第五章分子生物学研究方法 本章主要内容： 1、重组DNA技术发展史上的重大事件 2、常见DNA操作技术 3、基因克隆技术 4、基因表达研究技术 5、基因芯片及数据分析 6、蛋白质组学及其研究技术
Contents 1、重组DNA技术发展史上的重大事件 2、常见DNA操作技术 3、基因克隆技术 4、基因表达研究技术 5、基因芯片及数据分析 6、蛋白质组学及其研究技术
二、重组DNA的主要内容或步骤： 分离出带有目基因的DNA片段 o x 与载体连接形成重组DNA分子 的 转移到受体细胞（寄主细胞） 3 韩选出获得了重组DNA分子的 受体细胞 将目的基因克隆到表达载体 上，导入寄主细胞产生出人类 所需要的物质 县物赞黑春读 转基因动物转基因植物
表5-2重组DNA实验中常见的主要工具酶 酶类 功能 限制性核酸内切酶 识别并在特定位点切开DNA DNA连接酶 通过磷酸二酯健把两个或多个DNA片新连接成一个 DNA分子 DNA聚合酶I(大肠杆菌) 按5？到3'方向加入新的核#酸，补平DNA双链中的缺 反转录酶 按照RNA分子中的减基序列，根据减基互补原则合成 DNA链 多核苷酸酶 把磷酸集田加到多聚核苷酸链的5'-OH末端（进行末 端标记实验或用来进行DNA的连接) 末端转移酶 在双链核酸的3'末端加上多聚单核苷酸 DNA外切酶Ⅲ 从DNA链的3'末端逐个切除单核#酸 入噬菌体DNA外切酶 从DNA链的5？末端逐个切除单核苷酸 碱性磷酸酯酶 切除位于DNA链5'或3'末端的磷酸集田
三、基因克隆的主要载体象统 载体：载体是运送目的基因片段进入宿主细胞的工 具，基因工程中常用的载体(vector)主要包括质粒 (plasmid)、噬菌体(phage))和病毒(irus)三大类。这 些载体均需经人工构建，除去致病基因，并赋予一 些新的功能，如有利于进行筛选的标志基因、单一 的限制酶切点等