2、反转录生成CDNA 寡聚(dT)a-8 随机6碱基引物(R。) 点(dT) 随机6碱基引 以寡聚dT或随机 RNA DRNA RNA -(A 可回回份 6核苷酸为引物 反转录酶 第一能合成 m-Ba®-B园 (A) 回-西份 CDNA第一链 。第二链合成 以CDNA第一链为 模板合成CDNA第 加上EeootI)接头 二链 cDNA分级 Feo k 加接头准备 cDNA合成完毕，准名连接 与载体连接 图5一9cDNA合成过程示意图
为了得到有方向性的CDNA应该接上不同的接头 接头引物序列 croge h 加入带有酶切位点的赛 聚dT引物 (5'C↓TCGAG 天活性的精染m 高话性的反转录酶 微浆司 合成cDNA的第一链 上 Xho I CH CHs CH3 CHa CHa 5'CTCGAGTTTTTTTTTTTT 用RNase H分解RNA链 3'GAGCTCAAAAAAAAAAAA 鞋 合成CDNA第二链 加Eco RI.接头 .CTTAA5 Xh0I限制性核酸内切酶 用XhoI内切酶切割 CTTAAS 得到双接头有方向性 的cDNA
3、与噬菌体载体分子相选接 经内切酶切割 带有接头的CDNA 噬菌粒DNA 含有cDNA插入片段的重组噬菌粒DNA
4、堂首粒的包装 含有cDNA插入片段的重组噬菌粒DNA 体外蛋白质外壳的包装反应 有侵染和复制能力的成熟噬菌体 含有某种组织或器官的灌菌粒文库 进行基因组学的研究
mRNA 入做药体载体分子 -AAAAA3 RT-PCR 多I广正A4g 修饰 [悠饰 己H →置程整接 H占HHH爷与 -HHHH￥2 重组噬南体DNA 体外包装] 感染大肠杆苗 o> 入噬菌体作载体构建cDNA文库