PCR技术的原理 首先将双链DNA分子在临近沸点的温度下加 热分离成两条单链DNA分子，DNA聚合酶以单链 DNA为模板并利用反应混合物中的四种脱氧核苷 三磷酸合成新生的DNA互补链。因为DNA聚合酶 需要有一小段双链DNA来启动(“引导”)新链的合 成，所以，新合成的DNA链的起点是由加入到反 应混合物中的一对寡核苷酸引物在模板DNA链两 端的退火位点决定的
PCR全过程 待扩增的DNA片段+dNTP+Tris-HCI缓冲液 +两条引物+Taq DNA聚合酶+Mg2+ 95℃变性 72℃延伸1' 30” 25~30 ●在DNA聚合酶的作 ●双链DNA变性， 用下，从引物的3 形成单链模板DNA; 端加入脱氧核苷三 60℃退火30” 磷酸，并沿着模板 ●使引物与两条单链模 按5→3方向延 板DNA发生退火作用并 伸，合成新生DNA 结合在靶DNA区段两端 互补链。 的互补序列位置上
PCR 琼脂糖凝胶电泳 011.5 3-4小时 Reliable PCR from Every Sample 最终产物 紫外光观察
CDNA噬菌粒文库的主要步骤： 高质量mRNA的制备 J 反转录生成CDNA 与噬菌粒载体分子相连接 噬菌粒的包装
1、 高质量mRNA的制各 用试制盒提取总RNA 含有RA的总R达 一AAAAAAA 盖骄黌6-mr 加入与生物素相连的赛聚 一AAA (dT)引物温育 -B 加入与微磁球相连的抗生 物素蛋白 碱性吸附 用磁场吸附通过赛聚(dT引 5m7G- 物与抗生物素蛋白及强力微 洗脱 磁球相连的mRNA (水相 洗脱得到mRNA 图5-8 PolyATtractRN的分离纯化过程简图