第十一章 一、概述 高效毛细管电泳 generalization 分析 二、经典电泳分析法 traditional electrophoresis High performance capillary electrophoresis,HPCE 、高效毛细管电泳分析 法 第一节 high performance 概述 capillary electrophoresis generalization 下一页 2024/9/28
2024/9/28 第十一章 高效毛细管电泳 分析 一、概述 generalization 二、经典电泳分析法 traditional electrophoresis 三、高效毛细管电泳分析 法 high performance capillary electrophoresis 第一节 概述 generalization High performance capillary electrophoresis,HPCE
概述 generalization 在电解质溶液中，位于电场中的带电离子在电场力的作 用下，以不同的速度向其所带电荷相反的电极方向迁移的现 象，称之为电泳。由于不同离子所带电荷及性质的不同，迁 移速率不同，可实现分离。 1937年，Tise1ius(瑞典)将蛋白质混合液放在两段缓冲 溶液之间，两端施以电压进行自由溶液电泳，第一次将人血 清提取的蛋白质混合液分离出白蛋白和a、B、y球蛋白； 发现样品的迁移速度和方向由其电荷和淌度决定； 第一次的自由溶液电泳；第一台电泳仪； 1948年，获诺贝尔化学奖； (动画) 2024/9/28 页下
2024/9/28 一、概述 generalization 在电解质溶液中，位于电场中的带电离子在电场力的作 用下，以不同的速度向其所带电荷相反的电极方向迁移的现 象，称之为电泳。由于不同离子所带电荷及性质的不同，迁 移速率不同，可实现分离。 1937年，Tiselius(瑞典)将蛋白质混合液放在两段缓冲 溶液之间，两端施以电压进行自由溶液电泳，第一次将人血 清提取的蛋白质混合液分离出白蛋白和α、β、γ球蛋白； 发现样品的迁移速度和方向由其电荷和淌度决定； 第一次的自由溶液电泳；第一台电泳仪； 1948年，获诺贝尔化学奖； （动画）
经典电泳分析 traditional electrophoresis 利用电泳现象对某些化学或生物物质进行分离分析的方 法和技术叫电泳法或电泳技术。 按形状分类：U型管电泳、柱状电泳、板电泳； 按载体分类：滤纸电泳、琼脂电泳、聚丙烯酰胺电泳、 自由电泳； 传统电泳分析：操作烦琐，分离效率低，定量困难，无 法与其他分析相比。 1981年，Jorgenson和Luckas,用75m内径石英毛细管进 行电泳分析，柱效高达40万/m,促进电泳技术发生了根本变 革，迅速发展成为可与GC、HPLC相媲美的崭新的分离分析技 术 —高效毛细管电泳。 2024/9/28
2024/9/28 二、经典电泳分析 traditional electrophoresis 利用电泳现象对某些化学或生物物质进行分离分析的方 法和技术叫电泳法或电泳技术。 按形状分类：U型管电泳、柱状电泳、板电泳； 按载体分类：滤纸电泳、琼脂电泳、聚丙烯酰胺电泳、 自由电泳； 传统电泳分析：操作烦琐，分离效率低，定量困难，无 法与其他分析相比。 1981年，Jorgenson和Luckas，用75m内径石英毛细管进 行电泳分析，柱效高达40万/m，促进电泳技术发生了根本变 革，迅速发展成为可与GC、HPLC相媲美的崭新的分离分析技 术——高效毛细管电泳
三、高效毛细管电泳分析 high performance capillary electrophoresis 高效毛细管电泳在技术上采取了两项重要改进： 一是采用了0.05mm内径的毛细管，； 二是采用了高达数千伏的电压。 毛细管的采用使产生的热量能够较快散发，大大减 小了温度效应，使电场电压可以很高。 ·电压升高，电场推动力大，又可进一步使柱径变小， 柱长增加， ·高效毛细管电泳的柱效远高于高效液相色谱，理论塔 板数高达几十万块/米，特殊柱子可以达到数百万。 2024/9/28
2024/9/28 三、高效毛细管电泳分析 high performance capillary electrophoresis 高效毛细管电泳在技术上采取了两项重要改进： 一是采用了0.05mm内径的毛细管,； 二是采用了高达数千伏的电压。 • 毛细管的采用使产生的热量能够较快散发，大大减 小了温度效应，使电场电压可以很高。 • 电压升高，电场推动力大，又可进一步使柱径变小， 柱长增加， • 高效毛细管电泳的柱效远高于高效液相色谱，理论塔 板数高达几十万块/米，特殊柱子可以达到数百万
分离过程 电泳 V电流 电场作用下，毛细 中中中⊕中中⊕甲中①①⊙@⊕④® 8→ 管柱中出现：电泳现 ● 田⊕田①①田田①①©①①田田①①田 996e⊙e⊙9●e●●e●●e● 象和电渗流现象。 带电粒子的迁移速度=电泳+电渗流；两种速度的矢量和。 ”正离子：两种效应的运动方向一致，在负极最先流出； 中性粒子无电泳现象，受电渗流影响，在阳离子后流出； 阴离子：两种效应的运动方向相反。V电渗流>V电泳时，阴 离子在负极最后流出，在这种情况下，不但可以按类分离，除中 性粒子外，同种类离子由于受到的电场力大小不一样也同时被 相互分离。 (动画) 2024/9/28
2024/9/28 分离过程 电场作用下，毛细 管柱中出现：电泳现 象和电渗流现象。 带电粒子的迁移速度=电泳+电渗流；两种速度的矢量和。 正离子：两种效应的运动方向一致，在负极最先流出； 中性粒子无电泳现象，受电渗流影响，在阳离子后流出； 阴离子：两种效应的运动方向相反。ν电渗流 >ν电泳时,阴 离子在负极最后流出,在这种情况下,不但可以按类分离,除中 性粒子外,同种类离子由于受到的电场力大小不一样也同时被 相互分离。 （动画）