原物诱发：有些病原物由于环境条件不适宜尚未产生特征性的病原结构， 需经诱发再进行制片镜检。较常用的是保湿诱发法，以某些低等真菌和维管束寄生 菌诱发为例：把新鲜的病害标本置于铺有湿滤纸的平皿内，放在25℃左右的条件下 13天（因病原不同而异），待长出病原物后制片观察。维管束病害则将一段病茎 纵剖，让其吸收无菌水后保湿培养，待观察到病原物后，制片观察
b．乳酚油：配方如下： 乳酸 20 ml 甘油 40 ml 石碳酸 20 ml 蒸馏水 20 ml 将上述四种成分混合即可。若在乳酚油中加入适量的染料，则兼有染色作用。 常用的染料有 0.05 – 0.1%的棉兰或 0.1%酸性红等即成乳酚油染剂。这种染剂可在下 述情况下使用：1）菌丝无色，不易看清，染色后观察更清晰；2）病原物过小，在 显微镜下不易观察，染色后易观察；3）病原物的菌丝或孢子有无隔膜不清楚，染色 后便于观察。 乳酚油使用方便，兼有透明和防腐作用，易于制片保存，因此常称这种制片为 半永久性玻片。但是制片时容易使玻片发生气泡，影响一些真菌孢子的大小，其成 份中含有的酸可溶解真菌的色素，使保存的标本褪色。乳酚油还可溶解菌丝体中的 脂肪类物质，而在玻片上形成油滴。 c．甘油明胶：按 5 g 明胶、35 ml 甘油和 30ml 水配制。先将挑取在玻片上的甘 油明胶微热，待溶化和气泡消失后，放入干燥或含水份很少的标本，加盖玻片，并 轻压盖玻片擦去溢出的多余甘油明胶，制成的玻片平放 10 余天，干燥后可长期保存。 此方法适用于徒手切片制片。如遇含水较多的材料，可先将材料置于甘油中脱水。 取出后，用吸水纸吸去多余的甘油，再移入玻片上的甘油明胶内，继续上述步骤。 2．病原物诱发：有些病原物由于环境条件不适宜尚未产生特征性的病原结构， 需经诱发再进行制片镜检。较常用的是保湿诱发法，以某些低等真菌和维管束寄生 菌诱发为例：把新鲜的病害标本置于铺有湿滤纸的平皿内，放在 250C 左右的条件下 1-3 天（因病原不同而异），待长出病原物后制片观察。维管束病害则将一段病茎 纵剖，让其吸收无菌水后保湿培养，待观察到病原物后，制片观察
实验四真菌一般形态和鞭毛菌亚门真菌 及其所致病害 真菌是具有真正细胞核、能产生孢子、没有叶绿素的有机体，它们能进行有性 生殖和（或）无性繁殖，营养体常为分枝的丝状体，是异养生物。 根据真菌的形态特点，特别是有性或无性子实体的形态特征进行分类。 鞭毛菌亚门真菌是一类低等真菌，绝大多数为水生，少数两栖和陆生，寄生程 度可有腐生、寄生、专性寄生。营养体从简单到复杂，由单细胞到根状菌丝和菌丝 体（发达、无隔、分枝）。无性繁殖产生孢子囊和有鞭毛的游动孢子，有性孢子为 合子和卵孢子。根据游动孢子鞭毛的特征，可将鞭毛菌亚门真菌分为根肿菌纲、壶 菌纲、丝壶菌纲和卵菌纲。 一，实验目的： 1.了解真菌的一般形态特点 2.了解鞭毛菌亚门真菌形态特点及其所致病害类型。 3.学习使用病原分类检查表。 二.实验材料及用具： 1.鞭毛菌亚门真菌玻片及其所致病害症状标本，各种霜霉病散装标本。 2.显微镜、载玻片、盖玻片、接种针、刀片、擦镜纸、吸水纸、浮载剂等。 三.实验内容： (一)真菌一般形态 1.菌丝体：镜检腐霉菌菌丝体玻片：菌丝发达无分隔，有分枝：镜检小麦全蚀 病菌菌丝体：菌丝发达，有隔膜，菌丝体分枝处主枝和分枝各形成一个隔膜，两个 隔膜呈“V”型。 2.吸器：镜检小麦白粉病组织玻片，可见小麦表皮寄主细胞中有蟹型吸器。 3.菌核：镜检油菜菌核病菌的菌核横切面玻片，观察菌核内部结构，分清疏丝 组织和拟薄壁组织。 4.菌索：镜检菌索玻片，可见许多菌丝组织在一起形成绳索状。 5.真菌有性和无性孢子，通过示范玻片了解合子、卵孢子、接合孢子、子囊孢 子、担孢子和分生孢子的形态，详细观察留待实验五至七进行
实验四 真菌一般形态和鞭毛菌亚门真菌 及其所致病害 真菌是具有真正细胞核、能产生孢子、没有叶绿素的有机体，它们能进行有性 生殖和（或）无性繁殖，营养体常为分枝的丝状体，是异养生物。 根据真菌的形态特点，特别是有性或无性子实体的形态特征进行分类。 鞭毛菌亚门真菌是一类低等真菌，绝大多数为水生，少数两栖和陆生，寄生程 度可有腐生、寄生、专性寄生。营养体从简单到复杂，由单细胞到根状菌丝和菌丝 体（发达、无隔、分枝）。无性繁殖产生孢子囊和有鞭毛的游动孢子，有性孢子为 合子和卵孢子。根据游动孢子鞭毛的特征，可将鞭毛菌亚门真菌分为根肿菌纲、壶 菌纲、丝壶菌纲和卵菌纲。 一．实验目的： 1．了解真菌的一般形态特点。 2．了解鞭毛菌亚门真菌形态特点及其所致病害类型。 3．学习使用病原分类检查表。 二．实验材料及用具： 1．鞭毛菌亚门真菌玻片及其所致病害症状标本，各种霜霉病散装标本。 2．显微镜、载玻片、盖玻片、接种针、刀片、擦镜纸、吸水纸、浮载剂等。 三．实验内容： （一）真菌一般形态： 1．菌丝体：镜检腐霉菌菌丝体玻片：菌丝发达无分隔，有分枝；镜检小麦全蚀 病菌菌丝体：菌丝发达，有隔膜，菌丝体分枝处主枝和分枝各形成一个隔膜，两个 隔膜呈“V”型。 2．吸器：镜检小麦白粉病组织玻片，可见小麦表皮寄主细胞中有蟹型吸器。 3．菌核：镜检油菜菌核病菌的菌核横切面玻片，观察菌核内部结构，分清疏丝 组织和拟薄壁组织。 4．菌索：镜检菌索玻片，可见许多菌丝组织在一起形成绳索状。 5．真菌有性和无性孢子，通过示范玻片了解合子、卵孢子、接合孢子、子囊孢 子、担孢子和分生孢子的形态，详细观察留待实验五至七进行