a 524基因敲除技术 概念： 基因敲除技术(gene knockout)又称基因打靶 (gene targeting)。这种技术是通过基因工程的方 法将一个结构已知但功能未知的基因去除，或用其 他序列相近的基因取代（又称基因敲入），然后从 整体观察实验动物，从而推测相应基因的功能。这 种人为地把实脸动物某一种有功能的基因完全缺失 的技术称为基因敲除技术
完全基因敲除 基因敲除技术 条件型基因敲除 1、完全基因敲除 >完全基因敲除是指通过同源重组法完全消除细胞 或者动物个体中的靶基因话性
基本原理 构建与乾基因同源(I0~15kb)的载体 外显子插有新霉素 疱疹病毒胸苷激 抗性基因（neo'》 酶(HV-tk)基因 作为正选择的标志 作为负选择 将重组体导入ES细胞 体外培养 新霉素(C418)和致死核苷类似物(GANC)作双重韩选 存活的ES细胞
林图x的发换传体-☐2D 方法 +后5描能 八同溪质州 T■■Ⅲ□ -OI%I▣■III口 构建载体→同源重组 0 ESm酸DNA 其他的华四 筛选X被敲除的ES细胞 随机插入 显微注射 回交得到X被敲除的动物 甜款现性#体 表型分析 4 嵌合体 + 酸 资位是业保老的程胞发有 黑毛杂合白毛纯合 aa 表型分析 Aa 图5-山裤因触除的主数技术菊略与步
2、 条件型基因敲除 条件型基因剔除是指某一特定细胞类型或细胞发 育的特定阶段剔除某一特定基因的技术。 常用的条件型基因敲除有： 噬菌体的Cre/儿oxp系统、Gin/Gix系统 酵母细胞的FLP/FRT象统、R/RS象统